本发明专利技术公开了一株枯草芽孢杆菌XX及其在防治土传真菌病害中的应用，属于植物病害生物防治技术领域。该菌株于2021年6月7日保藏于广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61713。本发明专利技术的枯草芽孢杆菌菌株XX及其发酵上清液对尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、立枯丝核菌均具有效果较好的抑制作用，对番石榴纳氏霉具有极佳的抑制效果，对于防治香蕉枯萎病、粉葛根腐病、番石榴干枯病和水稻纹枯病等具有重要的现实意义。菌株培养条件简单，繁殖速度快，上清液来源环保无毒性，对生态环境影响小。菌体和菌液均可作为防控的主体，且易于保存和运输，具有良好的开发应用前景。具有良好的开发应用前景。具有良好的开发应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一株枯草芽孢杆菌XX及其在防治土传真菌病害中的应用
[0001]本专利技术属于植物病害生物防治
，具体涉及一株枯草芽孢杆菌XX及其在防治土传真菌病害中的应用。
技术介绍
[0002]土传病害是指病原菌生活在土壤中，条件适宜时大量繁殖，从植物的根部、茎基部或根茎基部的伤口处侵入植物体内，在植物的导管或筛管部位大量繁殖，阻塞水分和营养物质的正常运输，从而引起整株植物产生萎蔫的病害。引起土传病害的植物病原真菌包括镰刀菌属(Fusarium)、纳氏霉属(Nalanthamala)、丝核菌属(Rhizoctonia)和小核菌属(Sclerotium)等真菌。其中尖孢镰刀菌(F.oxysporum)可引起香蕉、番茄等150多种植物的枯萎病(李敏慧等，2019)；而腐皮镰刀菌(F.solani)也是粉葛等植物根茎基腐的主要病原(林兰稳等，2003)；近年来，在广东广州由番石榴纳氏霉(N.psidii)引起的番石榴干枯病发生越来越严重，研究发现该病原也可由土壤传播，从番石榴的根侵入，先是引起枝条枯死，后期会造成整株枯死(戚佩坤，2000；Hong et al.,2015)。此外，由立枯丝核菌(R.solani)引起的水稻纹枯病，以及由齐整小核菌(S.rolfsii)引起的花卉白绢病都可以经由土壤进行传播为害。
[0003]土传真菌病害发生后，病原菌可以在土壤中越冬以抵御外界不良环境，很难被彻底根除。待温度条件适宜时，继续侵染危害健康植物，如此循环加重病情，严重影响农作物生产。当前，由于种植模式单一和药肥使用不当等人为因素加速了土传病害的发生。生产上常用采用化学药剂熏蒸土壤，或与其他非寄主作物轮作等方法进行该类病害防控，但防治效果不佳。农药对土传病原真菌虽然在实验室条件下抑菌效果较好，而一旦施用到土壤中，防治效果就大打折扣，这与土壤中含有大量可降解农药的微生物有关。而且，大量使用杀菌剂会造成农产品农药残留的风险，还会加速病原菌产生不同程度的抗药性。目前，生产上应用生物防治方法对土传真菌病害进行防控最有效。随着微生物菌剂的推广使用，不但大大缩减了农药的使用量，并且对于修复土壤生态系统、维护土地肥力和改进土壤结构有着重要的现实意义。
[0004]在植物病害生物防治中，芽孢杆菌(Bacillus spp.)是应用较广泛的一种生防细菌。其中，枯草芽孢杆菌(B.subtilis)通过产生抑菌蛋白或抗菌肽等物质，具有广谱性的抑制植物病原真菌的作用，是一种广泛存在于土壤、空气和水等环境中的较为理想的生防细菌。
[0005]综上所述，筛选有效的生防细菌，开发广谱、安全、有效的微生物杀菌剂，控制土传真菌病害的发生，是提高经济作物产量，减少损失，促进农业经济可持续发展的迫切需要。
技术实现思路
[0006]本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一株枯草芽孢杆菌。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供一种生物制剂。
[0008]本专利技术的再一目的在于提供上述枯草芽孢杆菌和/或生物制剂的应用。
[0009]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0010]一株枯草芽孢杆菌，命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)XX，其于2021年6月7日保藏于广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼的广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为GDMCC No：61713。
[0011]所述的枯草芽孢杆菌XX分离自健康香蕉的根际土壤，具有以下特征：
[0012]1、形态、培养特征：枯草芽孢杆菌XX，为革兰氏阳性的短杆状细菌，有芽孢，芽孢中生或偏端生，椭圆形；菌落表面粗糙不透明，干燥，边缘不整齐；
[0013]2、生理生化特征：如下表1所示：
[0014]表1枯草芽孢杆菌XX的生理生化特征
