一种复合卵黄球γ蛋白的凝胶敷料及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种复合卵黄球γ蛋白(IgY)的凝胶敷料及其制备方法与应用，属于生物制药技术领域。本发明专利技术通过筛选含有HSV

【技术实现步骤摘要】
一种复合卵黄球
γ
蛋白的凝胶敷料及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种复合卵黄球γ蛋白(IgY)的凝胶敷料及其制备方法与应用。
技术背景
[0002]HPV又称“人乳头状瘤状病毒”是一种嗜上皮性病毒，在人和动物中分布广泛。HPV主要引起皮肤、黏膜的疣状病变。根据其与肿瘤发生的关系，HPV可分为高危型与低危型，其中高危型HPV感染被证实是诱发包括女性宫颈癌在内的生殖器癌症的主要原因；低危型则主要引起尖锐湿疣。生殖器疱疹是由单纯疱疹病毒(HSV)引起的性传播疾病，主要是HSV
‑
2型，少数为HSV
‑
1型。尖锐湿疣、生殖器疱疹可反复发作，对病人的健康和心理影响较大。
[0003]目前治疗尖锐湿疣和生殖器疱疹除了物理手术治疗和化学药物治疗外，尚无其他有效方案。而且单纯手术治疗复具有发率高、费用高等弊端。
[0004]因此，需要提供一种可以联合治疗尖锐湿疣和生殖器疱疹的治疗手段，降低尖锐湿疣和生殖器疱疹的复发频率。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：本专利技术要解决的技术问题是提供一种能阻断尖锐湿疣HPV病毒和生殖器疱疹HSV病毒复制、降低该疾病复发率的复合卵黄球γ蛋白的凝胶敷料。
[0006]本专利技术还要解决的技术问题是提供上述凝胶敷料的制备方法。
[0007]技术方案：为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一种复合卵黄球蛋白的凝胶敷料的制备方法，包括如下步骤：
[0009](1)筛选含有HSV
‑
2型和HPV 6型和HPV 11型的组合病原体；
[0010](2)将组合病原体导入工程菌，利用工程菌表达组合抗原；
[0011]HSV
‑
2型、HPV 6型和HPV 11型病毒株由化学与细胞生物学研究所提供。将病毒株接种到横纹肌瘤细胞中，CO2培养箱中培养至80％左右细胞出现细胞病变CPE时收获，
‑
30℃冻融4次，4℃，10000r/min离心100分钟，收集上清液。上清液经4℃，31000r/min离心3小时，弃上清，沉淀用PBS缓冲液悬浮。CsCl密度梯度离心，4℃45000r/min离心4小时，弃上清去除残余CsCl，加入少量PBS稀释纯化后病毒液，60℃高温灭活，5℃保存；
[0012](3)将所获得的组合抗原，辅以QuickAntibody免疫佐剂，注入SPF鸡中，得到含特异性卵黄球蛋白的蛋；
[0013](4)从蛋中分离、提纯，得到IgY抗体提取液；
[0014](5)经冷冻干燥，得到高纯度抗HPV6、HPV 11型和HSV
‑
2型特异性复合卵黄球蛋白冻干粉；
[0015](6)将步骤(5)得到的复合卵黄球蛋白冻干粉包裹于纳米脂质载体内；
[0016]所述的纳米脂质载体具体是纳米结构脂质载体NLC，NLC具有良好的生物相容性，搭载空间大、长期稳定性等优点，且可避免SLN存在的搭载物质泄漏的问题。
[0017](7)依次将复合卵黄球蛋白冻干粉、卡波姆、水及辅料，加入乳化机内，使卵黄球蛋白和卡波姆充分溶解，然后在保温状态下，充分搅拌，当搅拌均匀且无气泡时，即得到复合卵黄球蛋白的凝胶敷料。
[0018]步骤(3)中，所述QuickAntibody免疫佐剂的配制方法如下：
[0019]用生理盐水将步骤(1)得到的组合抗原稀释到40％的最终浓度，偶联了载体蛋白的小分子抗原每针次20
‑
50μg，充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量与抗原按体积比1:1迅速混匀。
[0020]步骤(4)中，所述的提纯是采用乙醇法提纯，其方法如下：
[0021](S1)将蛋打碎，分离收集蛋的蛋黄液；
[0022](S2)将蛋黄液与蒸馏水混合按照体积比为1：(5～10)混合，所述蒸馏水的温度为10℃、pH 6.6，二者混匀后在10℃静置10min；
[0023](S3)在10℃下以1900r/min转速离心10min，弃沉淀，留上清液备用；
[0024](S4)向上清液中加入
‑
20℃预冷的体积分数95％乙醇，使混合物中乙醇的体积分数为60％；
