【技术实现步骤摘要】
用于产生免疫球蛋白样分子的方法和手段
[0001]本申请是针对申请号为201710637343.2、专利技术名称为“用于产生免疫球蛋白样分子的方法和手段”的中国专利申请的分案申请，该申请是2017年7月28日提交的分案申请。本申请所针对的申请是申请号为201380032190.9、专利技术名称为“用于产生免疫球蛋白样分子的方法和手段”的中国专利申请的分案申请，该母案申请是2013年04月19日提交的PCT国际申请PCT/NL2013/050293进入中国国家阶段的申请。
[0002]本专利技术涉及分子生物学、医学和生物治疗剂领域。尤其涉及用于治疗多种疾病的治疗性抗体领域。
技术介绍
[0003]许多目前使用的生物治疗剂是分离的重组人或人源化单克隆抗体，其增强机体免疫系统中和或消除参与疾病过程的细胞和/或分子或者消灭侵入的病原体或感染原的能力。单克隆抗体与抗原的单个特定区域或表位结合，并且对于治疗中的使用，通常根据期望的功能性质进行选择，例如杀死肿瘤细胞，阻断受体
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配体相互作用或病毒中和。目前，大约...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于从单个宿主细胞产生至少两种不同的免疫球蛋白样分子的方法，其中所述两种免疫球蛋白样分子各自包含能够形成界面的两个CH3结构域，所述方法包括在所述细胞中提供：编码第一含CH3结构域之多肽链的第一核酸，编码第二含CH3结构域之多肽链的第二核酸，编码第三含CH3结构域之多肽链的第三核酸，和编码第四含CH3结构域之多肽链的第四核酸；其中所述第一含CH3结构域之多肽链在CH3结构域中包含(i)D399R或D399K和(ii)K409E或K409D中的两个替换，并且其中所述第二含CH3结构域之多肽链在CH3结构域中包含(i)D399R或D399K和(ii)K409E或K409D中的两个替换，所述方法还包括培养所述宿主细胞并且使所述至少四种核酸能够表达以及从培养物中收获所述至少两种不同的免疫球蛋白样分子的步骤。2.权利要求1所述的方法，其中所述第一含CH3结构域之多肽链和/或所述第二含CH3结构域之多肽链还包含替换K392D或K392E。3.权利要求1或2所述的方法，其中所述至少两种不同的免疫球蛋白样分子是至少两种抗体。4.权利要求3所述的方法，其中所述至少两种抗体是单特异性抗体。5.权利要求1至4中任一项所述的方法，其还包括为所述宿主细胞提供编码共同轻链的核酸。6.权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所编码的含CH3结构域之多肽链各自或者所编码的抗体重链各自还包含识别靶表位的可变区。7.可由根据权利要求1至6中任一项所述的方法获得的至少两种不同的免疫球蛋白样分子或至少两种不同的抗体的混合物。8.权利要求7所述的混合物，其中所述至少两种不同的抗体包括至少两种单特异性抗体。9.权利要求7所述的混合物，其中所述至少两种不同的免疫球蛋白样分子或所述至少两种不同的抗体与相同抗原上的不同表位和/或不同抗原上的不同表位结合。10.权利要求7所述的混合物，其中所述至少两种不同的免疫球蛋白样分子或所述至少两种不同的抗体包括至少一种异二聚体免疫球蛋白样分子或至少一种异二聚体抗体。11.权利要求7所述的混合物，其中所述至少两种不同的免疫球蛋白样分子中的两种或所述至少两种不同的抗体中的两种是异二聚体免疫球蛋白样分子或异二聚体抗体。12.至少两种不同的免疫球蛋白样分子的混合物，其中所述两种免疫球蛋白样分子各自包含能够形成界面的两个CH3结构域，其中所述两个CH3结构域中的一个在CH3结构域中包含(i)D399R或D399K和(ii)K409E或K409D中的两个替换，并且其中所述两个CH3结构域中的另一个在CH3结构域中包含(i)D399R或D399K和(ii)K409E或K409D中的两个替换。13.一种重组宿主细胞，其包含编码至少第一含CH3结构域之多肽链、第二含CH3结构域之多肽链、第三含CH3结构域之多肽链和第四含CH3结构域之多肽链的一种或更多种核酸，其中所述第一含CH3结构域之多肽链在CH3结构域中包含(i)D399R或D399K和(ii)K409E或K409D中的至少两个替换，并且其中所述第二含CH3结构域之多肽链在CH3结构域中包含(i)
