β-人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种β

【技术实现步骤摘要】
β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于免疫检测领域，尤其是涉及一种β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]人绒毛膜促性腺激素(hCG)是一种带有两个非共价键结合亚基的糖蛋白。其α亚基类似于黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、以及促甲状腺激素(TSH)的α亚基。人绒毛膜促性腺激素的β亚基不同于其他垂体糖蛋白激素，并且体现其独特的生物化学和免疫学特性。人绒毛膜促性腺激素由胎盘的细胞合成并能够维护孕期内的黄体功能，是一种很好的孕检标志物，在受孕后的一周就可以检测出来。
[0003]在孕期，人绒毛膜促性腺激素(hCG)水平以指数规律上升，并持续到末次月经后大约8到10周。在孕期的后期，大约受孕后12周时，由于胎盘开始产生类固醇激素，hCG的浓度开始降低。人绒毛膜促性腺激素值下降表示流产、宫外孕、妊毒症等。
[0004]目前临床实验室对人绒毛膜促性腺激素的检测，主要采用化学发光法和酶联免疫荧光法。临床和实验室常用的检测方法主要有酶联免疫法、免疫荧光法、化学发光法等。
[0005]在中国专利文献CN107677837A中，公开了一种β人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，包括试剂R1和试剂R2的制备；试剂R1的制备包括：向MES缓冲液中添加叠氮钠、蔗糖、Tween
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80和PEG
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8000，制得试剂R1；试剂R2的制备包括：(1)向MES缓冲液中添加NaCl、叠氮钠、牛血清蛋白、甘油，制得乳胶微球溶解试剂；(2)将β
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人绒毛膜促性腺激素抗体包被到乳胶微球中，制得抗体胶乳；(3)将抗体胶乳离心去上清液，然后用乳胶微球溶解试剂溶解沉淀物，超声分散，制得试剂R2。
[0006]上述技术方案的β人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒检测效果不是很理想，究其原因，和试剂种类的选择以及含量有密切关系。

