促进脐带血间充质干细胞增殖的基因抑制剂制造技术

本发明专利技术提供了一种促进脐带血间充质干细胞增殖的基因抑制剂，属于生物医学技术领域。所述促进脐带血间充质干细胞增殖的基因抑制剂为lnc

【技术实现步骤摘要】
促进脐带血间充质干细胞增殖的基因抑制剂


[0001]本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及一种促进脐带血间充质干细胞增殖的基因抑制剂。

技术介绍

[0002]干细胞是一种具备一定的增殖和分化潜能的细胞，其能够实现自我复制更新和高度分化。根据来源的不同，干细胞被分为胚胎干细胞，造血干细胞，神经干细胞，骨髓间充质干细胞，脂肪干细胞等。脐带血间充质干细胞是来源于脐带血的一种干细胞，作为组织工程中使用的一种种子细胞，其不仅来源广泛，而且取材也十分的方便。但是随着培养时间的延长，脐带血间充质干细胞会逐渐衰老且增殖能力下降，从而影响脐带血间充质干细胞的应用。
[0003]随着高通量测序技术的发展，过去被认为是转录噪音的长链非编码RNA引起了越来越多的科学家关注。长链非编码RNA是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA，其通常无蛋白质编码能力。现有的研究显示，长链非编码RNA在细胞增殖，细胞周期，细胞分化，细胞凋亡等多种生物学功能中具有重要的作用。然而，关于长链非编码RNA在脐血间充质干细胞衰老和增殖中的研究还较少，因此，研究长链非编码RNA在脐血间充质干细胞衰老和增殖中的功能对于有效的延缓脐带血间充质干细胞衰老，增加脐带血间充质干细胞增殖能力具有重要的意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种促进脐带血间充质干细胞增殖的基因抑制剂。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了一种促进脐带血间充质干细胞增殖的基因抑制剂，所述基因抑制剂为lnc
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AC005307.1的基因抑制剂。
[0006]优选地，所述lnc
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AC005307.1的基因序列如SEQ ID NO.11所示。
[0007]优选地，所述基因抑制剂为特异性靶向抑制lnc
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AC005307.1的ShRNA。
[0008]优选地，所述ShRNA的序列如SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示。
[0009]其次，本专利技术提供了一种基因抑制剂在制备脐带血间充质干细胞增殖药物中的用途，所述基因抑制剂为lnc
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AC005307.1的基因抑制剂。
[0010]优选地，所述lnc
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AC005307.1的基因序列如SEQ ID NO.11所示。
[0011]优选地，所述基因抑制剂为特异性靶向抑制lnc
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AC005307.1的ShRNA，所述ShRNA的序列如SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示。
[0012]除此之外，本专利技术提供了一种促进脐带血间充质干细胞增殖的药物组合物，所述药物组合物包括特异性抑制lnc
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AC005307.1表达的ShRNA，所述lnc
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AC005307.1的序列如SEQ ID NO.11所示；所述ShRNA的序列如SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示。
[0013]优选地，所述药物组合物还包括与所述ShRNA相配伍的药学上可接受的药物载体和辅料。
本专利技术的有益效果是：本专利技术发现通过利用lnc
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AC005307.1的ShRNA来特异性抑制脐带血间充质干细胞中的lnc
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AC005307.1的表达能够有效的促进脐带血间充质干细胞的增殖，并且能够调控P21，P16，Cyclin
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D1和Cyclin
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E1的蛋白表达，因此可将lnc
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AC005307.1的基因抑制剂用于制备促进脐带血间充质干细胞增殖的药物。
附图说明
[0014]图1脐带血间充质干细胞复制性衰老过程中lnc
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RP11
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266K4.9的表达量差异；图2脐带血间充质干细胞复制性衰老过程中lnc
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HOTAIR的表达差异；图3脐带血间充质干细胞复制性衰老过程中lnc
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RP11
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272B17.1的表达差异；图4脐带血间充质干细胞复制性衰老过程中lnc
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AC005307.1的表达差异；图5 脐带血间充质干细胞复制性衰老过程中lnc
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AC091814.2的表达差异；图6 本专利技术设计的Sh
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lnc
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AC005307.1的抑制剂效果检测结果；图7 敲减Sh
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NC和Sh
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lnc
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AC005307.1对于脐带血间充质干细胞增殖的调控；图8 敲减Sh
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NC和Sh
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lnc
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AC005307.1对于脐带血间充质干细胞复制性衰老的调控；图9 敲减Sh
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NC和Sh
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lnc
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AC005307.1对于脐带血间充质干细胞中P21，P16，CyclinD1和CyclinE1蛋白表达的调控；图10 敲减 Sh
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NC和Sh
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lnc
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AC005307.1对于脐带血间充质干细胞氧化应激衰老的调控。
具体实施方式
[0015]为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
[0016]实施例1 分离和培养脐带血间充质干细胞（1）采集30岁以下健康剖宫产妇的脐血，使用1:1的PBS稀释混匀；（2）在离心管中倒入等体积的Percoll液，混匀后，置于离心机中，2000rpm/min离心20min；（3）离心结束后，吸出中间絮状的白膜单核细胞层，使用PBS重悬；（4）将离心管置于离心机中，1000rpm/min离心10min，收集离心管管底的细胞；（5）加入含10%的胎牛血清，0.1%青霉素和链霉素双抗的DMEM/F12培养基悬浮细胞；（6）使用DMEM/F12培养基离心清洗细胞2次，进行细胞计数，调整细胞密度为1
×
106/ml；（7）将细胞接种于细胞培养皿中，加入DMEM/F12培养基进行培养，即得脐带血间充质干细胞。
[0017]实施例2 脐带血间充质干细胞复制性衰老时基因lnc
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RP11
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266K4.9，lnc
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HOTAIR， lnc
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RP11
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272B17.1，lnc
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AC005307.1和lnc
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AC091814.2的表达差异（1）分别收集P3，P6,P9和P12代（每组有3个重复）的脐带血间充质干细胞至EP管中，加入1ml Trizol充分裂解细胞；
（2）裂解10min之后，加入200μL氯仿，震荡混匀之后，在室温下静置10min；（3）将EP管放入到高速离心机中，4℃下12000rpm离心10min，小心的吸取上层的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进脐带血间充质干细胞增殖的基因抑制剂，其特征在于，所述基因抑制剂为lnc
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AC005307.1的基因抑制剂。2.根据权利要求1所述的基因抑制剂，其特征在于，所述lnc
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AC005307.1的基因序列如SEQ ID NO.11所示。3.根据权利要求1所述的基因抑制剂，其特征在于，所述基因抑制剂为特异性靶向抑制lnc
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AC005307.1的ShRNA。4.根据权利要求1所述的基因抑制剂，其特征在于，所述ShRNA的序列如SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示。5.一种基因抑制剂在制备脐带血间充质干细胞增殖药物中的用途，其特征在于，所述基因抑制剂为lnc
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AC005307.1的基因抑制剂。6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述lnc<...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐银涛，李德霞，刘晓华，王颖翠，柴新华，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：