一种利用鳖甲提取物制备的FMT供体菌液及方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种利用鳖甲提取物制备的FMT供体菌液及方法和应用，原料包括鳖甲提取物

【技术实现步骤摘要】
一种利用鳖甲提取物制备的FMT供体菌液及方法和应用


[0001]本专利技术涉及粪菌移植领域，具体涉及一种利用鳖甲提取物制备的FMT供体菌液及方法和应用。

技术介绍

[0002]鳖甲为鳖科动物中华鳖的背甲，内含鳖甲多糖、骨胶原、氨基酸及微量元素，具有滋阴清热、潜阳熄风、软坚散结、促进免疫等功能。然而其对肠道益生菌的促进作用，目前未见相关报道。
[0003]人体肠道中存在有数量庞大的微生物，这群肠道微生物不仅在膳食和宿主之间起到了重要的桥梁作用，其本身以及代谢产物也能调节人的各个系统(包括免疫系统、代谢系统、神经系统、消化系统、内分泌系统等)，因此肠道微生物与人体健康密切相关。肠道微生物通过与宿主之间的动态性生理作用，达到微生态平衡，有效防止肠道内细菌及内毒素易位。当正常的微生物群落受到宿主及外环境影响时，原有的平衡遭到破坏，即肠道菌群失调，肠道正常菌群的种类、数量和比例发生异常变化，转变为病理性组合状态，进而导致宿主的各个系统发生紊乱，最终导致人体发生多种疾病。目前研究表明，人体的多种疾病都与肠道微生物紊乱具有密切关联，多篇文献报道Bifidobacterium、Lactobacillus、Anaerostipes能正向调节克罗恩、结肠癌、便秘、抑郁。
[0004]“粪菌移植”(Fecal microbiota transplantation，FMT)是指将健康人粪便中的功能菌群，移植到患者胃肠道内，重建新的肠道菌群，实现肠道及肠道外疾病的改善和治疗。一般来说，粪菌移植的剂量有限和某些细菌的数量不足，在体内不足以发挥作用，因此要求其中的功能菌群数量高于正常水平。目前亟需解决所提供的健康人粪便样本中特种功能菌群定向增殖的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服上述技术不足，提供一种利用鳖甲提取物制备的FMT供体菌液及方法和应用，通过鳖甲提取物，能够对供体菌液中的益生菌如Bifidobacterium、Lactobacillus以及Faecalibacterium等进行增殖。
[0006]为达到上述技术目的，本专利技术FMT供体菌液的技术方案是：
[0007]原料包括鳖甲提取物
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GAM培养基、PBS缓冲液和粪菌液；在每6mL的FMT供体菌液中，GAM培养基的固含量为0.10～0.14g，鳖甲提取物为0.16～0.24g，粪菌液的固含量为0.0225～0.0825g。
[0008]进一步地，在每6mL的FMT供体菌液中，GAM培养基的固含量为0.12g，鳖甲提取物为0.2g，粪菌液的固含量为0.05g。
[0009]进一步地，FMT供体菌液的pH值为7.35～7.45。
[0010]本专利技术制备FMT供体菌液的方法的技术方案是：包括以下步骤：
[0011]步骤一：向GAM培养基中加入鳖甲提取物溶液，再加入PBS缓冲液，得到混合液；
[0012]步骤二：混合液经过氧气置换处理，得到鳖甲提取物
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GAM培养基；
[0013]步骤三：将粪菌液接种至鳖甲提取物
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GAM培养基中，在厌氧条件下37℃培养48h以上，得到FMT供体菌液；
[0014]其中每6mL的FMT供体菌液中，GAM培养基的固含量为0.10～0.14g，鳖甲提取物为0.16～0.24g，粪菌液的固含量为0.0225～0.0825g。
[0015]进一步地，步骤一采用的GAM培养基是采用改良GAM肉汤药品加超纯水配成的，浓度为50～70g/L；步骤一采用的鳖甲提取物溶液的质量浓度为8.0～12.0％；PBS缓冲液的pH值为7.35～7.45。
[0016]进一步地，置换处理是在厌氧箱中置换氧气11～13h。
[0017]进一步地，步骤三采用的粪菌液的制备步骤包括：
[0018]先取新鲜健康供体粪便样品加入PBS缓冲液混匀形成粪悬液，然后过滤，将得到的滤液进行离心处理，获得沉淀物；将沉淀物用PBS溶液配成质量浓度为4.5～5.5％的粪菌液。
[0019]进一步地，步骤三中培养48～96h；厌氧条件是在N2、H2或者CO2气氛中培养；还包括以下步骤：
[0020]步骤四：将步骤三所得的FMT供体菌液，在4500Xg、4℃离心30分钟，去除上清液；
[0021]步骤五：用生理盐水将离心沉淀重悬后直接用于FMT，或制备成胶囊后
