一种促甲状腺激素受体抗原试剂及促甲状腺激素受体抗体定量检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种人促甲状腺激素受体抗体定量检测试剂盒，包括：包被有抗TSHR单克隆抗体A的固相载体；抗原试剂，所述抗原试剂为抗TSHR单克隆抗体B和TSHR的免疫复合物；含有标记物标记的人刺激性促甲状腺激素受体抗体；所述抗TSHR单克隆抗体A与抗TSHR单克隆抗体B不产生竞争性结合。本发明专利技术提供的试剂盒采用竞争法反应原理检测血清或血浆中促甲状腺激素受体抗体的浓度，试剂盒较为稳定，且能够避免生物素或荧光素钠的干扰，制备工艺更简单稳定，重复性良好，在提高产品性能的同时，大大降低了成本。了成本。

【技术实现步骤摘要】
一种促甲状腺激素受体抗原试剂及促甲状腺激素受体抗体定量检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及体外诊断
，具体是一种促甲状腺激素受体抗原试剂及促甲状腺激素受体抗体定量检测试剂盒。

技术介绍

[0002]促甲状腺激素受体(TSHR)是位于甲状腺滤泡上皮细胞膜上的一种大分子糖蛋白，属于G蛋白偶联受体家族成员。生理条件下，促甲状腺激素(TSH)与其受体TSHR结合，经G蛋白激活产生级联反应以实现生物学效应。在遗传和环境作用下，TSHR结构发生变异，产生了抗原性，引起自身免疫反应，产生大量的促甲状腺激素受体抗体(TRAb)。TRAb是一组异质性抗体，根据其功能不同可分为甲状腺刺激抗体(TSAb)、甲状腺刺激阻断抗体(TSBAb)和中性甲状腺激素受体抗体。TSAb可与TSH竞争性结合在TSHR上，通过产生cAMP，刺激甲状腺滤泡细胞分泌合成甲状腺素，继而可引起毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)。TSBAb与TSHR结合，可直接干扰TSH与其受体的结合，从而减弱TSH的生物学效应。另外，TSBAb还可抑制腺苷酸环化酶的活化引起甲减。中性抗体与TSHR结合后既不刺激也不抑制甲状腺功能。
[0003]TSHR由含764个氨基酸的单一多肽链组成，分子量约为84kDa，胞外域大约有414～418个氨基酸，包含六个潜在的N连接糖基化位点，而剩余的序列形成跨膜结构域和细胞内羧基末端。正确的折叠、糖基化和存在TSHR的跨膜区和胞外域是高亲和力配体结合所必需的，同时，跨膜区和细胞内结构的稳定对于维持TSHR的稳定有重要作用。有大量文献表明TSHR本身稳定性很差(参考文献1：FurmaniakJ,SandersJ,SandersP,Miller
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GallacherJ,RyderMM,ReesSmithB.PracticalapplicationsofstudiesontheTSHreceptorandTSHreceptorautoantibodies.Endocrine.2020May；68(2):261
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264.doi:10.1007/s12020
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019
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02180
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9.Epub2020May29.PMID:32472423；PMCID:PMC7266850.参考文献2：IidaY,AmirSM,IngbarSH.Stabilization,partialpurification,andcharacterizationofthyrotropinreceptorsinsolubilizedguineapigfatcellmembranes.Endocrinology.1987Nov；121(5):1627
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36.doi:10.1210/endo
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121
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1627.PMID:3665836.)。在体外诊断检测
中，检测试剂在液体状态下长期保存是其能在自动化检测仪器中正常使用的必要条件，而TSHR稳定性差，易失去活性，很难在2
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8℃条件下长期保存，因而限制了其在自动化监测仪器上的应用。
[0004]TRAb是Graves患者血清中存在对TSHR的特异性自身抗体。血清TRAb的测定可以作为Graves病诊断、治疗及预后判断的良好指标，对妊娠期甲状腺功能亢进症的治疗以及新生儿甲状腺功能异常的风险评估也具有重要价值。目前TRAb的检测方法主要有生物分析法和免疫分析法。生物分析法能区分刺激性抗体和阻断性抗体，但因耗时、操作繁琐，成本高而不能应用于临床实验室的检测。常见的免疫分析法为放射免疫法、酶联免疫法、化学发光法，目前临床应用最广泛的为全自动磁微粒化学发光法。
