同步鉴别食品中多种动物源性成分的多重RT-PCR预混试剂冻干球及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体公开了同步鉴别食品中多种动物源性成分的多重RT

【技术实现步骤摘要】
同步鉴别食品中多种动物源性成分的多重RT
‑
PCR预混试剂冻干球及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地说，涉及同步鉴别食品中多种动物源性成分的多重RT
‑
PCR预混试剂冻干球及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]由于肉类掺假的情况屡见不鲜，不仅侵害了消费者利益，也会对整个肉类产业造成巨大影响，因此需要可靠的肉类快速真伪鉴别技术，作为相关部门对肉类食品安全进行监管的重要检测手段。
[0003]多重实时荧光PCR技术应用在物种鉴别领域，具有特异性强、灵敏准确、高通量和低成本的优点。但由于实时荧光PCR反应体系中的核心组分Taq酶的活性对温度较为敏感，且荧光染料需要避光等诸多因素，因此这一类试剂在保存和运输条件上的要求十分苛刻。液体状态的试剂只能低温避光保存以避免其性状发生变化从而影响使用效果。其次，目前市面上应用于物种检测的荧光PCR产品多为各个组分独立封装的液体试剂盒形式，除了运输和保存的弊端外，在使用时需要人工配制反应液，操作繁琐且增加了误差和错误率。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备多重RT
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PCR预混试剂冻干球的方法，其特征在于，所述冻干球包括多重荧光PCR反应体系和保护剂，所述多重荧光PCR反应体系包含5对特异性引物组合，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1
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10所示，所述保护剂包括聚乙二醇8000、Triton X
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100、甘露醇和海藻糖。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述保护剂包括：19.92~20.28wt%聚乙二醇8000、1.74~1.86wt% Triton X
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100、6.06~6.24wt%甘露醇、6.06~6.24wt%海藻糖。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，每20μL所述多重荧光PCR反应体系包含：SYBR Green
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Master预混液10μL，SEQ ID NO.1
‑
2所示的引物各2.8~3pmol、SEQ ID NO.3
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4所示的引物各4.2~4.5pmol、SEQ ID NO.5
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6所示的引物各6.2~6.5pmol、SEQ ID NO.7
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8所示的引物各2.3~2.5pmol、SEQ ID NO.9
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10所示的引物各3.3~3.5pmol，其余体积用ddH2O补足。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述多重荧光PCR反应体系与所述保护剂的体积比为1：0.2。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，包括将所述多重荧光PCR反应体系与所述保护剂混合后，先滴入液氮再进行冷冻干燥的步骤；所述冷冻干燥的工艺顺序依次为：预冻
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40℃，0.5~1h；主干燥
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40℃，0.1mbar，0.5~1h；

【专利技术属性】
技术研发人员：王守伟，韦忆萱，李家鹏，李金春，赵燕，
申请(专利权)人：中国肉类食品综合研究中心，
类型：发明
国别省市：