[0015][0016](“+”表示为阳性反应，
“‑”
表示为阴性反应)
[0017]3、16S rDNA基因序列分析：将枯草芽孢杆菌XX与其他芽孢杆菌菌株的16S rDNA序列采用MEGA
‑
X软件，以邻接法构建系统发育树，1000次重复计算，节点显示Bootstrap值大于50％数值，上标“T”表示模式菌株。结果表明，菌株XX测序得到的16S rDNA序列为1386bp，如SEQ ID No.1所示，提交至Genebank中与已登录的序列进行核苷酸同源性比较，该菌的16S rDNA序列与枯草芽孢杆菌(B.subtilis)同源性达100％，与特基拉芽孢杆菌(B.teguilensis)同源性达99.93％。
[0018]综合菌株的形态、培养特征，生理生化特征，16S rDNA序列分析结果，鉴定本专利技术菌株XX为枯草芽孢杆菌。
[0019]一种生物制剂，包含上述枯草芽孢杆菌XX和/或枯草芽孢杆菌XX的发酵上清液。
[0020]所述的枯草芽孢杆菌XX的发酵上清液通过如下方法制备得到：
[0021]将所述的枯草芽孢杆菌XX接种于发酵培养基中，置于25～30℃摇床中150～200rpm培养10～15h，优选为28℃摇床中180rpm培养12h；将菌液2500～3500rpm离心8～12min，优选为3000rpm离心10min，用滤膜孔径为0.2μm的细菌过滤器将菌体过滤去除，得到发酵上清液。
[0022]所述的发酵培养基优选为LB液体培养基。
[0023]所述的LB液体培养基每1000mL体系的配制方法优选为：称取胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g，加水至1000mL，搅拌混匀，再加琼脂15g，121℃湿热灭菌20min。
[0024]上述枯草芽孢杆菌和/或生物制剂在防治土传真菌病害中的应用；
[0025]所述的土传真菌包括香蕉枯萎病菌、粉葛根腐病菌、番石榴干枯病菌和水稻纹枯病菌。
[0026]所述的香蕉枯萎病菌为尖孢镰刀菌古巴专化型热带4号生理小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense Tropical race 4)，该小种是造成目前香蕉发生枯萎病的主要病原，同时也是为害最严重的生理小种；所述的粉葛根腐病菌为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)；所述的番石榴干枯病菌为番石榴纳氏霉(Nalanthamala psidii)；所述的水稻纹枯病菌为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)。
[0027]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0028]1.本专利技术的枯草芽孢杆菌菌株XX对香蕉枯萎病菌具有效果较好的抑制作用，对于防治香蕉枯萎病具有重要的现实意义。
[0029]2.本专利技术的枯草芽孢杆菌菌株XX对粉葛根腐病菌具有效果较好的抑制作用，对于防治粉葛根腐病具有重要的现实意义。
[0030]3.本专利技术的枯草芽孢杆菌菌株XX对番石榴干枯病菌具有效果极佳的抑制作用，对于防治番石榴干枯病具有重要的现实意义。
[0031]4.本专利技术的枯草芽孢杆菌菌株XX对水稻纹枯病菌具有效本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌，其特征在于：命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)XX，其于2021年6月7日保藏于广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼的广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为GDMCC No：61713。2.一种生物制剂，其特征在于：包含权利要求1所述的枯草芽孢杆菌XX和/或枯草芽孢杆菌XX的发酵上清液。3.根据权利要求2所述的生物制剂，其特征在于：所述的枯草芽孢杆菌XX的发酵上清液通过如下方法制备得到：将所述的枯草芽孢杆菌XX接种于发酵培养基中，置于25～30℃摇床中150～200rpm培养10～15h；将菌液2500～3500rpm离心8～12min，用细菌过滤器将菌体过滤去除，得到发酵上清液。4.根据权利要求2所述的生物制剂，其特征在于：所述的枯草芽孢杆菌XX的发酵上清液通过如下方法制备得到：将所述的枯草芽孢杆菌XX接种于发酵培养基中，置于28℃摇床中180rpm培养12h；将菌液3000rpm离心10min，用滤膜孔径为0.2μm的细菌过滤器将菌体过滤去除，得到...
【专利技术属性】
技术研发人员：李敏慧，曾敬，魏玉清，谷亚南，钟家祺，习平根，卓侃，姜子德，孔广辉，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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