[0025](S5)在4℃搅拌30min后离心，离心提交为22000r/min、4℃、20min，收集沉淀；
[0026](S6)将沉淀溶于25mmol/L NaCl溶液中使其成为均一的悬浮液；
[0027](S7)在4℃下滤纸过滤除去其中的脂蛋白沉淀，收集滤液，即得到含有IgY的水溶性蛋白组分；
[0028](S8)重复步骤(S4)～(S7)一次，得到IgY抗体提取液。
[0029]步骤(5)中，所述的冷冻干燥，其干燥条件为
‑
4℃～
‑
20℃下冷冻干燥2～5h。
[0030]步骤(7)中，所述的辅料包括：增稠剂、防腐剂、中和剂；
[0031]所述的增稠剂为：甘油；
[0032]所述的防腐剂为：苯氧乙醇；
[0033]所述的中和剂为：氨丁三醇；
[0034]进一步地，所述的复合卵黄球蛋白冻干粉、卡波姆、增稠剂、防腐剂、中和剂的比例为：2：3：1：1：2。
[0035]步骤(7)中，所述的搅拌，是用刮框式搅拌或桨式搅拌，搅拌时间为3.5～5.5h，转速为500
‑
700min/r。
[0036]上述复合卵黄球蛋白的凝胶敷料的制备方法制备得到的复合卵黄球蛋白的凝胶敷料。
[0037]上述复合卵黄球蛋白的凝胶敷料在制备抑制HPV 6型和HPV 11型人乳头瘤病毒、HSV
‑
2型单纯疱疹病毒药物中的应用。
[0038]有益效果：
[0039]本专利技术公开了一种可以阻断尖锐湿疣HPV病毒和生殖器疱疹病毒HSV病毒复制、降低该疾病复发率的复合卵黄球γ蛋白(IgY)的治疗型凝胶敷料，本专利技术对低危型6和11型人乳头瘤病毒产生明显作用，可以中和病毒，本专利技术还对HSV
‑
2型病毒有抑制作用，降低复发率。本专利技术具有针对性强，安全性高，和稳定性佳的特性，可以有效配合物理治疗清除残余HPV病毒，以及配合化学药物阻断疱疹病毒继发性感染，防止尖锐湿疣复发，降低生殖器疱疹的复发率，大大降低患者的经济负担和精神压力。
具体实施方式
[0040]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0041]一种复合卵黄球蛋白的凝胶敷料的制备方法，包括如下步骤：
[0042](1)筛选含有HSV
‑
2型和HPV 6型和HPV 11型的组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合卵黄球蛋白的凝胶敷料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)筛选含有HSV
‑
2型和HPV 6型和HPV 11型的组合病原体；(2)将组合病原体导入工程菌，利用工程菌表达组合抗原；(3)将所获得的组合抗原，辅以QuickAntibody免疫佐剂，注入SPF鸡中，得到含特异性卵黄球蛋白的蛋；(4)从蛋中分离、提纯，得到IgY抗体提取液；(5)经冷冻干燥，得到高纯度抗HPV6、HPV 11型和HSV
‑
2型特异性复合卵黄球蛋白冻干粉；(6)将步骤(5)得到的复合卵黄球蛋白冻干粉包裹于纳米脂质载体内；(7)依次将复合卵黄球蛋白冻干粉、卡波姆、水及辅料，加入乳化机内，使卵黄球蛋白和卡波姆充分溶解，然后在保温状态下，充分搅拌，当搅拌均匀且无气泡时，即得到复合卵黄球蛋白的凝胶敷料。2.根据权利要求1所述的复合卵黄球蛋白的凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述QuickAntibody免疫佐剂的配制方法如下：用生理盐水将步骤(1)得到的组合抗原稀释到40％的最终浓度，偶联了载体蛋白的小分子抗原每针次20
‑
50μg，充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量与抗原按体积比1:1迅速混匀。3.根据权利要求1所述的复合卵黄球蛋白的凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的提纯是采用乙醇法提纯，其方法如下：(S1)将蛋打碎，分离收集蛋的蛋黄液；(S2)将蛋黄液与蒸馏水混合按照体积比为1：(5～10)混合，所述蒸馏水的温度为10℃、pH 6.6，二者混匀后在10℃静置10min；(S3)在10℃下以1900r/min转速离心10min，弃沉淀，留上清液备用；(S4)向上清液...

【专利技术属性】
技术研发人员：周陶，
申请(专利权)人：广西博生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：