一种血细胞染色方法技术

本发明专利技术涉及血细胞染色技术领域，具体为一种血细胞染色方法，包括以下步骤：S1、取一管荧光试剂A，将缓冲液B直接倒入荧光试剂A管中后，盖好管盖，上下摇晃混匀5

【技术实现步骤摘要】
一种血细胞染色方法


[0001]本专利技术涉及血细胞染色
，具体为一种血细胞染色方法。

技术介绍

[0002]血液中血细胞的比例为45%（v/v），血细胞包括了红细胞（RBC）、白细胞（WBC）和血小板（PLT），其中WBC通常分为五类：淋巴细胞（lym）、单核细胞（Mon）、嗜碱性粒细胞（Bas）、嗜酸性粒细胞（Eos）、中性粒细胞（Neu）。在正常的末梢血中，这些血细胞各占一定的比例。然而，当受检者患有疾病时，某种特定血细胞的数目会增加或减少。因此，在临床检查领域，可以通过对白细胞计数和分类来获得对疾病诊断极为有用的信息。荧光染色是血细胞观察的一项重要技术手段，利用荧光物质穿透细胞膜与细胞内的DNA、RNA结合，在激发光的照射下能够发射出荧光。成熟的RBC没有细胞核，荧光染色不着色；WBC含有DNA和RNA，能够用荧光染色将WBC进行计数和分类，PLT含有RNA也能荧光显色计数。常规的血细胞手工染色，是在显微镜下人工移动查找载玻片上的细胞，全程手工操作，人工计数，比较繁琐，效率较低。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种血细胞染色方法，以解决上述
技术介绍
中手工的血细胞染色，操作步骤较多，效率较低的问题。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种血细胞染色方法，包括以下步骤：S1、取一管荧光试剂A，将缓冲液B直接倒入荧光试剂A管中后，盖好管盖，上下摇晃混匀5
‑
90秒；S2、用50ul一次性的无菌吸管吸取10
‑
50ul全血，混入S1中，充分混匀5
‑
90秒；S3、用0.5ml
‑
5ml一次性无菌吸管将S2中的溶液吸取0.2ml
‑
0.5ml充入一次性的微流控卡壳中；S4、将微流控卡壳插入血细胞分析仪（POCT），自动分析出样本的测试结果；所述荧光试剂A为10
‑
30ul/支烤干了的荧光试剂， 由荧光试剂C经过制作工艺X制成；所述荧光试剂C包括SYBR Green I、吖啶橙、碘化丙啶、吖啶黄、4',6
‑
二脒基
‑2‑
苯基吲哚（DAPI）、奎纳克林芥子、赫斯特33342、沉香磷化氢、硫代黄素T和樱草素中的一种荧光试剂或多种的荧光试剂组合物；所述缓冲液B为已经分装好的470
‑
1500ul/支的缓冲液，由缓冲溶液D经过制作工艺Y制成；缓冲溶液D包括缓冲剂E、防腐剂和溶剂。
[0005]优选地，荧光试剂C为吖啶橙和4',6
‑
二脒基
‑2‑
苯基吲哚（DAPI）的组合物。单一荧光试剂加大剂量染色，血细胞会较快的凋亡，且吖啶橙和4',6
‑
二脒基
‑2‑
苯基吲哚（DAPI）的组合物来染色遗传物质的显色效果最好；优选地，缓冲剂E包括磷酸盐、三羟甲基氨基盐酸盐（Tris）、三乙醇胺（TEA）、N
‑2‑
羟乙基哌嗪
‑
N
’‑2‑
乙磺酸（HEPES）、N
‑3‑
（羟甲基）甲基
‑2‑
氨基乙磺酸（TES）、三羟甲基甲胺基丙磺酸（TAPS）、硼酸盐、3
‑
(N
‑
吗啉基)丙磺酸（ MOPS）、N
‑
氨基甲酰甲基乙磺酸（ACES）、哌嗪
‑
N，N
’‑
二（2
‑
乙磺酸）（PIPES）中的一种或多种的组合物。
[0006]优选地，缓冲剂E为磷酸盐，并不是磷酸盐是缓冲溶液中最好的，主要是血液存在的血浆环境也是磷酸盐体系，是最接近血液生存环境的。
[0007]优选地，防腐剂包括叠氮化钠、硫柳汞、庆大霉素、Proclin150、Proclin200、Proclin300和Proclin5000中的一种或多种的组合物。
[0008]优选地，溶剂包括水、甲醇、乙醇、乙二醇、乙腈、甘油、乙酸乙酯、丙酮、二甲亚砜、四氢呋喃中的一种或多种的组合物。
[0009]所述制作工艺X的具体过程如下，S1 称量荧光试剂C、D
‑
海藻糖、溶剂依次放入干净的透明的玻璃瓶，盖上瓶盖摇晃至溶解充分，；配比后的荧光试剂C的含量为0.05
‑
5g/L、D
‑
海藻糖含量为0.5
‑
35g/L；S2 用10
‑
100ml注射器连接0.22um或0.45um过滤头，过滤S1中的液体放置在10
‑
100ml干净的棕色玻璃瓶，4至8度冷藏保存；S3 将S2中的荧光试剂分装成10
‑
30ul/支，放置在37度至60度烤箱烤干，或者冷冻干燥后备用，室温避光干燥储存。
[0010]上述制作工艺X的优点：（1）单人份提供，即开即用，增加了试剂的开瓶有效期；（2）单人份提供，方便客户计划采购与使用；（3)干粉装供给，降低了试剂的批间差，提高了试剂的稳定性，有效期更有保证；（4）干分装试剂方便运输、储存。
[0011]所述制作工艺Y的具体过程如下，且配比后各物质含量为：缓冲剂 E 6
‑
15g/L,防腐剂0.1
‑
0.5 mL/L,其余物质为溶剂；S1 量取溶剂、缓冲剂E依次加入烧杯中，搅拌溶解完全；S2 称量氯化钠、含量比范围0.65%
‑
