一种类蛇毒三肽的合成方法技术

本发明专利技术涉及一种类蛇毒三肽的合成方法，该方法以3

【技术实现步骤摘要】
一种类蛇毒三肽的合成方法


[0001]本专利技术属于多肽液相合成领域，涉及一种类蛇毒三肽的合成方法，尤其是涉及一种游离类蛇毒三肽的合成方法。

技术介绍

[0002]类蛇毒三肽，其游离的化学结构式如下：
[0003][0004]序列表达：Beta
‑
Ala
‑
Pro
‑
Dab
‑
NHBzl,是一种模拟蛇毒毒素Waglerin I活性的小肽,临床试验表明类蛇毒三肽能够通过抑制肌肉收缩而减少皱纹的产生,具有优秀的光滑和迅速祛皱作用。导致肌肤产生紧缩的现象，使得松弛的肌肤紧致更加有弹性的一组物物种，可以使皮肤增加胶原蛋白成分的美容方法，现在国际大品牌奢侈护肤品中比较流行使用。传统的合成方式通过固相合成，由于多肽分子量小，树脂的使用量大，不具有生产优势，优先选择液相合成。如专利CN201911420787.6公开了一种类蛇毒三肽的液相合成方法，包括以下步骤：Boc
‑
Asn
‑
OH制备，Boc
‑
Ala(CN)
‑
NHBn的制备，H
‑
Ala(CN)
‑
NHBn TFA盐的制备，Cbz
‑
Beta
‑
Ala(CN)
‑
Pro
‑
OMe的制备，Cbz
‑
Beta
‑
Ala(CN)
‑
Pro
‑
OH的制备，Cbz
‑
Beta
‑
Ala
‑
Pro
‑
Ala(CN)
‑
NHBn，类蛇毒三肽的制备，用水/乙腈结晶得到白色固体。尽管该方法避免了固相合成最后需要液相纯化，但成本仍居高不下。
[0005]如上述专利类似的液相合成目前常用的保护基团策略是Boc保护法与Cbz保护法。Boc保护法由于序列中含有一个非天然氨基酸Dab，是含二个氨基的氨基酸，涉及Boc的选择性保护其中一个氨基，使得制备合适的侧链保护Dab的合成成本高，也是制约类蛇毒三肽合成成本主要原材料，如Dab(Boc)
‑
OMe合成难度大，价格昂贵。而采用Cbz保护法最后脱除Cbz需要使用Pd/C，使用重金属，对于用于化妆品具有一定的安全隐患，并且Pd/C的价格也是非常昂贵的。另外液相合成通常使用缩合剂进行缩合，缩合剂在液相合成中的成本比重比较大，为此我们开发了一种采用邻苯二甲酰基保护法并且原料制备简单，极大的降低缩合剂使用，合成工艺简单的制备工艺。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种原料易得、产品纯度高、操作简便并适合于工业化生产的类蛇毒三肽的合成方法。
[0007]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：一种类蛇毒三肽的合成方法，该方
法以3
‑
邻苯二甲酰亚胺基丙酸为起始原料，然后进行酰氯化，再与脯氨酸缩合，得到的片段与侧链邻苯二甲酰保护的L
‑
2,4
‑
二氨基丁酰苄胺盐酸盐进行缩合，制得的邻苯二甲酰保护的类蛇毒三肽，最后通过肼解脱掉邻苯二甲酰保护基后得到游离的类蛇毒三肽。
[0008]上述方法合成类蛇毒三肽的反应过程如下所示：
[0009]步骤(1)
[0010][0011]步骤(2)
[0012][0013]步骤(3)
[0014][0015]所述方法具体包括以下步骤：
[0016](1)3
‑
邻苯二甲酰亚胺基丙酸为起始原料，进行酰氯化，再与脯氨酸缩合
[0017](1
‑
1)在反应容器中加入3
‑
邻苯二甲酰亚胺基丙酸和氯化亚砜，搅拌溶解后，除去氯化亚砜，加入二氯甲烷制得混合溶液；
[0018](1
‑
2)在室温下将步骤(1
‑
1)所得混合溶液滴加到脯氨酸碱水溶液中，调节其pH至8
‑
9，然后常温反应4
‑
6小时；
[0019]所述的3
‑
邻苯二甲酰亚胺基丙酸与脯氨酸的质量比为1:0.6
‑
1.5，优选3
‑
邻苯二甲酰亚胺基丙酸与脯氨酸的质量比为1:1。
[0020](1
‑
3)待步骤(1
‑
2)反应结束后，调节pH至1
‑
2，后经萃取、水洗、旋蒸，即得到3
‑
邻苯二甲酰亚胺基丙酰脯氨酸；
[0021](2)侧链邻苯二甲酰保护的L
‑
2,4
‑
二氨基丁酰苄胺盐酸盐的制备：
[0022](2
