一种核酸质谱检测试剂的配方及其应用组成比例

本发明专利技术公开了一种核酸质谱检测试剂的配方及其应用，所述试剂配方包括：多重PCR扩增体系配方、虾碱性磷酸酶体系配方和单碱基延伸体系配方；所述多重PCR扩增体系配方包括第一PCR试剂、第二PCR试剂、第三PCR试剂和第四PCR试剂；所述虾碱性磷酸酶体系配方包括第一SAP试剂、第二SAP试剂、第一ExoⅠ试剂和第二ExoⅠ试剂；所述单碱基延伸体系配方包括第一延伸试剂和第二延伸试剂；通过上述方式，本发明专利技术能够降低基因检测成本，与原有检测试剂相比，性能稳定，基因分型结果准确性提高。基因分型结果准确性提高。基因分型结果准确性提高。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸质谱检测试剂的配方及其应用


[0001]本专利技术涉及基因检测
，特别是涉及一种核酸质谱检测试剂的配方及其应用。

技术介绍

[0002]飞行质谱的原理是样品分析物与芯片基质共价结合形成结晶后在质谱仪的真空腔中经高能激光激发，核酸分子解吸附为单电荷离子；在电场中离子飞行时间与离子的质量成反比相关，通过检测解吸的核酸分子在真空腔中飞行的时间从而计算获得样品分析物的精确分子量，进而得到分析物的基因型信息。
[0003]现有的检测试剂成本昂贵，而实验室进行基因检测时，需要耗费大量的检测试剂，提升了基因检测的成本。

