一种提高大球盖菇木质纤维素酶活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高大球盖菇木质纤维素酶活性的方法。本发明专利技术首次实现大球盖菇中碳代谢转录因子(CreA)基因沉默，获得了能够使大球盖菇基因沉默的体系，沉默体系中具有如SEQ ID NO.3所示的干扰片段基因序列；本发明专利技术通过在特异性引物中引入KpnⅠ酶切位点和SpeⅠ酶切位点，构建的CreA沉默载体在转至大球盖菇体内后可以显著降低大球盖菇CreA基因的表达；同时碳代谢转录因子(CreA)基因的沉默也可以解除碳代谢阻遏效应，使大球盖菇纤维素酶和半纤维素酶活性显著提高，从而增强秸秆的降解效率。因此，本发明专利技术对大球盖菇栽培生产过程中提高栽培基质的利用效率和缩短栽培周期有重要的意义。义。义。

【技术实现步骤摘要】
一种提高大球盖菇木质纤维素酶活性的方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体的说，涉及一种提高大球盖菇木质纤维素酶活性的方法。

技术介绍

[0002]食用真菌属于丝状真菌中的一种，主要利用农林废弃资源（例如：农作物秸秆和林下枯枝落叶）为基质进行生长，并且是通过分泌木质纤维素酶类将生物界中复杂的木质纤维素进行分解、吸收和利用。利用微生物对农业废弃资源进行生物降解是绿色循环的方式之一，而食用真菌不仅能够转化农业废弃资源，还能够产生具有经济价值的蘑菇子实体，所以更是具有广阔应用前景的微生物之一。
[0003]在食用菌中，大球盖菇以其较强的环境适应能力，能够在田间和林下进行栽培，并且近年来推广栽培的面积也在不断的扩大。然而粗犷的栽培模式对农作物秸秆的降解效率仍然有限，一方面需要我们不断的优化栽培工艺，另一方面采用基因工程手段进行分子育种，也是未来微生物发展的方向。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于提供一种提高大球盖菇木质纤维素酶活性的方法。本专利技术通过利用碳代谢转录因子(CreA)基因的沉默解除碳代谢阻本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大球盖菇碳代谢转录因子CreA基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，编码的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。2.一种用于沉默权利要求1所述的大球盖菇碳代谢转录因子CreA基因的CreA基因特异性片段，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，该序列长度为332bp。3.一种大球盖菇碳代谢转录因子CreA基因的沉默体系，其特征在于，其具有如SEQIDNO.3所示的序列长度为332bp的CreA基因特异性片段。4.一种如权利要求3所述的大球盖菇碳代谢转录因子CreA基因的沉默体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：设计特征引物CreA
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1F和CreA
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1R：CreA
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1F：ATTAGGTACCATGGGCTCCGACCAGCAGCreA
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1R:ATTACTAGTGGCGTCGTAGGCAGTCCCGA提取大球盖菇RNA，反转录成CDNA作为模板，采用特征引物CreA
‑
1F和CreA
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1R进行PCR...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒯本科，郝海波，吴声栋，张鼎宇，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：