分泌型Clusterin在制备心梗后心肌细胞再生的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种分泌型Clusterin在制备心梗后心肌细胞再生的药物中的应用，属于生物医药研究领域，本发明专利技术的分泌型Clusterin(凝聚素)不仅可以改善心肌梗死后心脏功能，同时具有促进心肌细胞增殖的效应，促进心肌梗死后心肌再生和心脏保护，为临床中心肌梗死患者的治疗提供新的治疗策略。疗提供新的治疗策略。疗提供新的治疗策略。

【技术实现步骤摘要】
分泌型Clusterin在制备心梗后心肌细胞再生的药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药研究领域，具体涉及一种分泌型Clusterin在制备心梗后心肌细胞再生的药物中的应用。

技术介绍

[0002]急性心肌梗死是临床上常见的急危重症，随着老龄化，生活节奏的加快，饮食习惯的改变以及社会、心理等因素的影响，急性心肌梗死发病率逐年升高，且死亡率高，严重危害人类健康。心肌梗死后心肌细胞大量坏死,坏死心肌由瘢痕组织取代，心肌收缩功能下降，最终演变为心力衰竭，导致患者生活质量急剧下降，甚至死亡。虽然目前常规治疗方法如溶栓、经皮冠脉介入术或冠脉旁路搭桥术可使闭塞血管再通，药物治疗可缓解心肌重构，但不能从根本上修复已坏死的心肌。要实现对心肌梗死后心衰的预防，最根本的策略是应用有收缩能力的心肌细胞代替坏死的心肌，即通过心肌再生弥补坏死的心肌细胞。心肌细胞增殖是内源性心肌再生的主要来源，但哺乳动物成年心肌细胞增殖微弱，如何促进心肌增殖是目前面临的重要科学问题。近年来研究人员试图采用多种策略诱导成年哺乳动物内源性心肌细胞增殖。Srivastava等人通过过表达四种细胞周期相关基因CDK1,CDK4,cyclin B1和cyclin D1，可以成功促进成年小鼠心肌细胞增殖。Hirose等人研究发现，小鼠出生后不久甲状腺激素含量增加50倍，通过抑制甲状腺激素合成可以促进心肌细胞增殖。但上述促心肌细胞增殖策略因存在技术问题、不良反应的原因无法实现临床转化，因此寻找新的促心肌细胞增殖措施显得尤为重要。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种分泌型Clusterin在制备心梗后心肌细胞再生的药物中的应用；本专利技术的目的之二在于提供一种药物制剂，本专利技术的目的之三在于提供一种药物制剂在制备心梗后心肌细胞再生的药物中的应用。
[0004]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0005]1、分泌型Clusterin在制备心梗后促进心肌细胞再生的药物中的应用，所述分泌型Clusterin的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]作为优选的技术方案之一，所述促进心肌细胞再生具体为：
[0007]a、促进心肌梗死后心肌细胞增殖；
[0008]b、促进心肌梗死后心肌血管再生；
[0009]c、抑制心肌梗死后心肌细胞凋亡；
[0010]d、抑制心肌梗死后心肌细胞纤维化；
[0011]e、改善心梗后心脏功能的恢复。
[0012]作为优选的技术方案之一，所述促进心肌细胞再生的具体机制为：分泌型Clusterin促进NF
‑
κB下游靶基因CCL2的转录和翻译。
[0013]2、一种药物制剂，所述药物制剂包括上述分泌型Clusterin和一种或多种药学上可以接受的载体或辅料。
[0014]3、所述药物制剂在制备心梗后心肌细胞再生的药物中的应用。
[0015]本专利技术的有益效果在于：
[0016]本专利技术所提供的分泌型Clusterin蛋白不仅改善心肌梗死后心脏功能，同时促进心肌细胞增殖。本专利技术还对分泌型Clusterin蛋白促进心肌细胞增殖信号机制作了研究，结果表明在外源性分泌型Clusterin蛋白刺激心肌细胞后通过进一步促进NF
‑
κB(p65)核转位，并促进其下游靶基因CCL2的转录核翻译，且通过促进Clusterin与CCL2二者间蛋白互作进而持续激活下游JAK2/STAT3信号通路，从而发挥促心肌细胞增殖效应，对临床急性心肌梗死的治疗提供新的策略。
附图说明
[0017]为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作优选的详细描述，其中：
[0018]图1为不同浓度梯度分泌型Clusterin重组蛋白对心肌细胞增殖的影响，细胞增殖指标分别为Ki67、PH3、EDU。
[0019]图2为AAV2/9
‑
Clusterin心肌注射2周后对心肌梗死后心肌细胞增殖的影响。
[0020]图3为AAV2/9
‑
Clusterin心肌注射2周后对心肌梗死后心肌细胞存活的影响。
[0021]图4为AAV2/9
‑
Clusterin心肌注射2周后对心肌梗死后血管新生的影响。
[0022]图5为AAV2/9
‑
Clusterin心肌注射4周后对心肌梗死后心肌纤维化的影响。
[0023]图6为AAV2/9
‑
Clusterin心肌注射2周、4周后对心肌梗死后心脏功能的影响。
[0024]图7为分泌型Clusterin重组蛋白处理心肌细胞对NF
‑
κB(p65)核转位的影响。
[0025]图8为分泌型Clusterin重组蛋白处理心肌细胞对NF
‑
κB(p65)核/质蛋白分布的影响。
[0026]图9为分泌型Clusterin重组蛋白处理心肌细胞对NF
‑
κB(p65)下游靶基因CCL2表达水平的影响，图A和B分别显示分泌型Clusterin重组蛋白处理心肌细胞后转录组测序结果GO富集分析和KEGG信号通路分析；图C显示NF
‑
κB信号通路富集分子的FPKM值；图D显示采用QT
‑
RCR方法验证分泌型Clusterin重组蛋白处理心肌细胞后CCL2在转录水平的变化。
[0027]图10为NF
‑
κB(p65)抑制剂JSH
‑
23预处理后再给予Clusterin重组蛋白处理对心肌细胞增殖比率的影响。
[0028]图11为免疫荧光技术显示分泌型Clusterin与CCL2存在共定位。
[0029]图12、13为免疫共沉淀(CO
‑
IP)技术显示分泌型Clusterin与CCL2二者间存在蛋白相互作用。
具体实施方式
[0030]以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。
[0031]实施例1
[0032]不同浓度分泌型Clusterin重组蛋白对心肌细胞增殖的影响
[0033]1、原代心肌细胞提取
[0034]取新生SD大鼠(0
‑
1d)心脏置于预冷的PBS缓冲液中清洗3次，用眼科剪将心室剪成约1mm3大小碎块，0.125％胰酶室温消化，第一次消化上清弃去，再以0.08％胶原酶II重复消化约5
‑
6次直至组织被消化尽完全，每次约5min，消化后上清用含10％FBS的DMEM完全培养基终止消化液。200目筛网过滤，300
×
g离心5min，DMEM完全本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分泌型Clusterin在制备心梗后促进心肌细胞再生的药物中的应用，其特征在于，所述分泌型Clusterin的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述促进心肌细胞再生具体为：a、促进心肌梗死后心肌细胞增殖；b、促进心肌梗死后心肌血管再生；c、抑制心肌梗死后心肌细胞凋亡；d、抑制心肌梗死后心肌细胞纤维化；e、改善心梗后心脏功能的恢复。...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾春雨，王伟，王微，夏雪伟，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军特色医学中心，
类型：发明
国别省市：