DUXAP8在子宫内膜癌诊断、治疗和预防中的应用制造技术

本发明专利技术公开了DUXAP8在子宫内膜癌诊断、治疗和预防中的应用。特别是降低或抑制DUXAP8表达的试剂在制备治疗和/或预防子宫内膜癌的药物中的应用。本发明专利技术通过对长链非编码RNA DUXAP8的基因表达量变化的检测，成功的提供了一种可作为子宫内膜癌的诊断及预后生物标志物。通过降低DUXAP8的基因表达量，成功有效地降低了子宫内膜癌细胞的增殖与克隆形成，因此本发明专利技术提供了DUXAP8在制备治疗子宫内膜癌的药物组合物中的潜在应用。药物组合物中的潜在应用。

【技术实现步骤摘要】
DUXAP8在子宫内膜癌诊断、治疗和预防中的应用


[0001]本专利技术属于癌症领域，具体的，本专利技术涉及DUXAP8在子宫内膜癌诊断、治疗和预防中的应用。

技术介绍

[0002]子宫内膜癌(EC)是世界范围内最常见的妇科肿瘤之一。在我国其发病率仅次于子宫颈癌及卵巢癌，居于妇科恶性肿瘤的第3位。近年来其发病率有不断上升趋势。尽管在诊断技术、手术治疗、化疗和放疗方面取得了很大进展，但子宫内膜癌患者生存率的提高仍然不尽人意。因此，在分子层面上探索、阐明子宫内膜癌的发生、发展、转移的确切机制，对于寻求新的药物靶点，筛选有效的早期诊断分子标记物至关重要。
[0003]随着人类基因组被广泛转录，大部分人类转录组由非编码RNA(ncRNA)组成。非编码RNA缺乏蛋白质编码能力，他们的主要作用是调节编码基因的转录和表达进而影响生物的生长发育，细胞的分化、增殖、凋亡以及应激等多种生物学行为。根据转录本大小，长链非编码RNA(lncRNAs)被定义为超过200个核苷酸的转录本。他们通过与其他分子(如DNA、RNA和蛋白质)的相互作用在疾病发展中充当调节剂或者与目标RNA(例如mRNA和microRNA(miRNA))或特定信号蛋白相互作用影响靶基因的表达，从而调节相关信号通路。过往研究表明lncRNA在子宫内膜癌组织中呈差异表达，改变其表达水平可以抑制子宫内膜癌细胞的增殖。
[0004]在子宫内膜癌的研究中，已经发现了一些lncRNA表达模式、临床相关性、生物学功能和内在的机制。例如，LncRNA NEAT1通过调控miR
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3p/EZH2，上调EZH2的表达，促进子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭。LncRNA TDRG1通过结合和靶向VEGF
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A蛋白增强子宫内膜癌的致瘤性。尽管目前在子宫内膜癌中已研究了一小部分lncRNAs，但目前关于lncRNA分子在子宫内膜癌调控机制中的研究还处于起步阶段，大多数lncRNAs在子宫内膜癌发生和进展中的临床意义和潜在功能仍不清楚。因此，通过研究更多的lncRNA在子宫内膜癌中的发生发展机制，对子宫内膜癌的诊断、预防和治疗起着重要作用，并且为子宫内膜癌的靶向治疗提供潜在的靶点。

