一种核酸清洗组合试剂及使用方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，更具体地说，它涉及一种核酸清洗组合试剂及使用方法，其技术方案要点是：所述核酸清洗组合试剂由A液和B液两种清洗剂组合而成，其中A液包含氧化剂、非极性溶剂和表面活性剂，B液包含水溶性阳离子聚合物、抗氧化剂和去离子水。本发明专利技术的一种核酸清洗组合试剂及使用方法，具有化学稳定性和耐热性、使用方便、快速生效和去除率高的优点，能够较好地清除残余在有机玻璃表面的核酸污染。染。染。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸清洗组合试剂及使用方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，更具体地说，它涉及一种核酸清洗组合试剂及使用方法。

技术介绍

[0002]在分子生物学实验室中，由于PCR能在短时间内让靶核酸增加几百万倍，大量的PCR产物如果进入到实验室空气中容易造成核酸污染。此外，即使是极其微量的PCR产物也可以造成假阳性结果，导致实验结果无法正确判断，并且核酸污染物具有积累性和持续性，且难以去除。如何有效去除实验室中的核酸污染物是分子诊断领域亟需解决的问题。
[0003]针对上述问题，传统的核酸清洗试剂多通过加入DNA酶或者化学方法修饰降解DNA或对DNA碱基进行修饰，保证DNA完整性以阻止DNA聚合酶的序列读取等原理来灭活核酸分子，这类核酸清洗剂可以有效去除实验室中的核酸酶和核酸污染，减少重复实验次数。
[0004]上述方案中解决了分子生物学实验室中核酸污染的问题，但是传统核酸清洗剂灭活的DNA链中编码的遗传信息只是被掩盖，但没有被破坏，不能不能完全的降解DNA。在PCR扩增中，这些分子的信息将再次可用，也可通过酶反应放大，造成二次污染。此外，传统核酸清洗剂往往含有有潜在腐蚀性危险的化学成分，包含叠氮化合物、矿物质酸如磷酸、盐酸、刺激性强的过氧化物，碱性物质如氢氧化钠等，酶类试剂还具有腐蚀性，长期使用会腐蚀设备表面，缓慢损耗精密仪器。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种核酸清洗组合试剂及使用方法，具有化学稳定性和耐热性、使用方便、快速生效和去除率高的优点，能够较好地清除残余在有机玻璃表面的核酸污染。
[0006]本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种核酸清洗组合试剂及使用方法，由A液和B液两种清洗剂组合而成，其中A液包含氧化剂、表面活性剂、非极性溶剂和去离子水，B液包含水溶性阳离子聚合物、抗氧化剂、稳定剂和去离子水。
[0007]通过采用上述技术方案，通过对超净工作台台面、实验墙面、移液枪外壳等污染累积的地方分别进行喷涂擦拭A液和B液两种核酸清洗剂，将残存的核酸气溶胶污染带走，从而有效改善PCR结果受干扰出现假阳性的状况。
[0008]作为优选，A液的成分及质量百分比为氧化剂4％
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15％，表面活性剂0.8％
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10％，非极性溶剂5％
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20％和余量的去离子水。其中，氧化剂为过氧化氢或过氧乙酸，活性剂为吐温20、吐温100和曲拉通X
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100，非极性溶剂为乙醇或乙酸。
[0009]通过采用上述技术方案，该试剂中过氧化氢转化率和羟基自由基含量高，具有化学稳定性和耐热性。
[0010]作为优选，B液的成分及质量百分比为水溶性阳离子聚合物1％
‑
10％，抗氧化剂5％
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12％，稳定剂0.5％
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3％和余量的去离子水。其中，水溶性阳离子聚合物为聚酰胺多胺
环氧氯丙烷(PAE)或聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDADMAC)，抗氧化剂为抗坏血酸、谷胱甘肽或硫辛酸，稳定剂为碳酸氢钠或草酸。
[0011]通过采用上述技术方案，在溶液中有效组分的联合作用下，改变吸附在仪器和实验台表面的核酸的电荷分布，促进核酸污染物脱离被吸附表面，然后再结合擦拭过程中产生的剪切力进一步使得核酸污染物从吸附表面解离出来，从而达到去除表面核酸污染的效果。
[0012]作为优选，一种核酸清洗组合试剂的使用方法包含以下步骤：