技术实现思路

[0007]本专利技术要解决的技术问题是提供一种β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，能够提高睾酮检测的准确度，抗干扰性好，稳定性好。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是，该β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒包括有试剂R1、试剂R3和试剂R4；其中，所述试剂R1具有链霉亲和素包被的磁性微粒和三羟甲基氨基甲烷Tris缓冲液，所述试剂R3具有吖啶酯标记的鼠抗人HCG抗体和磷酸盐缓冲液，所述试剂R4具有生物素标记的鼠抗人HCG抗体和吗啉乙磺酸MES；
[0009]还包括有校准品和质控品。
[0010]检验原理为采用双抗体夹心法进行检测，将样本、生物素标记的HCG+β单克隆抗体以及链霉亲合素包被的磁性微粒在温育条件下反应，抗体捕获样本中的抗原，形成抗原抗体复合物，结合到磁性微粒上，孵育结束后，加磁场沉淀，去掉上清液，用清洗液清洗沉淀复合物，并吸干废液，除去未与磁性微粒结合的物质，加入吖啶酯标记的另外一株HCG+β单克
隆抗体在温育条件下反应，形成抗原抗体夹心复合物，检测读数：温育结束后，加磁场沉淀，去掉上清液，用清洗液清洗沉淀复合物，并吸干废液，除去未与磁性微粒结合的物质，再将反应杯送入测量室中。仪器自动泵入激发液，使复合物产生化学发光信号，通过光电倍增器测量发光强度，仪器自动通过工作曲线计算得出检测结果。
[0011]在本专利技术中，在试剂R1、试剂R3和试剂R4中均有缓冲液(试剂R4中，吗啉乙磺酸MES是缓冲液)，此外，β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒包括有校准品和质控品，检测结果准确度高，抗干扰性好，稳定性好。
[0012]优选的，所述试剂R1、所述试剂R3和所述试剂R4中均含有防腐剂Proclin 300。
[0013]优选的，所述校准品和质控品为冻干粉状态的通过体外重组获得的人绒毛膜促性腺激素重组抗原；所述防腐剂Proclin 300为1g/L。
[0014]优选的，在所述试剂R1中，所述链霉亲和素包被的磁性微粒为2.5g/L，所述三羟甲基氨基甲烷Tris缓冲液为50mmol/L；在所述试剂R3中，所述吖啶酯标记的鼠抗人HCG抗体为0.15mg/L，所述磷酸盐缓冲液为100mmol/L；在所述试剂R4中，所述生物素标记的鼠抗人HCG抗体为0.78mg/L，所述吗啉乙磺酸MES为100mmol/L。
[0015]优选的，在所述试剂R1、所述试剂R3和所述试剂R4中均含有牛血清白蛋白BSA，所述牛血清白蛋白BSA为10g/L。
[0016]本专利技术要解决的另一个问题是提供一种β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，所述β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒包括有试剂R1、试剂R3和试剂R4，包括以下步骤：
[0017]S1所述试剂R1的制备：取直径1uM链霉亲和素包被的磁性微粒，用磁珠稀释液稀释浓度，搅拌混匀；
[0018]S2所述试剂R3的制备：将一株针对HCG抗原表位的鼠抗人HCG抗体，与吖啶酯混合后进行吖啶酯标记；标记完成后进行离心脱盐纯化，得到一株针对HCG抗原表位的吖啶酯标记的鼠抗人HCG抗体；
[0019]将得到的一株针对HCG抗原表位的吖啶酯标记的鼠抗人HCG抗体用稀释液稀释浓度；
[0020]S3所述试剂R4的制备：将鼠抗人HCG抗体用缓冲液稀释浓度，与生物素混合后进行生物素标记；标记完成后进行离心脱盐纯化，得到生物素标记的鼠抗人HCG抗体；
[0021]将得到的生物素标记的鼠抗人HCG抗体用稀释液稀释浓度；
[0022]S4分装试剂：将制备好的所述试剂R1、所述试剂R3和所述试剂R4进行分装，于2
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8℃避光存储；
[0023]所述β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒还包括有校准品和质控品。
[0024]优选的，在所述步骤S1中，磁珠稀释液包含Tris作为缓冲剂，BSA作为封闭剂和Proclin300作为防腐剂；在所述步骤S2中，稀释液包括二水合磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二钠作为缓冲剂，BSA、酪蛋白作为封闭剂，Proclin 300作为防腐剂，Tween
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20作为表面活性剂；在所述步骤S3中，稀释液的主要成分为MES。
[0025]优选的，在所述步骤S2和所述步骤S3中，均采用Zeba脱盐离心柱进行离心脱盐纯化；在所述步骤S2中，进行标记时，是在37℃反应90分钟进行标记；在所述步骤S3中，进行标记时，是在37℃反应60分钟进行标记。
℃避光存储；
[0043]所述β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒还包括有校准品和质控品。
[0044]在所述步骤S1中，磁珠稀释液包含Tris作为缓冲剂，BSA作为封闭剂和Proclin 300作为防腐剂；在所述步骤S2中，稀释液包括二水合磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，其特征在于，包括有试剂R1、试剂R3和试剂R4；其中，所述试剂R1具有链霉亲和素包被的磁性微粒和三羟甲基氨基甲烷Tris缓冲液，所述试剂R3具有吖啶酯标记的鼠抗人HCG抗体和磷酸盐缓冲液，所述试剂R4具有生物素标记的鼠抗人HCG抗体和吗啉乙磺酸MES；还包括有校准品和质控品。2.根据权利要求1所述的β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1、所述试剂R3和所述试剂R4中均含有防腐剂Proclin 300。3.根据权利要求2所述的β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，其特征在于，所述校准品和质控品为冻干粉状态的通过体外重组获得的人绒毛膜促性腺激素重组抗原；所述防腐剂Proclin300为1g/L。4.根据权利要求1
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3任一项所述的β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，其特征在于，在所述试剂R1中，所述链霉亲和素包被的磁性微粒为2.5g/L，所述三羟甲基氨基甲烷Tris缓冲液为50mmol/L；在所述试剂R3中，所述吖啶酯标记的鼠抗人HCG抗体为0.15mg/L，所述磷酸盐缓冲液为100mmol/L；在所述试剂R4中，所述生物素标记的鼠抗人HCG抗体为0.78mg/L，所述吗啉乙磺酸MES为100mmol/L。5.根据权利要求4所述的β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，其特征在于，在所述试剂R1、所述试剂R3和所述试剂R4中均含有牛血清白蛋白BSA，所述牛血清白蛋白BSA为10g/L。6.一种β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述β
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人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒包括有试剂R1、试剂R3和试剂R4，包括以下步骤：S1所述试剂R1的制备：取直径1uM链霉亲和素包被的磁性微粒，用磁珠稀释液稀释浓度，搅拌混匀；S2所述试剂R3的制备：将一株针对HCG抗原表位的鼠抗人HCG抗体，与吖啶酯混合后进行吖啶酯标记；标记完成后进行离心脱盐纯化，得到一株针对HCG抗原表位的吖啶酯标记的鼠抗人HCG抗体；将得到的一株针对HCG抗原表位的吖啶酯标记的鼠抗人HCG抗体用稀释液稀释浓度；S3所述试剂R4的制备：将鼠抗人HCG抗体用缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：许行尚，杰弗瑞，
申请(专利权)人：广西岚煜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：