一种细胞外囊泡纯化材料及纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种细胞外囊泡纯化材料及纯化方法，所述纯化方法采用可与磷脂酰丝氨酸可逆性结合的金属氧化物微球或磁珠对细胞外囊泡进行纯化，纯化材料包括纳米二氧化锆微球、纳米二氧化钛微球或纳米三氧化二铝微球、纳米二氧化锆磁性微球、纳米二氧化钛磁性微球或纳米三氧化二铝磁性微球、多孔二氧化锆纳米微球、多孔二氧化钛纳米微球或多孔三氧化二铝纳米微球。本发明专利技术的纯化方法可以快速纯化多种样本：血清/血浆，尿液，细胞培养上清；通量适中，能够最大程度的保留细胞外囊泡，洗脱得到纯度较高的细胞外囊泡，不含螯合剂等可能影响后续实验的试剂。实验的试剂。实验的试剂。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞外囊泡纯化材料及纯化方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种细胞外囊泡纯化材料及纯化方法。

技术介绍

[0002]细胞外囊泡（ExtracellularVesicles,EVs）是指从细胞膜上脱落或者由细胞分泌的双层膜结构的囊泡状小体，直径从10nm到1000nm不等。胞外囊泡主要由微囊泡（Microvesicles,MVs）和外泌体（Exosomes,Exs）组成，微囊泡是细胞激活、损伤或凋亡后从细胞膜脱落的小囊泡，直径约为100nm
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1000nm。外泌体由细胞内的多泡小体（multivesicularbodies）与细胞膜融合后以外分泌的形式释放到细胞外，直径约为10nm
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200nm。EVs从大多数细胞类型分泌，并且存在于体液(包括血浆、血清、尿液和脑脊液)中。EVs可充当天然载体，用于在细胞之间递送大分子，包括蛋白、核酸(诸如DNA和RNA)、生物活性脂质和碳水化合物。已显示EVs信号传导在各种各样的生理和病理病况(包括致癌性疾病、神经退行性疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞外囊泡纯化材料，其特征在于，所述纯化材料为：金属氧化物微球或金属氧化物磁珠，所述金属氧化物微球或金属氧化物磁珠可与磷脂酰丝氨酸可逆性结合；所述金属氧化物微球为二氧化锆、二氧化钛或三氧化二铝的非磁性纳米微球或多孔纳米微球，所述金属氧化物磁珠为二氧化锆、二氧化钛或三氧化二铝的磁性纳米微球；所述非磁性纳米微球为纳米二氧化锆微球、纳米二氧化钛微球或纳米三氧化二铝微球，所述磁性纳米微球为纳米二氧化锆磁性微球、纳米二氧化钛磁性微球或纳米三氧化二铝磁性微球，所述纳米多孔微球为多孔二氧化锆纳米微球、多孔二氧化钛纳米微球或多孔三氧化二铝纳米微球。2.根据权利要求1所述的细胞外囊泡纯化材料，其特征在于，所述纳米二氧化锆微球的制备方法包括以下步骤：（1）二氧化锆前驱体的制备：将二氧化锆粉、第一份浓硫酸和硫酸铵进行混合并加热至溶解，放至室温后加入第二份浓硫酸，混合均匀，形成二氧化锆前驱体；所述二氧化锆粉、第一份浓硫酸、硫酸铵和第二份浓硫酸的重量体积比为0.09
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0.11g：9
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11ml：2
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4g：18
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22ml；（2）A液的制备：聚维酮和十二烷基苯磺酸钠溶于去离子水中充分搅拌溶解，形成A液；聚维酮、十二烷基苯磺酸钠和去离子水的重量体积比为0.05g：2g：100ml；（3）纳米二氧化皓微球制备：将步骤（2）得到的所述A液通入氮气，搅拌状态下加入步骤（1）得到的所述二氧化锆前驱体，再滴加入N,N
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二甲基甲酰胺，反应完成后抽滤白色沉淀，用无水乙醇洗涤后干燥即得所述纳米二氧化皓微球；所述A液、二氧化锆前驱体、N,N
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二甲基甲酰胺的体积比为7：3:2。3.根据权利要求1所述的细胞外囊泡纯化材料，其特征在于，所述纳米二氧化钛微球的制备方法包括以下步骤：（1）二氧化钛前驱体的制备：将钛酸四丁酯溶于无水乙醇中，然后加入去离子水充分混匀后，加入浓盐酸，密封后室温放置1