[0005]现有技术已经公开了多种用于测定TRAb的方法，例如，申请号为
CN201910875687.6的中国专利公开了一种刺激性促甲状腺激素受体抗体浓度的检测试剂盒，包括：包被有刺激性促甲状腺激素受体抗体的磁微粒，含有标记物标记的刺激性促甲状腺激素受体，刺激性促甲状腺激素受体抗体校准品，其固相包被为刺激性促甲状腺激素受体抗体，其解决的问题是避免了抑制性促甲状腺激素受体抗体对测量系统的影响。申请号为CN201611018792.0 的中国专利公开了一种促甲状腺激素受体抗体化学发光免疫测定试剂盒包括：促甲状腺激素受体包被的磁微粒、鼠抗人IgG抗体包被的吖啶酯、促甲状腺激素受体抗体定标品，其固相包被为促甲状腺激素受体，其解决的问题是克服了现有测定方法测定成本高、测定灵敏度低、测定线性范围窄、重现性低、不能定量、操作复杂的缺点。申请号为CN201710115161.9的中国文献公开了一种促甲状腺激素受体抗体的检测方法，其试剂盒组分主要包括FITC 标记的羊抗人球蛋白等试剂及生物薄片，生物薄片为取自大鼠甲状腺细胞制成，包被在载片的反应区内；测定方法为：在反应区内加待测血清，经孵育、漂洗、甩干后，加入FITC标记的羊抗人球蛋白，经孵育、漂洗、甩干后，在荧光显微镜下，甲状腺细胞膜上形成FITC标记的羊抗人球蛋白荧光复合物，产生黄绿色荧光；其解决的问题是克服了促甲状腺激素受体抗体的检测方法中的漏检问题。申请号为CN201810506744.9的中国专利公开了一种能同时检测促甲状腺激素受体分型抗体的酶联免疫试剂盒及检测方法，该试剂盒主要包括：包被抗原、预包被酶标板、漂洗液、促甲状腺激素受体抗体标准品、酶标液，该试剂盒解决的主要问题是可用于定量检测促甲状腺激素受体分型抗体的浓度。文献《Evaluation of the application of TSH receptor stimulatingautoantibodies and the optimization of detection strategy in Graves'disease》(TongM,Ding J,Huang B,Chen J,Wei X,Li Z,Shu J,Hu Z,Jiang X,Sheng H.ClinChim Acta.2021Oct；521:34
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39.doi:10.1016/j.cca.2021.06.017.Epub 2021Jun16.PMID:34144042)公开了某国外厂家的促甲状腺激素受体刺激性抗体检测试剂盒(化学发光法)是由一对重组的人TSHR构建，其检测原理为夹心法，并且只检测刺激性抗体。市面上另有其他采用竞争法原理检测TRAb的商品化试剂盒，其检测系统可大致分为两种：生物素
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亲和素系统或FITC
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抗FITC 系统，这两种系统均有一定的弊端：生物素
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亲和素系统：当标本中含有一定量的生物素会干扰检测结果(参考文献3：张国峰,郭锐,关海霞.重视化验单之外的信息——由生物素干扰检验而被误诊为Graves病甲状腺功能亢进症的实例谈诊断甲状腺疾病的要素[J].中华内分泌代谢杂志,2017,33(09):723
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725.)； FI本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人促甲状腺激素受体抗体定量检测试剂盒，包括：包被有抗TSHR单克隆抗体A的固相载体；抗原试剂，所述抗原试剂为抗TSHR单克隆抗体B和TSHR的免疫复合物；含有标记物标记的人刺激性促甲状腺激素受体抗体；所述抗TSHR单克隆抗体A与抗TSHR单克隆抗体B不产生竞争性结合。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括样本稀释液和/或刺激性促甲状腺激素受体抗体系列校准品。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗TSHR单克隆抗体A的识别位点位于TSHR氨基酸序列的414～764位；所述单克隆抗体B的识别位点位于TSHR氨基酸序列的661～764位。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体B的识别位点位于TSHR氨基酸序列的665～698位。5.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗TSHR单克隆抗体A和抗TSHR单克隆抗体B独立地选自鼠源性单克...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐海娈，靳增明，余春霞，赵艳芳，韩阳瑞，田晓平，李彬，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：