【技术实现步骤摘要】
一种单克隆抗体制备用HAT半固体筛选培养基
[0001]本专利技术涉及生物
，具体为一种单克隆抗体制备用HAT半固体筛选培养基。
技术介绍
[0002]单克隆抗体技术的基本原理是将分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养的骨髓瘤细胞进行杂交，筛选得到的杂交瘤细胞既能分泌抗体又有骨髓瘤细胞无限增殖的特性，由一个杂交瘤细胞繁殖、分泌的抗体称为单克隆抗体，它只针对一个抗原表位。细胞融合时，B细胞是从抗原免疫的动物的脾脏中分离出来的，骨髓瘤细胞是经过诱变和筛选得到的缺陷型，其本身不能分泌抗体；并且是次黄嘌呤鸟嘌呤核苷酸转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶激酶(TK)的缺陷型，不能在含有次黄嘌呤(hypoxanthine H)、氨基蝶呤(aminopterin A)、胸腺嘧唳(thymidine T)的筛选培养基(HAT)中存活。在融合后的细胞群中，未融合的脾细胞和相互融合的脾细胞，不能连续培养，只能在培养基中存活几天，而未融合的骨髓瘤细胞和融合的骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT不能在HAT培养基中存活，只有骨髓瘤细胞与脾细胞形成的...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体制备用HAT半固体筛选培养基，按重量份数计，主要包括：9～15份生物蛋白水解物，5～9份载体膜，6～15份胎牛血清和6～15份聚乙二醇。2.根据权利要求1所述的一种单克隆抗体制备用HAT半固体筛选培养基，其特征在于，所述生物蛋白水解物是由生物组织经过粉磨，脱脂，酶解制得。3.根据权利要求2所述的一种单克隆抗体制备用HAT半固体筛选培养基，其特征在于，所述载体膜是由石墨烯改性后自身交联反应形成沉积膜，再将沉积膜与青霉素和链霉素反应制得。4.一种单克隆抗体制备用HAT半固体筛选培养基的制备方法，其特征在于，主要包括以下制备步骤：生物蛋白水解物的提取，载体膜的制备，复合。5.根据权利要求4所述的一种单克隆抗体制备用HAT半固体筛选培养基的制备方法，其特征在于，所述单克隆抗体制备用HAT半固体筛选培养基的制备方法主要包括以下制备步骤：(1)生物蛋白水解物的提取：将新鲜的生物组织粉磨成生物粉末，对生物粉末进行脱脂，将脱脂后的生物粉末与质量分数0.3～0.5％的盐酸溶液按质量比1：10～1：15混合均匀，在1～5℃下静置20～24h，再用纯水洗涤至中性，再置于脱脂后的生物粉末质量10～15倍的，再加入脱脂后的生物粉末质量0.03～0.05倍的乙酸和脱脂后的生物粉末质量0.01～0.02倍的胃蛋白酶，在1～5℃下以1000～2000r/min的转速搅拌20～24h，再在1～5℃下以12000～15000r/min的转速离心20～30min，去除本次离心固体沉淀制得酶解上清液，向酶解上清液中加入酶解上清液质量0.03～0.05倍的氯化钠，静置3～5h后过滤，在
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10～
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5℃温度，5～10Pa压力下干燥4～6h，得到生物蛋白水解物；(2)载体膜的制备：将改性石墨烯与乙醚按质量比1：10～1：15混合均匀，在120～150℃以聚四氟乙烯为衬底的反应釜中反应12～15h后过滤，用无水乙醇洗涤3～5次，在
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10～
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5℃温度，5～10Pa压力下干燥6h，制得沉积膜，将沉积膜置于沉积膜质量8～10倍的40～50％的二甲基亚砜溶液中，加入沉积膜质量0.08～0.1倍的青霉素和沉积膜质量0.08～0.1倍链霉素，再加入沉积膜质量0.01～0.03倍的碳化二亚胺，在20～30℃反应2～3h，过滤后用无水乙醇浸洗3～5次，在
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10～
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1℃，5～10Pa干燥6～8h，制得载体膜；(3)复合：将载体膜固定在容器底部，再将生物蛋白水解物，胎牛血清，聚乙二醇，纯水按质量比3：2：2：5～3：3：3：8混合均匀，并加入乙酸将pH调节至5～6，加入生物蛋白水解物质量0.3～0.5倍的氯化钠，在10～20℃静置40～50min，取出沉积有蛋白质血清水凝胶的载体膜，在置于1～5℃纯水中浸洗3～5min，在
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1℃，5～10Pa干燥6～8h，制得单克隆抗体制备用HAT半固体筛选培养基。6.根据权利要求5所述的一种单克隆抗体制备用HAT半固体筛选培养基的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述生物组织为猪皮，鸡胸软骨和...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘立成，吴刚，严国权，闫广为，
申请(专利权)人：苏州博奥龙科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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