本发明专利技术涉及一种检测八宝丹指纹图谱的方法及八宝丹标准指纹图谱和用途，具体涉及一种检测八宝丹指纹图谱的方法、包含该方法的建立八宝丹标准指纹图谱的方法、八宝丹标准指纹图谱和应用。根据本发明专利技术的检测八宝丹指纹图谱的方法，所得到的色谱图中，峰数量较多，灵敏高，基线平稳、噪音小，响应敏锐，响应值大，分离度好。此外，空白溶剂对供试品溶液的测试不存在干扰，专属性良好。方法的精密度、稳定性和重复性良好。根据本发明专利技术的建立八宝丹标准指纹图谱的方法和所得到的八宝丹标准指纹图谱可以用于进行八宝丹的质量控制。于进行八宝丹的质量控制。
【技术实现步骤摘要】
一种检测八宝丹指纹图谱的方法及八宝丹标准指纹图谱和用途
[0001]本专利技术属于中药分析领域，涉及一种检测八宝丹指纹图谱的方法、包含该方法的建立八宝丹标准指纹图谱的方法、八宝丹标准指纹图谱和应用。
技术介绍
[0002]中药指纹图谱技术因可全面标示中药主要化学成分的特性及其比例的特点，越来越多用于中药的质量控制。色谱法是分析化学领域中发展较快，应用较广泛的分析方法之一，也是中指纹图谱最基本的技术。常用的色谱法有薄层色谱法、液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法，其中高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)具有应用范围广、分析速度快、灵敏度高等优点，是目前研究中药指纹图谱应用最广泛的方法。蒸发光散射检测器(Evaporative Light Scattering Detector，ELSD)是一种通用型质量检测器，可弥补在HPLC中应用最广的紫外检测器对检测物质必须具有吸收紫外光的生色团的要求。ELSD作为一种浓度型检测器，在无紫外或紫外末端吸收的未知化合物的纯度检测过程中，显示出极大的优越性。
[0003]八宝丹源自中药古方，具有清利湿热、活血解毒、去黄止痛等功效。适用于湿热蕴结所致发热、黄疸、小便黄赤、恶心呕吐、纳呆、肋痛腹胀、舌苔黄腻或厚腻干白，或湿热下注所致尿道灼热刺痛、小腹胀痛，以及传染性病毒性感染、急性胆囊炎、急性泌尿系统感染等。
[0004]现代药理学研究表明八宝丹具有抗炎、解热、镇痛、保肝、利胆、去黄等功效。临床实验显示，八宝丹胶囊治疗慢性胆囊炎总有效率高于胆舒胶囊。八宝丹胶囊辅助黄疸型病毒性肝炎治疗，可改善临床症状及肝功能，具有较好的退黄效果，疗效和苦黄胶囊相似；可有效地改善病毒性肝炎所致的难治性黄疸；对慢性病毒感染引起的肝细胞损伤具有一定的保护作用。
[0005]此外，八宝丹还可用于肿瘤的辅助治疗。八宝丹对体外培养的人肺腺癌A549细胞、人宫颈癌Hela细胞、人结肠癌LoVo细胞均有明显的杀伤作用。八宝丹抑制骨肉瘤U-20S细胞增殖并诱导其凋亡，药效呈时间和剂量的依赖关系。八宝丹与抗肿瘤药物联合用药，在临床上能够降低化疗药物的副作用，提高患者生活质量。此外，八宝丹可促进正常及荷瘤小鼠的T淋巴细胞免疫功能，可降低荷瘤小鼠外周血、脾脏和骨髓细胞中髓系来源的抑制性细胞(MDSCs)比例，改善肿瘤免疫。
[0006]近年，随着监管部门对药品质控提出更高要求，要求生产厂家严格控制产品批间稳定性，因此采用有效的质量控制方法尤为重要。
[0007]由于八宝丹原料成分多，涉及化学成分更多，对其进行标准指纹图谱的研究非常困难。因此，目前还没有关于检测八宝丹指纹图谱的方法，建立八宝丹标准指纹图谱的方法以及采用其进行质量控制的研究。
技术实现思路
[0008]为了更全面有效控制八宝丹的质量，本专利技术人经仔细研究采用HPLC-ELSD法并对流动相系统、流动相梯度洗脱条件、色谱柱、提取溶剂等条件进行研究，得到了一种检测八宝丹指纹图谱的方法，并由此得到了建立八宝丹标准指纹图谱的方法和八宝丹标准指纹图谱，其可以用于进行八宝丹的质量控制，由此完成了本专利技术。
[0009]本专利技术一方面提供了一种检测八宝丹指纹图谱的方法，所述方法用配备有蒸发光散射检测器(ELSD)的高效液相色谱仪进行检测，色谱条件如下：
[0010]色谱柱：BDS Hypersil
TM C
18
(5μm，250
×
4.6mm)；
[0011]流动相：0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)，
[0012]梯度洗脱条件如下：
[0013][0014]流速：0.8～1.2ml/min，优选1.0ml/min；
[0015]柱温：20～30℃，优选25℃；
[0016]进样量：20μl；
[0017]检测器条件：气体压力：20～40psi，优选40psi；漂移管温度：50～60℃，优选55℃；喷雾方式选自冷却至加热50％，例如10％加热、20％加热、30％加热、40％加热、50％加热等，优选加热40％；以及增益值：5-1000，优选为500。
