一株广谱耐高温沙门菌烈性噬菌体及其应用制造技术

本发明专利技术属于动物传染性病防治技术领域，具体涉及一株广谱耐高温沙门菌烈性噬菌体及应用。所述沙门氏菌噬菌体保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20211353。本发明专利技术的沙门菌噬菌体对沙门菌耐药菌株具有较好的杀灭效果，对沙门菌感染亦有较好的治疗效果，适于作为防控沙门菌的生物制剂，可在沙门菌综合防控中应用。菌综合防控中应用。

【技术实现步骤摘要】
一株广谱耐高温沙门菌烈性噬菌体及其应用


[0001]本专利技术属于动物传染病防治
，涉及一株噬菌体及其在抑菌方面的应用，本专利技术具体涉及一株 广谱耐高温烈性噬菌体及其应用。

技术介绍

[0002]沙门菌(Salmonella)属于肠杆菌科革兰氏阴性菌，是一种常见的食源性病原微生物，血清型众多，目 前已知2600多种血清型，我国已发现26个菌群、161个血清型。沙门菌宿主范围广分布广泛，临床上多表 现为败血症和肠炎，也可使孕畜流产。目前，沙门菌在猪肉供应链中的污染十分普遍，在食源性细菌感染 中约占70
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80％，给我国养殖业造成了重大的经济损失。此外，沙门菌在自然界中具有广泛的宿主，很容易 在动物与动物、动物与人、人与人之间进行传播。抗生素是预防和治疗此类细菌感染的首选，由于抗菌药 物长期、广泛、不合理的使用(包括作为动物饲料添加剂)，使得该类细菌的耐药性日趋严重，耐药菌的 出现不仅导致动物发病率逐渐上升，使得畜禽养殖成本增加，还会对人体健康造成较大的威胁。因此，寻 找能有效防治沙门菌感染的新方法成为当务之急。
[0003]噬菌体是一种能够特异性吸附和裂解细菌的病毒，与抗生素相比，具有特异性强、指数增殖、广泛分 布、研发时间短等优势，且噬菌体治疗不会使细菌产生耐药性，使得噬菌体有望成为新的抗菌工具，这为 食源性病原菌的生物防控开辟了新的道路。
[0004]但噬菌体的应用仍存在许多问题和局限性。(1)噬菌体具有高度特异性，只能裂解其易感宿主菌， 即其治疗具有专一性，无法达到广谱抗生素的治疗效果，使噬菌体作为抗菌剂广泛应用受到限制。(2) 给药途径的确定较为困难，噬菌体位于血液中容易失活且耐酸碱性弱，不同噬菌体制剂使用的最佳条件均 不相同，需要一段较长的时间来对该制剂进行探讨研究最佳的使用方案。因此，急需寻找广谱、酸碱耐受 良好的噬菌体是本领域亟需解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，针对上述问题，本专利技术的目的是提供一种广谱耐高温烈性噬 菌体及其应用，以实现以下专利技术目的：
[0006]筛选并保存一种广谱沙门菌噬菌体，对耐药沙门菌有不同程度的裂解作用。
[0007]热稳定性、酸碱稳定性良好，特异性裂解多种血清型沙门菌。
[0008]提供一种沙门菌广谱烈性噬菌体的制备方法，得到的噬菌体产品，效价高。
[0009]本专利技术通过下述技术方案实现：
[0010]本专利技术以甲型副伤寒沙门菌为宿主菌进行噬菌体分离，得到一株广谱耐热烈性噬菌体。申请人将该广 谱耐热烈性噬菌体命名为沙门氏菌噬菌体ph2
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2，Salmonella bacteriophage ph2
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2，该沙门氏菌噬菌 体已于2021年11月01日送至中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO： M20211353。
[0011]本专利技术的沙门菌噬菌体ph2
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2对沙门菌有强的裂解作用。在本专利技术中，该株噬菌体
从电镜形态上分析， 属于肌尾噬菌体科科，故将其命名为沙门菌噬菌体ph2
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2。在4
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80℃和pH为4
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12条件下均能存活；在
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80 ℃保存7个月后活性稳定。该噬菌体保存的保护剂为含20％甘油的培养溶液。
[0012]本专利技术的沙门菌噬菌体ph2
‑
2可在制备杀灭沙门菌的药物中的应用，应用方式为将沙门菌噬菌体纯化 后，用于抑制和杀灭沙门菌。