技术实现思路

[0004]本专利技术主要解决的是通过核酸质谱平台进行基因检测时使用的检测试剂造价成本昂贵，基因检测成本高的问题。
[0005]为解决上述问题，本专利技术采用的一个技术方案是：提供一种核酸质谱检测试剂的配方，包括：多重PCR扩增体系配方、虾碱性磷酸酶体系配方和单碱基延伸体系配方；所述多重PCR扩增体系配方包括第一PCR试剂、第二PCR试剂、第三PCR试剂和第四PCR试剂；所述虾碱性磷酸酶体系配方包括第一SAP试剂、第二SAP试剂、第一ExoⅠ试剂和第二ExoⅠ试剂；所述单碱基延伸体系配方包括第一延伸试剂和第二延伸试剂；所述第一PCR试剂包括第一氯化镁；所述第二PCR试剂包括dNTP混合物；所述第三PCR试剂包括第一DNA聚合酶和第一丙三醇；所述第四PCR试剂包括氯化钾、第一PCR增强剂、第二PCR增强剂、PCR添加剂、第一三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、牛血清白蛋白、聚乙二醇5000、聚乙二醇20000和甘油；所述第一SAP试剂包括第二三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、第二氯化镁和第二丙三醇；所述第二SAP试剂包括第三三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和第三氯化镁；所述第一ExoⅠ试剂包括第四三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、乙二胺四乙酸、第一二硫苏糖醇和第三丙三醇；所述第二ExoⅠ试剂包括甘氨酸
‑
氢氧化钾和第二二硫苏糖醇和第四氯化镁；所述第一延伸试剂包括第二DNA聚合酶；所述第二延伸试剂包括ddNTP混合物。
[0006]进一步，所述第一氯化镁的工作浓度为1
‑
4.5mM；所述dNTP混合物的工作浓度为25
‑
75mM；所述第一DNA聚合酶的工作浓度为1
ꢀ‑
2.5U/rxn，所述第一丙三醇的工作浓度为50%；所述氯化钾的工作浓度为200
‑
500
µ
M，所述第一PCR增强剂的工作浓度为0.3
‑
2.5M，所述第二PCR增强剂的工作浓度为0.3
‑
2.5M，所述PCR添加剂的体积分数为1%
‑
5%，所述第一三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的工作浓度为10
‑
30mM，所述牛血清白蛋白的工作浓度为0.8
‑
4mg/ml，所述聚乙二醇5000的体积分数为0.5
‑
1％，所述聚乙二醇20000的体积分数为0.5
‑
1％，所述甘油的体积分数为0.25
‑
1％。
[0007]进一步，所述第二三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的工作浓度为25
‑
50mM，所述第二氯化镁的工作浓度为5
‑
10mM，所述第二丙三醇的工作浓度为50%；所述第三三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的工作浓度为250
‑
500mM，所述第三氯化镁的工作浓度为50
‑
100mM；所述第四三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的工作浓度为10
‑
25mM，所述乙二胺四乙酸的工作浓度为0.5
‑
1mM，所述第一二硫苏糖醇的工作浓度为1
‑
2.5mM，所述第三丙三醇的工作浓度为50%；所述甘氨酸
‑
氢氧化钾的工作浓度为300
‑
650mM，所述第二二硫苏糖醇的工作浓度为1
‑
10mM，所述第四氯化镁的工作浓度为25
‑
50mM。
[0008]进一步，所述第二DNA聚合酶的工作浓度为2.5
‑
5U/rxn；所述ddNTP混合物的工作浓度为2.5
‑
5mM。
[0009]进一步，所述dNTP 混合物包括dATP、dTTP、dGTP和dCTP；所述第一PCR增强剂为甜菜碱，所述第二PCR增强剂为海藻糖，所述PCR添加剂为甲酰胺；所述ddNTP混合物包括ddATP、ddTTP、ddGTP和ddCTP。
[0010]一种核酸质谱检测试剂的应用，包括以下步骤：获取目标检测基因，分析所述目标检测基因的基因序列信息；根据所述基因序列信息，设计PCR引物、SAP反应试剂和延伸引物；通过所述PCR引物对所述目标检测基因执行PCR扩增操作，得到目标位点的PCR产物；通过所述SAP反应试剂对所述PCR产物执行SAP反应操作，得到消化产物；通过所述延伸引物对所述消化产物执行延伸操作，得到延伸产物；通过核酸质谱检测仪对所述延伸产物进行芯片点样和扫描，得到检测结果；对所述检测结果执行分型操作并输出，得到分型结果。
[0011]进一步，所述PCR引物的上下游引物两端增加通用序列ACGTTGGATG。
[0012]进一步，所述PCR引物包括所述第一PCR试剂7.5
‑
8.5份、所述第二PCR试剂1.5
‑
2.5份、所述第三PCR试剂3.5
‑
4.5份、所述第四PCR试剂9.5
‑
10.5份、0.5 uM 引物混合物19.5
‑
20.5份、去离子水15.5
‑
16.5份和5ng/μL DNA 39.5
‑
40.5份。
[0013]进一步，所述SAP反应试剂包括所述第一SAP试剂9.5
‑
10.5份、所述第二SAP试剂34.5
‑
35.5份、所述第一ExoⅠ试剂9.5
‑
10.5份、所述第二ExoⅠ试剂34.5
‑
35.5份和去9.5
‑
10.5份。
[0014]进一步，所述延伸引物包括所述第一延伸试剂11.55
‑
12.55份、所述第二延伸试剂9.5
‑
10.5份、延伸引物混合物46.5
‑
47.5份和去离子水30.45
‑
31.45份。
[0015]本专利技术的有益效果是：本专利技术所述的基于核酸质谱检测平台使用的检测试剂成本低廉，但该检测试剂在
运用于基因检测时，与原有检测试剂相比，性能稳定，基因分型结果准确性高，降低基因检测成本。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸质谱检测试剂的配方，其特征在于，包括：多重PCR扩增体系配方、虾碱性磷酸酶体系配方和单碱基延伸体系配方；所述多重PCR扩增体系配方包括第一PCR试剂、第二PCR试剂、第三PCR试剂和第四PCR试剂；所述虾碱性磷酸酶体系配方包括第一SAP试剂、第二SAP试剂、第一ExoⅠ试剂和第二ExoⅠ试剂；所述单碱基延伸体系配方包括第一延伸试剂和第二延伸试剂；所述第一PCR试剂包括第一氯化镁；所述第二PCR试剂包括dNTP混合物；所述第三PCR试剂包括第一DNA聚合酶和第一丙三醇；所述第四PCR试剂包括氯化钾、第一PCR增强剂、第二PCR增强剂、PCR添加剂、第一三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、牛血清白蛋白、聚乙二醇5000、聚乙二醇20000和甘油；所述第一SAP试剂包括第二三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、第二氯化镁和第二丙三醇；所述第二SAP试剂包括第三三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和第三氯化镁；所述第一ExoⅠ试剂包括第四三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、乙二胺四乙酸、第一二硫苏糖醇和第三丙三醇；所述第二ExoⅠ试剂包括甘氨酸
‑
氢氧化钾和第二二硫苏糖醇和第四氯化镁；所述第一延伸试剂包括第二DNA聚合酶；所述第二延伸试剂包括ddNTP混合物。2.根据权利要求1所述的核酸质谱检测试剂的配方，其特征在于：所述第一氯化镁的工作浓度为1
‑
4.5mM；所述dNTP混合物的工作浓度为25
‑
75mM；所述第一DNA聚合酶的工作浓度为1
ꢀ‑
2.5U/rxn，所述第一丙三醇的工作浓度为50%；所述氯化钾的工作浓度为200
‑
500
µ
M，所述第一PCR增强剂的工作浓度为0.3
‑
2.5M，所述第二PCR增强剂的工作浓度为0.3
‑
2.5M，所述PCR添加剂的体积分数为1%
‑
5%，所述第一三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的工作浓度为10
‑
30mM，所述牛血清白蛋白的工作浓度为0.8
‑
4mg/ml，所述聚乙二醇5000的体积分数为0.5
‑
1％，所述聚乙二醇20000的体积分数为0.5
‑
1％，所述甘油的体积分数为0.25
‑
1％。3.根据权利要求2所述的核酸质谱检测试剂的配方，其特征在于：所述第二三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的工作浓度为25
‑
50mM，所述第二氯化镁的工作浓度为5
‑
10mM，所述第二丙三醇的工作浓度为50%；所述第三三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的工作浓度为250
‑
500mM，所述第三氯化镁的工作浓度为50
‑
100mM；所述第四三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的工作浓度为10
‑
25mM，所述乙二胺四乙酸的工作浓度为0.5
‑
1mM，所述第一二硫苏糖醇的工作浓度为1
‑
2.5mM，所述第三丙三醇的工作浓度为50...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶绍云，蒋峻峰，杨小娟，刘雨，
申请(专利权)人：新起点生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：