0.85%、放入S1中的烧杯中，搅拌溶解完全；S3 称量乙二酸四乙酸二钠或乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钾，含量为1.5
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2.2mg/ml、放入S2中的烧杯中，搅拌溶解完全；S4 量取防腐剂放入S3的烧杯中，搅拌均匀；S5用0.1%
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10%HCL调S4溶液至pH7.3
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7.7，搅拌均匀，静置15
‑
60分钟；S6 用0.22um或0.45um滤头过滤S5中的液体后放置在干净的透明试剂瓶，室温密闭保存；S7 将S6中的缓冲液分装成470
‑
1500ul/支备用，室温密闭储存。
[0012]上述制作工艺Y的优点：（1）单人份提供，即开即用，增加了试剂的开瓶有效期；（2）单人份提供，方便客户计划采购与使用；（3）严格控制渗透压、pH值的细胞等渗溶液，血细胞能长时间保持正常形态、活性。
[0013]所述微流控卡壳包括卡壳本体、卡壳盖、加样孔、观察室1、观察室2、排气孔1和排气孔2；卡壳盖盖在卡壳本体的上表面，卡壳盖为塑料材质，卡壳本体为玻璃材质；卡壳本体上表面左端的中间位置开设有加样孔；卡壳本体中部中心位置前后两边分别开设有观察室1和观察室2；观察室1和观察室2的右方分别对应开设有排气孔1和排气孔2；观察室1和观察室2的长、宽、高不同、观察室1高度低于观察室2高度，且观察室1和观察室2的长、宽和高相交的
位置均为圆弧状、非成夹角状；加样孔分别与观察室1和观察室2通过通道本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血细胞染色方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、取一管荧光试剂A，将缓冲液B直接倒入荧光试剂A管中后，盖好管盖，上下摇晃混匀5
‑
90秒；S2、用50ul一次性的无菌吸管吸取10
‑
50ul全血，混入S1中，充分混匀5
‑
90秒；S3、用0.5ml
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5ml一次性无菌吸管将S2中的溶液吸取0.2ml
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0.5ml充入一次性的微流控卡壳中；S4、将微流控卡壳插入血细胞分析仪（POCT），自动分析出样本的测试结果；所述荧光试剂A为10
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30ul/支烤干了的荧光试剂，由荧光试剂C经过制作工艺X制成；所述荧光试剂C包括SYBR Green I、吖啶橙、碘化丙啶、吖啶黄、4',6
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二脒基
‑2‑
苯基吲哚（DAPI）、奎纳克林芥子、赫斯特33342、沉香磷化氢、硫代黄素T和樱草素中的一种荧光试剂或多种的荧光试剂组合物；所述缓冲液B为已经分装好的470
‑
1500ul/支的缓冲液，由缓冲溶液D经过制作工艺Y制成；缓冲溶液D包括缓冲剂E、防腐剂和溶剂。2.根据权利要求1所述的一种血细胞染色方法，其特征在于：所述荧光试剂C为吖啶橙和4',6
‑
二脒基
‑2‑
苯基吲哚（DAPI）的组合物。3.根据权利要求1所述的一种血细胞染色方法，其特征在于：所述缓冲剂E包括磷酸盐、三羟甲基氨基盐酸盐（Tris）、三乙醇胺（TEA）、N
‑2‑
羟乙基哌嗪
‑
N
’‑2‑
乙磺酸（HEPES）、N
‑3‑
（羟甲基）甲基
‑2‑
氨基乙磺酸（TES）、三羟甲基甲胺基丙磺酸（TAPS）、硼酸盐、3
‑
(N
‑
吗啉基)丙磺酸（ MOPS）、N
‑
氨基甲酰甲基乙磺酸（ACES）、哌嗪
‑
N，N
’‑
二（2
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乙磺酸）（PIPES）中的一种或多种的组合物。4.根据权利要求3所述的一种血细胞染色方法，其特征在于：所述缓冲剂E为磷酸盐。5.根据权利要求1所述的一种血细胞染色方法，其特征在于：所述防腐剂包括叠氮化钠、硫柳汞、庆大霉素、Proclin150、Proclin200、Proclin300和Proclin5000中的一种或多种的组合物。6.根据权利要求1所述的一种血细胞染色方法，其特征在于：所述溶剂包括水、甲醇、乙醇、乙二醇、乙腈、甘油...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒德海，鲁晓欢，刘彤，孙波，郜洸，
申请(专利权)人：深圳锐视生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：