【技术实现步骤摘要】
EGF间充质干细胞外泌体的纯化方法
[0001]本专利技术涉及外泌体提取分离
，具体涉及一种EGF间充质干细胞外泌体的纯化方法。
技术介绍
[0002]间充质干细胞在再生医学领域具有重大应用前景，能够用于包括肝，心脏，骨骼，软骨，神经和皮肤在内的多种组织再生和治疗。间充质干细胞分泌的外泌体是一种纳米级的细胞外囊泡，属于间充质干细胞的旁分泌介质之一。外泌体能够将携带间充质干细胞中的miRNA和mRNA分子、多肽、蛋白质、细胞因子和脂质等功能性物质，可将这些内容物递送到受体细胞，发挥细胞通讯功能，调节受体细胞的生理功能，有助于受伤或患病组织和器官的愈合。在许多实验模型中都有报道间充质干细胞的治疗作用主要是由其分泌的外泌体发挥作用。因此，在再生医学领域，间充质干细胞来源的外泌体可以用于治疗各种疾病，例如：在皮肤伤口愈合中，其能够促进血管生成，减少炎症，促进皮肤细胞的增殖迁徙等。间充质干细胞来源的外泌体与间充质干细胞相比更稳定，能够减少给药活细胞的安全风险，例如具有低免疫原性，避免微血管阻塞风险等。除了上述提及的作用外，外泌体...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种EGF间充质干细胞外泌体的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：将含有EGF间充质干细胞外泌体的细胞培养液离心，取上清液；步骤2：将步骤1中收集的上清液用切向流超滤系统过滤浓缩，得浓缩液；步骤3：将步骤2中的浓缩液用阴离子交换层析柱分离纯化，收集洗脱峰溶液；步骤4：将步骤3中收集的洗脱峰溶液用肝素亲和层析柱分离纯化，收集洗脱峰溶液，即得所述EGF间充质干细胞外泌体。2.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的纯化方法，其特征在于，步骤1所述离心包括：先通过低速离心去除细胞，再通过高速离心去除细胞碎片和大颗粒杂质；所述低速离心的离心力为2500rpm～3500rpm，离心时间为20分钟～40分钟；所述高速离心的转速为8000rpm～10000rpm，离心时间为20分钟～40分钟。3.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的纯化方法，其特征在于，步骤2所述切向流超滤系统的超滤膜截留分子量为200KDa～400KDa。4.根据权利要求3所述的间充质干细胞外泌体的纯化方法，其特征在于，骤2所述切向流超滤系统的超滤膜截留分子量为250KDa～350KDa。5.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的纯化方法，其特征在于，步骤3所述阴离子交换层析柱中的层析介质为：Q
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sepharose 6FF、Q Bestarose Fast Flow、Diamond Q和Diamond DEAE中的至少一种。6.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的纯化方法，其特征在于，步骤3所述用阴离子交换层析柱分离纯化中使用的平衡液由如下浓度的组分组成：浓度为5mmol/L～100mmol/L的Tris
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HCl，浓度为0.05mol/L～0.2mol/L的NaCl，浓度为5mmol/L～50mmol/L的EDTA
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2Na；步骤3所述用阴离子交换层析柱分离纯化中使用的平衡液的pH为7.0～8.5；步骤3所述用阴离子交换层析柱分离纯化中使用的洗脱液由如下浓度的组分组成：浓度为5mmol/L～100mmol/L的Tris
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HCl，浓度为0.4mol/L～1.5mol/L的NaCl，浓度为5mmol/L～50mmol/L的EDTA
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2Na；步骤3所述用阴离子交换层析柱分离纯化中使用的洗脱液的pH为7.0～8.5。7.根据权利要求6所述的间充质干细胞外泌体的纯化方法，其特征在于，步骤3所述用阴离子交换层析柱分离纯化中使用的平衡液由如下浓度的组分组成：浓度为45mmol/L～55mmol/L的Tris
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HCl，浓度为0.08mol/L～0.12mol/L的NaCl，浓度为15mmol/L～25mmol/L的EDTA
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2Na；步骤3所述用阴离子交换层析柱分离纯化中使用的平衡液的pH为7.8～8.2；步骤3所述用阴离子交换层析柱分离纯化中使用的洗脱液由如下浓度的组分组成：浓度为45mmol/L～55mmol/L的Tris
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HCl，浓度为0.7mol/L～0.9mol/L的NaCl，浓度为15mmol/L～25mmol/L的EDTA
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2Na；步骤3所述用阴离子交换层析柱分离纯化中使用的洗脱液的pH为7.8～8.2。8.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的纯化方法，其特征在于，步骤3所述用阴离子交换层析柱分离纯化的上样速度为1mL/min～2mL/min；所述用阴离子...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹衡芳，周晗，姚基祥，林菁华，
申请(专利权)人：广州远想生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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