[0013](1)分别制备A液和B液两种核酸清洗剂并进行雾化处理；
[0014](2)先后使用A液、B液润湿的纸巾擦拭被核酸污染的有机玻璃表面。
[0015]通过采用上述技术方案，能够方便快速地清除实验室中的核酸污染。
[0016]作为优选，A液中氧化剂的含量为4％，表面活性剂的含量为10％，非极性溶剂的含量为5％。
[0017]作为优选，A液中氧化剂的含量为15％，表面活性剂的含量为0.8％，非极性溶剂的含量为20％。
[0018]作为优选，A液中氧化剂为过氧化氢，活性剂为吐温20，非极性溶剂为乙醇。
[0019]作为优选，B液中水溶性阳离子聚合物的含量为1％，抗氧化剂的含量为12％，稳定剂的含量为0.5％。
[0020]作为优选，B液中水溶性阳离子聚合物的含量为10％，抗氧化剂的含量为5％，稳定剂的含量为3％。
[0021]作为优选，B液中水溶性阳离子聚合物为聚酰胺多胺环氧氯丙烷(PAE)，抗氧化剂为抗坏血酸，稳定剂为草酸。
[0022]作为优选，一种核酸清洗组合试剂的使用方法，A液清洗剂重复喷涂擦拭两次能较好地清除有机玻璃表面的核酸污染。
[0023]为证明本专利技术的核酸清洗组合试剂的清除效果，采用实时荧光定量PCR方法检测了在有机玻璃表面使用不同清洗试剂清洗的效率并进行了对比，用移液枪分别吸取的6μL核酸样品，滴于有机玻璃表面，放置于超净工作台上鼓风晾干；待干后，分别用自来水、乙醇、A液、B液、C液润湿的纸巾擦拭有机玻璃表面；干燥2
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5min后，再用去离子水润湿的纸巾擦拭核酸残余的表面，擦拭完后的纸巾置于去离子水中，用干净的镊子混匀，待全部样品管完成操作后，于离心机上短暂离心，收集上清液转移至新的离心管中，进行实时荧光定量检测，实验结果表明A液和B液的清除效率更高。
[0024]本专利技术还进一步验证了A液和B液的联合使用清洗效率，与A液&A液、B液&B液两个实验组进行对比，实验结果表明A液和B液的联合使用能有效提高核酸清除率。
[0025]综上所述，本专利技术具有以下有益效果：
[0026]其一，喷洒即用，能够方便快捷且快速清除核酸污染；
[0027]其二，具有化学稳定性和耐热性，可长时间保存；
[0028]其三，对仪器设备无损伤：无腐蚀性,可直接喷洒在仪器表面。
附图说明
[0029]图1是本专利技术中荧光定量PCR检测五种核酸清洗试剂的ΔCt值；
[0030]图2是本专利技术的核酸清洗剂清洗有机玻璃表面基因组的qPCR扩增曲线；
[0031]图3是本专利技术中实时荧光定量PCR检测A液和B液联合使用的核酸清除率。
具体实施方式
[0032]下面结合附图和实施例，对本专利技术进行详细描述。
[0033]实施例1
[0034]一种核酸清洗组合试剂及使用方法，由A液和B液两种清洗剂组合而成，其中A液由15％的过氧化氢，0.8％的吐温20，20％的乙醇和余量的去离子水组成。B液由10％的聚酰胺多胺环氧氯丙烷(PAE)，5％的抗坏血酸，3％的草酸和余量的去离子水组成。
[0035]实验组为：自来水、乙醇、C液(0.4％次氯酸钠+去离子水)、A液、B液。
[0036]核酸清除率的计算公式如下：
[0037][0038]Delta
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Ct：样品Ct本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸清洗组合试剂及使用方法，其特征在于：所述核酸清洗组合试剂由A液和B液两种清洗剂组合而成，其中A液包含氧化剂、表面活性剂、非极性溶剂和去离子水，B液包含水溶性阳离子聚合物、抗氧化剂、稳定剂和去离子水。2.根据权利要求1所述的核酸清洗组合试剂，其特征在于：所述A液的成分及质量百分比为氧化剂4％
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15％，表面活性剂0.8％
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10％，非极性溶剂5％
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20％和余量的去离子水。3.根据权利要求2所述的核酸清洗组合试剂，其特征在于：所述A液中氧化剂为过氧化氢或过氧乙酸，所述活性剂为吐温20、吐温100和曲拉通X
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100，所述非极性溶剂为乙醇或乙酸。4.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：邬燕琪，陈慧，叶成福，
申请(专利权)人：深圳市朗司医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：