‑
1)向反应容器中加入Boc
‑
L
‑
2,4
‑
二氨基丁酸、碳酸钠水溶液，冷却至0
‑
5℃；
[0023](2
‑
2)加入N
‑
乙氧甲酰邻苯二甲酰亚胺，室温反应6
‑
8小时；所述的N
‑
乙氧甲酰邻苯二甲酰亚胺与Boc
‑
L
‑
2,4
‑
二氨基丁酸的质量比为1
‑
2:1；
[0024](2
‑
3)反应结束后，乙醚洗涤水层，然后水层调节其pH至2
‑
3，加入乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，有机层用水洗2
‑
3次，然后加入无水硫酸钠干燥后经过滤、浓缩、结晶制得Boc
‑
L
‑
Dab(Pht)
‑
OH，再于50
‑
60℃干燥待用；
[0025](2
‑
4)将步骤(2
‑
3)所得Boc
‑
L
‑
Dab(Pht)
‑
OH加入四氢呋喃以及三乙胺，冷却至
‑
10
‑
0℃，滴加如氯甲酸异丙酯，0
‑
5℃反应1
‑
2小时，然后加入苄胺，0
‑
5℃反应6
‑
8小时，然后加入乙酸乙酯以及水，加入盐酸调节其pH至3
‑
4，分层，有机层用水洗2
‑
3次，然后加入无水硫酸钠干燥后经过滤、浓缩、结晶制得Boc
‑
L
‑
Dab(Pht)
‑
NBzl，再于50
‑
60℃干燥待用；
[0026]所述的苄胺与Boc
‑
L
‑
Dab(Pht)
‑
OH的质量比为0.8
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种类蛇毒三肽的合成方法，其特征在于，该方法以3
‑
邻苯二甲酰亚胺基丙酸为起始原料，然后进行酰氯化，再与脯氨酸缩合，得到的片段与侧链邻苯二甲酰保护的L
‑
2,4
‑
二氨基丁酰苄胺盐酸盐进行缩合，制得的邻苯二甲酰保护的类蛇毒三肽，最后通过肼解脱掉邻苯二甲酰保护基后得到游离的类蛇毒三肽。2.根据权利要求1所述的类蛇毒三肽的合成方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：(1)3
‑
邻苯二甲酰亚胺基丙酸为起始原料，进行酰氯化，再与脯氨酸缩合(1
‑
1)在反应容器中加入3
‑
邻苯二甲酰亚胺基丙酸和氯化亚砜，搅拌溶解后，除去氯化亚砜，加入二氯甲烷制得混合溶液；(1
‑
2)在室温下将步骤(1
‑
1)所得混合溶液滴加到脯氨酸碱水溶液中，调节其pH至8
‑
9，然后常温反应4
‑
6小时；(1
‑
3)待步骤(1
‑
2)反应结束后，调节pH至1
‑
2，后经萃取、水洗、旋蒸，即得到3
‑
邻苯二甲酰亚胺基丙酰脯氨酸；(2)侧链邻苯二甲酰保护的L
‑
2,4
‑
二氨基丁酰苄胺盐酸盐的制备：(2
‑
1)向反应容器中加入Boc
‑
L
‑
2,4
‑
二氨基丁酸、碳酸钠水溶液，冷却至0
‑
5℃；(2
‑
2)加入N
‑
乙氧甲酰邻苯二甲酰亚胺，室温反应6
‑
8小时；(2
‑
3)反应结束后，乙醚洗涤水层，然后水层调节其pH至2
‑
3，加入乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，有机层用水洗2
‑
3次，然后加入无水硫酸钠干燥后经过滤、浓缩、结晶制得Boc
‑
L
‑
Dab(Pht)
‑
OH，再于50
‑
60℃干燥待用；(2
‑
4)将步骤(2
‑
3)所得Boc
‑
L
‑
Dab(Pht)
‑
OH加入四氢呋喃以及三乙胺，冷却至
‑
10
‑
0℃，滴加如氯甲酸异丙酯，0
‑
5℃反应1
‑
2小时，然后加入苄胺，0
‑
5℃反应6
‑
8小时，然后加入乙酸乙酯以及水，加入盐酸调节其pH至3
‑
4，分层，有机层用水洗2
‑
3次，然后加入无水硫酸钠干燥后经过滤、浓缩、结晶制得Boc
‑
L
‑
Dab(Pht)
‑
NBzl，再于50
‑
60℃干燥待用；(2
‑
5)将步骤(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：金健林，严承飞，金萍，
申请(专利权)人：江西海思加生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：