[0018]本专利技术中，梯度洗脱中的百分数为体积百分数，例如，5％指的是5体积％。
[0019]本专利技术中，检测器条件中的气体压力有时也称作喷雾器气体流量或喷雾器流量。
[0020]检测八宝丹指纹图谱的方法中，用于进行检测的八宝丹供试品溶液可以如下配制：取取八宝丹粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得到供试品溶液。
[0021]本专利技术另一方面提供了一种建立八宝丹标准指纹图谱的方法，所述方法包括：
[0022](1)供试品溶液配制：
[0023]取八宝丹粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得；
[0024](2)对照品溶液的配制：
[0025]取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、胆酸、去氧胆酸、人参皂苷Re加甲醇制
成混合对照品溶液；
[0026](3)HPLC检测
[0027]将上述(1)和(2)的供试品溶液和对照品溶液用根据本专利技术上述的检测八宝丹指纹图谱的方法检测得到供试品指纹色谱图和对照品指纹色谱图；
[0028](4)生成标准指纹图谱
[0029]基于供试品指纹色谱图生成标准指纹图谱，选择八宝丹中主要成分且分离度较好的色谱峰作为特征峰并确定为共有峰；
[0030](5)共有峰的鉴定
[0031]对八宝丹指纹图谱中的共有峰鉴定。
[0032]在上述方法中，对于基于供试品指纹色谱图生成标准指纹图谱的方法没有特别限定，可以采用本领域中的常规方法。例如，可以通过将测定的八宝丹供试品色谱图导入国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012.130723版本)，将供试品色谱图之一设置为参照图谱，标准图谱生成方法例如为中位数法，同时采用例如多点校正法来建立八宝丹标准指纹图谱。
[0033]在上述方法中，共有峰的鉴定可以通过采用对照品溶液的色谱图的比对完成。
[0034]在根据本专利技术的建立八宝丹标准指纹图谱的方法中，对于用于建立标准指纹图谱的供试品数目没有特别限制，本领域技术人员可以容易地选择适合的供试品数目。一般而言，供试品数目可以为5个以上，或者10个以上，例如15个，上限例如是30个以下，20个以下等。
[0035]在上述八宝丹供试品溶液的配制过程中，对于八宝丹细粉的粒度没有特别限制，但是优选其为可以至少过中国药典中规定的三号筛的粒度，例如，八宝丹细粉可以过三号筛或四号筛。超声处理时间没有特别限制，只要实现充分萃取即可，例如可以为10～40分钟，优选30分钟。本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测八宝丹指纹图谱的方法，所述方法用配备有蒸发光散射检测器(ELSD)的高效液相色谱仪进行检测，色谱条件如下：色谱柱：BDS Hypersil
TM C
18
(5μm，250
×
4.6mm)；流动相：0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱条件如下：流速：0.8～1.2ml/min；柱温：20～30℃；进样量：20μl；检测器条件：气体压力：20～40psi；漂移管温度：50～60℃；喷雾方式选自冷却至加热50％；以及增益值：5-1000。2.根据权利要求1所述的检测八宝丹指纹图谱的方法，其中，流速：1.0ml/min；柱温：25℃；检测器条件：气体压力：40psi；漂移管温度：55℃；喷雾方式：加热40％；以及增益值：500。3.根据权利要求1所述的检测八宝丹指纹图谱的方法，其中，用于进行检测的八宝丹供试品溶液如下配制：取取八宝丹粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得到供试品溶液。4.一种建立八宝丹标准指纹图谱的方法，所述方法包括：(1)供试品溶液配制：取八宝丹粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得；(2)对照品溶液的配制：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、胆酸、去氧胆酸、人参皂苷Re加甲醇制成混合对照品溶液；(3)HPLC检测将上述(1)和(2)的供试品溶液和对照品溶液用...
【专利技术属性】
技术研发人员：关斌，阳丽华，肖惠琳，陈西翌，许玉珍，赖志成，陈晓琳，许舒瑜，郑珊珊，
申请(专利权)人：厦门中药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：
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