[0013]该沙门菌噬菌体可用于防止沙门菌污染和沙门菌过度生长，其中所述的沙门菌包括鼠伤寒沙门菌、德 比沙门菌、甲型副伤寒沙门菌和婴儿沙门菌。
[0014]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0015](1)经富集后的沙门菌噬菌体原液效价高。在本专利技术中，噬菌体ph2
‑
2的效价≥109pfu/mL。
[0016](2)在不同条件下，本专利技术噬菌体裂解能力强。在本专利技术中，分别比较了噬菌体ph2
‑
2在MOI＝10，MOI ＝1，MOI＝0.1，MOI＝0.01，MOI＝0.001的条件下对甲型副伤寒沙门菌201007的抑菌作用，并发现在 不同的MOI条件下均具有一定的活性。
[0017](3)pH范围更广。在本专利技术中，噬菌体ph2
‑
2的pH稳定性范围为5
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11，具有较宽的pH适用范围。
[0018](4)热稳定性好。在本专利技术中，噬菌体LPST10和LPSE1在4
‑
70℃效价基本不变。
[0019]综上所述，本利用本专利技术的沙门菌噬菌体ph2
‑
2的生物制剂包含能有效抑制和裂解沙门菌的噬菌 体，该生物制剂不仅能在动物处于活体状态的时候使用课以预防沙门菌，也可以在动物成为食品原料 或产品中进行应用，还可以应用于养殖、和食品生鲜加工场地的应用。
附图说明
[0020]图1：本专利技术的沙门菌噬菌体ph2
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2双层平板噬菌斑图。
[0021]图2：本专利技术的噬菌体ph2
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2裂解不同血清型沙门菌的宿主谱阳性结果图。附图标记说明：
[0022]图2中的A图表示的是甲型副伤寒沙门菌；图2中的B图表示的是鼠伤寒沙门菌；图2中的C图表示的是婴 儿沙门菌；图2中的D图表示的是德比沙门菌。
[0023]图3：本专利技术沙门菌噬菌体ph2
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2的电镜观察图。
[0024]图4：本专利技术沙门菌噬菌体ph2
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2的生长曲线。
[0025]图5：噬菌体ph2
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2最佳感染复数图；
[0026]图6：在MOI值为0.1条件下，噬菌体ph2
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2对甲型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌裂菌能力结果图。
[0027]附图标记说明：图6中的A图表示甲型副伤寒沙门菌201007；图6中的B图表示鼠伤寒沙门菌1344。
[0028]图7：不同温度对噬菌体ph2
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2的作用结果图。
[0029]图8：不同pH对噬菌体ph2
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2的作用结果图。
[0030]图9：紫外照射不同时间对噬菌体ph2
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2的作用结果图。
[0031]图10：酒精作用不同时间对噬菌体ph2
‑
2的作用结果图。
[0032]图11：小鼠治疗性试验结果图。
[0033]附图标记说明：图11中的A图表示小鼠灌胃(ig)攻菌组与治疗组体重变化；图11中的B图表示小 鼠腹腔注射(ip)攻菌组与治疗组体重变化。
具体实施方式
[0034]为了更好地解释本专利技术，以下结合具体实施例进一步阐述本专利技术的主要内容，但本专利技术的内容不 仅仅局限于以下实施例。
[0035本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株广谱耐高温沙门氏菌烈性噬菌体(Salmonella bacteriophage)ph2
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2，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴斌，赵梦菲，彭忠，谢锐，华琳，宋文博，陈焕春，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：