一种红色富血小板纤维蛋白生物注射材料及应用制造技术

本申请公开了一种红色富血小板纤维蛋白生物注射材料，该注射材料通过如下方法获得：取外周全血，60g离心3分钟后，血液被为三层，取中间层，即获得该注射材料red i

【技术实现步骤摘要】
and Biological Properties of Injectable Platelet
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Rich Fibrin:An Exploratory Study.Int J Mol Sci,2019.20(7).)，2020年研究人员进一步在牙周膜干细胞中验证了这一差异，同时验证了下层红色部分更有利于口腔细胞的应用(Thanasrisuebwong,P.,et al.,Red and Yellow Injectable Platelet
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Rich Fibrin Demonstrated Differential Effects on Periodontal Ligament Stem Cell Proliferation,Migration,and Osteogenic Differentiation.Int J Mol Sci,2020.21(14).)。总体而言，血清浓缩物成分复杂，不同处理(添加抗凝剂)、离心参数选择等方式获得的血清分层的成分均存在差异，每一代浓缩物又可分为多种亚分类。目前，可注射富含血小板的纤维蛋白(i
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PRF)对毛乳头细胞(毛囊再生的关键细胞种子)的影响尚不清楚。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本申请提供了一种红色富血小板纤维蛋白生物注射材料(Red i
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RPF)及其在毛囊再生中的应用，以提高毛囊再生效率。
[0006]本申请是通过如下技术方案实现的：
[0007]首先，本申请提供了一种红色富血小板纤维蛋白生物注射材料，其是通过如下方法获得的：取人外周全血，60g离心3分钟，离心后的全血被分为三层：黄色上层、中间的血沉棕黄层、含红细胞的红色下层；取中间层，即为红色富血小板纤维蛋白生物注射材料(red i
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PRF)。
[0008]其次，本申请提供了上述红色富血小板纤维蛋白生物注射材料在制备毛囊再生注射材料中的应用。
[0009]第三，本申请还提供了一种包括上述红色富血小板纤维蛋白生物注射材料的人毛乳头细胞(HDPC)培养基，该培养基还包括现有常规细胞培养基(如DMEM培养基、胎牛血清、青链霉素双抗等)。
[0010]本申请通过调整离心参数，所获得的中间层红色富血小板纤维蛋白生物注射材料(red i
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PRF)中的富含细胞数和生长因子浓度(VEGF、TGF
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β1、EGF和IGF
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1)，经检测，该材料对人毛乳头细胞(HDPC)的活力、增殖、迁移、碱性磷酸酶活性和毛发诱导能力更优，适用于毛囊再生，特别是该材料纯自体来源，无热源，无携带传染病病原体风险，无免疫排斥反应风险，且易获取制备。，具有较高的应用前景。
附图说明
[0011]图1为Red i
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PRF与Yellow i
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PRF的制备示意图；
[0012]其中(1)为全血离心后分层照片，可以看到离心后全血分为ABC三层；(2)为黄色富血小板纤维蛋白凝固1.5h后的照片，(3)为红色可注射富血小板纤维蛋白凝固1.5h后的照片。
[0013]图2为红色i
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PRFs和黄色i
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PRF的细胞计数分析结果；
[0014]其中A为两种i
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PRF的白细胞计数结果，B为两种i
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PRF的血小板计数结果。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001；****p<0.0001。
[0015]图3为4种生长因子检测结果示意图；
[0016]其中A
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D分别为两种i
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PRF材料中血管生长因子(VEGF)、转化生长因子
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β1(TGF
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β
1)、表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子
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1(IGF
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1)在14天内每个时间点的ELISA蛋白质定量；E
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H分别为两种i
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PRF材料中血管生长因子(VEGF)、转化生长因子
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β1(TGF
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β1)、表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子
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1(IGF
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1)在14天内累积释放的总生长因子检测结果。
[0017]图4为使用活/死细胞分析对HDPC生存能力的影响结果示意图；
[0018]其中A为活细胞/死细胞分析的合并荧光图像，活细胞显示为绿色，死细胞显示为红色；B为各组活细胞的百分比。各组之间未观察到显著差异。
[0019]图5为两种材料对人毛乳头细胞的增殖作用检测结果；
[0020]其中，A为EdU检测的荧光检测结果，与黄色i
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PRF组相比，红色i
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PRF组更容易检测到EdU阳性细胞(绿色)；B为各组间EdU阳性细胞比率的比较分析；C为CCK8分析结果，450nm处的光密度随着时间的推移而增加，与黄色i
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PRF相比，红色i
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PRF处理的光密度更高*p<0.05**p<0.01***p<0.001****p<0.0001。
[0021]图6为人毛乳头细胞的经孔迁移检测结果；
[0022]其中A为显微镜照片，B为定量检测结果示意图，可见，红色i
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PRF组的迁移细胞数量显著高于黄色i
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PRF组，*p<0.05****p<0.0001。
[0023]图7为人毛乳头细胞碱性磷酸酶染色结果；
[0024]可见，与对照组(control)相比，红色和黄色i
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PRF组显示出更深的颜色，红色i
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PRF组显示出最深的颜色。
[0025]图8为两种i
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PRF条件培养基处理的IGF
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1等相关基因表达结果示意图，*p<0.05**p<0.01。
[0026]图9为两种i
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PRF条件培养基处理的FGF10等相关基因表达结果示意图，*p<0.05**p<0.01。
具体实施方式
[0027]以下实施例已经获得苏北人民医院伦理委员会审批，志愿者均知情同意。
[0028]实施例1可注射富血小板纤维蛋白的制备
[0029]本实施例涉及6名志愿者，3男3女，年龄范围22
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26岁，无血检报告异常者及吸烟者。
[0030]注射富血小板纤维蛋白制备步骤如下：获取人外周静脉血后，立即移入离心管中，60g离心3分钟(60g的离心力在110mm直径的离心机上相当于700rp本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种红色富血小板纤维蛋白生物注射材料，其特征在于，该注射材料是通过如下方法获得的：取外周血，60g离心3分钟，血液分为三层，取中间层，即为所述红色富血小板纤维蛋白生物注射材...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯团结，卢孔烨，李平松，韩启雯，马泽坤，颜青青，
申请(专利权)人：江苏省苏北人民医院，
类型：发明
国别省市：