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3天，得到淡黄色透明液体即为二氧化钛前驱体；所述钛酸四丁酯、无水乙醇、去离子水、浓盐酸的体积比为4：2：50：0.7；（2）A液的制备：聚维酮和十二烷基苯磺酸钠溶于去离子水中充分搅拌溶解，形成A液；聚维酮、十二烷基苯磺酸钠和去离子水的重量体积比为0.05g：2g：100ml；（3）纳米二氧化钛微球制备：将步骤（2）得到的所述将A液通入氮气，搅拌状态下加入步骤（1）得到的所述二氧化钛前驱体，再滴加入N,N
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二甲基甲酰胺，反应完成后抽滤白色沉淀，用无水乙醇洗涤后干燥即得所述纳米二氧化钛微球；所述A液、二氧化钛前驱体、N,N
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二甲基甲酰胺的体积比为7：3:2。4.根据权利要求1所述的细胞外囊泡纯化材料，其特征在于，所述纳米三氧化二铝微球的制备方法包括以下步骤：（1）三氧化二铝前驱体的制备：将偏铝酸钠溶解于去离子水中，充分搅拌至完全溶解，形成均匀透明的液体即为三氧化二铝前驱体；所述偏铝酸钠和去离子水的重量体积比为0.1g：50ml；（2）A液的制备：聚维酮和十二烷基苯磺酸钠溶于去离子水中充分搅拌溶解，形成A液；聚维酮、十二烷基苯磺酸钠和去离子水的重量体积比为0.05g：2g：100ml；（3）纳米三氧化二铝微球制备：将步骤（2）得到的所述将A液通入氮气，搅拌状态下加入步骤（1）得到的所述三氧化二铝前驱体，再滴加入N,N
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二甲基甲酰胺，反应完成后抽滤白色沉淀，用无水乙醇洗涤后干燥即得所述纳米三氧化二铝微球；所述A液、三氧化二铝前驱体、
N,N
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二甲基甲酰胺的体积比为7：3:2。5.根据权利要求2所述的细胞外囊泡纯化材料，其特征在于，所述纳米二氧化锆磁性微球的制备方法包括以下步骤：Ⅰ：四氧化三铁微球粉末的制备：将三氯化铁和硫酸亚铁溶于步骤（2）得到的所述A液中，充分搅拌至混合均匀，搅拌状态下滴加入饱和碳酸氢铵溶液，同时通入氮气搅拌并升温，温度升高到75
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85℃时，滴加氢氧化钠溶液，观察液体变为纯黑色后继续氮气氛围下搅拌混合，磁吸收获黑色沉淀，将所述黑色沉淀先用无水乙醇进行洗涤，再用去离子水洗涤后烘干，形成四氧化三铁微球粉末；所述烘干的温度为60℃；所述氢氧化钠溶液的浓度为1M；所述三氯化铁、硫酸亚铁、饱和碳酸氢铵溶液和1M氢氧化钠溶液的重量体积比为3.24g：2.78g：50ml：10ml；Ⅱ：纳米二氧化锆磁性微球的制备：向步骤（2）得到的所述A液中加入步骤Ⅰ得到的所述四氧化三铁微球粉末，通入氮气，搅拌状态下加入步骤（1）得到的所述二氧化锆前驱体，继续搅拌至混合均匀，边搅拌边滴加 N,N
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二甲基甲酰胺，滴加完成后，升温到35
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45℃，氮气氛围下继续搅拌，磁吸褐色沉淀后，用无水乙醇洗涤所述褐色沉淀，烘干，即得所述纳米二氧化锆磁性微球；所述烘干的温度为100℃，所述烘干的时间为4小时；所述A液、四氧化三铁微球粉末、二氧化锆前驱体、 N,N
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二甲基甲酰胺的重量体积比为70ml：2g：30ml：20ml。6.根据权利要求3所述的细胞外囊泡纯化材料，其特征在于，所述纳米二氧化钛磁性微球的制备方法包括以下步骤：Ⅰ：四氧化三铁微球粉末的制备：将三氯化铁和硫酸亚铁溶于步骤（2）得到的所述A液中，充分搅拌至混合均匀，搅拌状态下滴加入饱和碳酸氢铵溶液，同时通入氮气搅拌并升温，温度升高到75
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85℃时，滴加氢氧化钠溶液，观察液体变为纯黑色后继续氮气氛围下搅拌混合，磁吸收获黑色沉淀，将所述黑色沉淀先用无水乙醇进行洗涤，再用去离子水洗涤后烘干，形成四氧化三铁微球粉末；所述烘干的温度为60℃；所述氢氧化钠溶液的浓度为1M；所述三氯化铁、硫酸亚铁、饱和碳酸氢铵溶液和1M氢氧化钠溶液的重量体积比为3.24g：...

【专利技术属性】
技术研发人员：许智慧，
申请(专利权)人：北京同创正业生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：