技术实现思路

[0005]为了完善现有诊断和治疗子宫内膜癌技术的不足，本专利技术提供一种降低或抑制DUXAP8表达的试剂在制备治疗和/或预防子宫内膜癌的药物中的应用、检测DUXAP8表达水平的试剂在制备诊断子宫内膜癌的产品的应用以及一种筛选抗子宫内膜癌的药物的方法。本专利技术以长链非编码RNA DUXAP8作为子宫内膜癌的诊断及预后生物标志物，通过降低DUXAP8的基因表达量，以抑制子宫内膜癌细胞恶性增殖及克隆形成，为子宫内膜癌靶向治疗提供新靶标。
[0006]当前尚无DUXAP8在子宫内膜癌中的相关报道。
[0007]1、本研究通过TCGA数据库，获得DUXAP8在524例子宫内膜癌患者肿瘤组织及23例
对照正常组织的表达数据，经分析，与对照正常组织相比，DUXAP8在子宫内膜癌肿瘤组织中显著高表达，即DUXAP8可作为子宫内膜癌诊断标志物。
[0008]2、进一步，在524例子宫内膜癌患者癌组织中，低分化组肿瘤组织中DUXAP8表达量显著高于高分化组；
[0009]3、随后，以DUXAP8表达量对524例子宫内膜癌患者进行分组，发现低表达DUXAP8组子宫内膜癌患者总生存期显著长于高表达DUXAP8组，即DUXAP8可作为子宫内膜癌预后标志物。
[0010]4、体外实验证实，与高分化子宫内膜癌细胞株Ishikawa相比，DUXAP8在低分化KLE细胞中表达量显著升高，与TCGA数据库分析结果一致。
[0011]5、本专利技术还提供一种抑制人DUXAP8基因表达的shRNA及其应用。本专利技术筛选了转染效率高、干扰效率高的shRNA并构建了包含该shRNA序列的核酸构建体、慢病毒，其能够高效抑制人源细胞中DUXAP8基因的表达。
[0012]6、进一步，经过编辑后的子宫内膜癌细胞中DUXAP8表达水平显著降低，可有效地抑制子宫内膜癌细胞的增殖及肿瘤干性，为子宫内膜癌治疗开辟新的方向。
[0013]本专利技术的第一方面提供了降低或抑制DUXAP8表达的试剂在制备治疗和/或预防子宫内膜癌的药物中的应用。
[0014]所述应用中，所述试剂较佳地为靶向DUXAP8的shRNA。
[0015]在某一较佳实施方案中，所述shRNA的正义链和反义链分别含有如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的序列。
[0016]所述shRNA较佳地存在于表达载体中。
[0017]所述表达载体优选为慢病毒表达载体。
[0018]本专利技术中，所述表达载体例如pLKO.1
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puro、pRNAT
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U6.1/neo、pSilencer2.1
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U6 neo、pSilencer 4.1
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CMV puro、pLVX
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shRNA1和pAAVtdTomato
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shRNA。
[0019]在某一较佳实施方案中，所述慢病毒表达载体为pLKO.1
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puro。
[0020]所述表达载体较佳地存在于病毒中。
[0021]所述药物较佳地还包括递送载体，所述递送载体用于将含有所述shRNA的表达载体递送进细胞，例如以慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体为例的病毒递送载体和以脂质体为例的脂溶性载体。
[0022]所述应用中，所述试剂较佳地为所述药物的唯一活性成分或有效成分之一。
[0024]本专利技术的第二方面提供了检测DUXAP8表达水平的试剂在制备诊断子宫内膜癌的产品的应用。
[0025]所述检测DUXAP8表达水平的试剂较佳地为DUXAP8的特异性探针(例如带有检测标记，通常与目的基因互补)、基因芯片或PCR引物。
[0026]在某一较佳实施方案中，所述DUXAP8表达水平的分析采用qRT
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PCR的方式。
[0027]在某一较佳实施方案中，所述PCR引物分别包含如SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示的序列。
[0028]本专利技术第三方面提供一种筛选抗子宫内膜癌的药物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0029](1)确定子宫内膜癌细胞中的DUXAP8的表达水平；
[0030](2)将候选药物与步骤(1)中的子宫内膜癌细胞接触，并确定接触后DUXAP8的表达水平；
[0031](3)若步骤(2)中DUXAP8的表达水平显著降低，则表明所述候选药物具有抗子宫内膜癌细胞的潜力。
[0032]所述方法中，步骤(2)中所述接触的时间优选为24
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72小时。
[0033]所述方法中，所述候选药物的使用浓度优选为1nM...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.降低或抑制DUXAP8表达的试剂在制备治疗和/或预防子宫内膜癌的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂为靶向DUXAP8的shRNA；优选地，所述shRNA的正义链和反义链分别含有如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的序列。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述shRNA存在于表达载体中；优选地，所述表达载体为慢病毒表达载体。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述慢病毒表达载体为pLKO.1
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puro。5.如权利要求1
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4任一项所述的应用，其特征在于，所述试剂为所述药物的唯一活性成分或有效成分之一。6.检测DUXAP8表达水平的试剂在制备诊断子宫内膜癌的产品的应用；较佳地，所述检测DUXAP8表达水平的试剂为DUXAP8的特异性探针、基因芯片或P...

【专利技术属性】
技术研发人员：方军，袁奕，范许云，何胜祥，
申请(专利权)人：安徽同科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：