一种经半理性改造提升活性的腈水解酶突变体制造技术

本发明专利技术公开了一种经半理性改造提升活性的腈水解酶突变体，属于酶工程领域。本发明专利技术为了提高腈水解酶PCC6803酶活，通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，利用CAST建库NNK突变，通过已构建的烟酸传感器作为初筛工具，利用荧光强度作为筛选依据，将获得的有效果(荧光强度低的)的两个库的位点进行组合突变，再利用传感器进行筛选，然后将荧光强度低的突变体重新构建至表达载体及宿主中表达及纯化，利用HPLC测定纯酶比酶活，最终获得比酶活比野生酶WT提高了57％、180％、555％的突变体。555％的突变体。555％的突变体。

【技术实现步骤摘要】
一种经半理性改造提升活性的腈水解酶突变体


[0001]本专利技术涉及一种经半理性改造提升活性的腈水解酶突变体，属于酶工程领域。

技术介绍

[0002]腈水解酶属于腈水解酶超家族，是一种重要的工业用酶，可以将腈类化合物一步反应生成羧酸类物质和氨。羧酸类物质在大宗化学品、医药中间体等有广泛的应用价值，目前烟酸和扁桃酸可以在工业上进行规模化生产，烟酸可以作为食品添加剂、维生素及医药中间体存在。酶法合成相比化学法具有反应条件温和、高立体选择性和不需要添加昂贵的催化剂等优势，既可以产生巨大的经济效益，也可以减轻对环境的污染。但是天然的腈水解酶酶活较低使得其在工业应用中存在弊端，因此通过蛋白质工程改造腈水解酶提高酶活可以为其工业应用做出贡献。
[0003]由于野生型腈水解酶通常难以适应工业环境需求，因此通过理性和非理性蛋白质改造方法提高腈水解酶催化性能成为研究热点。DeSantis等通过点饱和突变技术改造野生型腈水解酶，获得的突变体A190H能够催化3M 3
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羟基戊二腈完全水解合成(R)
‑4‑/>氰基
‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种腈水解酶突变体，其特征在于，所述突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1的腈水解酶的第170位、第197位、第198位中的两个以上的位点进行突变得到的。2.根据权利要求1所述的腈水解酶突变体，其特征在于，所述突变体为一下(a)～(c)任一：(a)将氨基酸序列SEQ ID NO.1的第170位的蛋氨酸突变成甘氨酸，将第197位的蛋氨酸突变成苯丙氨酸，将第198位的缬氨酸突变成异亮氨酸；(b)将氨基酸序列SEQ ID NO.1的第170位的蛋氨酸突变成甘氨酸，将第198位的缬氨酸突变成天冬氨酸；(c)将氨基酸序列SEQ ID NO.1的第170位的蛋氨酸突变成甘氨酸，将第197位的蛋氨酸突变成苯丙氨酸，将第198位的缬氨酸突变成亮氨酸。3.一种编码权利要求1或2所述腈水解酶突变体的基因。4.一种携带权利要求3所述基因的重组载体。5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：周哲敏，韩来闯，刘欣悦，崔文璟，程中一，刘中美，周丽，郭军玲，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：