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80℃保藏备用。
[0022]如上所述的一种利用鳖甲提取物制备的FMT供体菌液在制备粪菌移植药物中的应用，所述药物包括所述FMT供体菌液经离心处理和生理盐水重悬后制得的菌液型或胶囊型。
[0023]如上所述的一种利用鳖甲提取物制备的FMT供体菌液在体外促进益生菌增殖中的应用，所述益生菌包括双歧杆菌、乳杆菌、粪厌氧棒杆菌和粪杆菌属。
[0024]与现有技术相比，本专利技术的有益效果包括：
[0025]本专利技术通过体外模拟肠道环境，并以健康人体粪便中收集的肠道菌群作为样本，将鳖甲提取物应用到促进益生菌增殖发酵，为临床应用提供科学依据，达到高效制备益生菌剂。本专利技术所得的FMT供体菌液中Bifidobacterium、Lactobacillus以及Faecalibacterium显著性甚至极其显著性增高，经测试，在培养72h后，本专利技术能使益生菌如Anaerostipes的数量增加两倍以上，Lactobacillus的数量增长高达62.5倍。
附图说明
[0026]图1是本专利技术经鳖甲提取物干预前后的菌群丰度变化。
具体实施方式
[0027]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0028]本专利技术中涉及到双歧杆菌Bifidobacterium，乳杆菌Lactobacillus，粪厌氧棒杆菌Anaerostipes，粪杆菌属Faecalibacterium。
[0029]本专利技术FMT供体菌液的原料包括鳖甲提取物
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GAM培养基、PBS缓冲液和粪菌液；鳖
甲提取物
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GAM培养基是由GAM培养基和鳖甲提取物溶液混合配制而成的，所采用的GAM培养基浓度为50～70g/L，鳖甲提取物溶液质量百分浓度为8.0～12.0％；粪菌液的质量浓度为4.5～5.5％；PBS缓冲液的pH值为7.35～7.45。
[0030]每2mL的GAM培养基中添加2mL的鳖甲提取物溶液，1mL的PBS缓冲液和0.5～1.5mL的粪菌液。
[0031]所采用的鳖甲提取物溶液和粪菌液密度认为与水相同，为1g/mL；因此本专利技术中各物质之间的关系为：
[0032]在每6mL的FMT供体菌液中，GAM培养基的固含量为0.10～0.14g，鳖甲提取物为0.16～0.24g，粪菌液的固含量为0.0225～0.0825g。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用鳖甲提取物制备的FMT供体菌液，其特征在于：原料包括鳖甲提取物
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GAM培养基、PBS缓冲液和粪菌液；在每6mL的FMT供体菌液中，GAM培养基的固含量为0.10～0.14g，鳖甲提取物为0.16～0.24g，粪菌液的固含量为0.0225～0.0825g。2.根据权利要求1所述的一种利用鳖甲提取物制备的FMT供体菌液，其特征在于：在每6mL的FMT供体菌液中，GAM培养基的固含量为0.12g，鳖甲提取物为0.2g，粪菌液的固含量为0.05g。3.根据权利要求1所述的一种利用鳖甲提取物制备的FMT供体菌液，其特征在于：FMT供体菌液的pH值为7.35～7.45。4.一种利用鳖甲提取物制备FMT供体菌液的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：向GAM培养基中加入鳖甲提取物溶液，再加入PBS缓冲液，得到混合液；步骤二：混合液经过氧气置换处理，得到鳖甲提取物
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GAM培养基；步骤三：将粪菌液接种至鳖甲提取物
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GAM培养基中，在厌氧条件下37℃培养48h以上，得到FMT供体菌液；其中每6mL的FMT供体菌液中，GAM培养基的固含量为0.10～0.14g，鳖甲提取物为0.16～0.24g，粪菌液的固含量为0.0225～0.0825g。5.根据权利要求4所述的一种利用鳖甲提取物制备FMT供体菌液的方法，其特征在于：步骤一采用的GAM培养基是采用改良GAM肉汤药品加超纯水配成...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘庆军，沈鹤霄，李国龙，张帆，刘慧敏，周先锋，熊云，王峰，
申请(专利权)人：美益添生物医药武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：