D399R或D399K和(ii)K409E或K409D中的至少两个替换。14.权利要求13所述的重组宿主细胞，其中所述第一含CH3结构域之多肽链和/或所述第二含CH3结构域之多肽链还包含替换K392D或K392E。15.权利要求13或14所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞还包含编码共同轻链的核酸。16.一种药物组合物，其包含根据权利要求7至12中任一项所述的至少两种不同的免疫球蛋白样分子或至少两种不同的抗体的混合物以及可药用载体。17.权利要求16所述的药物组合物，其中所述至少两种不同的免疫球蛋白样分子或至少两种不同的抗体由根据权利要求13至15中任一项所述的重组宿主细胞产生。18.一种用于制备用来产生至少两种不同的免疫球蛋白样分子的宿主细胞的方法，所述方法包括向所述宿主细胞中引入编码至少第一含CH3结构域之多肽链、第二含CH3结构域之多肽链、第三含CH3结构域之多肽链和第四含CH3结构域之多肽链的一种或更多种核酸，其中所述第一含CH3结构域之多肽链在CH3结构域中包含(i)D399R或D399K和(ii)K409E或K409D中的至少两个替换，并且其中所述第二含CH3结构域之多肽链在CH3结构域中包含(i)D399R或D399K和(ii)K409E或K409D中的至少两个替换。19.权利要求18所述的方法，其中所述第一含CH3结构域之多肽链和/或所述第二含CH3结构域之多肽链还包含替换K392D或K392E。20.权利要求18或19所述的方法，其中所述至少两种不同的免疫球蛋白样分子是抗体。21.权利要求18至20中任一项所述的方法，其还包括向所述宿主细胞中引入编码共同轻链之核酸的步骤。22.一种权利要求13至15中任一项所述的重组宿主细胞的培养物或者由权利要求18至21中任一项所述的方法获得的重组宿主细胞的培养物，其产生至少两种不同的免疫球蛋白样分子。23.一种用于从单个宿主细胞产生至少两种不同的单特异性免疫球蛋白样分子的方法，其中所述两种免疫球蛋白样分子各自包含能够形成界面的两个CH3结构域，所述方法包括在所述细胞中提供：a)编码第一含CH3结构域之多肽链的第一核酸，和b)编码第二含CH3结构域之多肽链的第二核酸，其中所述第一含CH3结构域之多肽链包含：
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野生型CH3结构域，或者
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第392和409位氨基酸处的带负电荷的氨基酸残基和第399位氨基酸处的带正电荷的氨基酸残基，并且其中所述第二含CH3结构域之多肽链包含第356和357位氨基酸处的带正电荷的氨基酸残基和第370和439位氨基酸处的带负电荷的氨基酸残基，所述方法还包括培养所述宿主细胞并且使所述核酸能够表达以及从培养物中收获所述至少两种不同的免疫球蛋白样分子的步骤。24.一种重组宿主细胞，其包含编码至少第一和第二含CH3结构域之多肽链的一种或更多种核酸，其中所述第一含CH3结构域之多肽链包含：
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野生型CH3结构域，或者
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第392和409位氨基酸处的带负电荷的氨基酸残基和第399位氨基酸处的带正电荷的氨基酸残基，并且其中所述第二含CH3结构域之多肽链包含第356和357位氨基酸处的带正电荷的氨基酸残基和第370和439位氨基酸处的带负电荷的氨基酸残基。25.一种用于制备用来产生至少两种不同的单特异性免疫球蛋白样分子的宿主细胞的方法，所述方法包括向所述宿主细胞中引入编码至少第一和第二含CH3结构域之多肽链的一种或更多种核酸的步骤，其中所述第一含CH3结构域之多肽链包含：
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野生型CH3结构域，或者
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第392和409位氨基酸处的带负电荷的氨基酸残基和第399位氨基酸处的带正电荷的氨基酸残基，并且其中所述第二含CH3结构域之多肽链包含第356和357位氨基酸处的带正电荷的氨基酸残基和第370和439位氨基酸处的带负电荷的氨基酸残基。26.一种用于从单个宿主细胞产生至少两种不同的免疫球蛋白样分子的方法，其中所述两种免疫球蛋白样分子各自包含能够形成界面的两个CH3结构域，所述方法包括在所述细胞中提供：a)编码第一含CH3结构域之多肽链的第一核酸，b)编码第二含CH3结构域之多肽链的第二核酸，c)编码第三含CH3结构域之多肽链的第三核酸，和d)编码第四含CH3结构域之多肽链的第四核酸，其中所述第一含CH3结构域之多肽链包含第366位氨基酸处的赖氨酸(K)残基和第351位氨基酸处的赖氨酸(K)残基，并且其中所述第二含CH3结构域之多肽链包含第351位氨基酸处的天冬...
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