基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法，所述方法为采用高效液相色谱法或超高效液相色谱法测定待测黄芩样品溶液，得到黄芩样品指纹图谱，收集所述指纹图谱的2号、3号、4号、5号、6号、7号、8号和10号色谱峰的峰面积；峰面积求和，再根据峰面积

【技术实现步骤摘要】
基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法及应用


[0001]本专利技术属于成分分析
，更具体地，本专利技术涉及一种基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法，及其在黄芩药材质量控制中的应用。

技术介绍

[0002]黄酮类成分是黄芩的主要化学成分和特征性成分，其种类繁多，主要包括黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素以及千层纸素A等，具有抗流感、抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多方面的药效活性，是黄芩的主要药效部位。
[0003]关于黄芩总黄酮含量测定已有大量的研究报道。目前常用的方法有紫外分光光度法和高效液相指纹图谱法。如王磊等以芦丁为对照品采用紫外分光光度法(415nm)测定了不同产地黄芩中总黄酮的含量，含量为10.20％～12.57％；阿木古楞等以芦丁为对照品采用紫外分光光度法(510nm)测定了不同超声提取条件下黄芩提取液中总黄酮的含量，宋国虎等采用紫外分光光度法研究了承德地区二年生黄芩生长发育过程中总黄酮含量的动态积累变化规律，最高含量为42.92％；李玉兰等以黄芩苷为对照品采用紫外分光光度法(278nm)测定了从黄芩中提取和纯化的总黄酮含量，粗提物中含量为15.8％。田海丽等以芸香苷为对照品采用紫外分光光度法(510nm)测定了黄芩不定根中的总黄酮含量。紫外分光光度法，方法较成熟，应用较多，但仅通过一个含量数据进行质量优劣判别，无法呈现出总黄酮多成分特点的内在质量概貌。
[0004]关于黄芩高效液相指纹图谱的研究报道也很多，田甜等开展了不同产地和不同年限黄芩HPLC指纹图谱的研究，共检出13个共有峰，并通过对照品指认出黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A；管仁伟等建立了不同种质黄芩高效液相色谱指纹图谱，共检出11个共有峰，并通过对照品指认出黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素；郑如文等开展黄芩UPLC指纹图谱的研究，通过对照品指认出野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A，并测定了黄芩苷和汉黄芩苷的含量；苏建春等建立了黄芩UPLC指纹图谱，通过对照品指认出黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A；王丹等建立了黄芩UPLC指纹图谱，共检出29个共有峰，利用对照品和LC
‑
MS技术对其中的27个化合物进行了指认和鉴定；张雪梅等基于HPLC指纹图谱和多指标定量研究了黄芩趁鲜加工的质量变化规律，共检出22个共有峰，通过对照品指认并测定了黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等四种成分的含量。通过上述研究报道可知，黄芩高效液相指纹图谱测定方法较成熟，色谱峰以黄酮类成分为主。指纹图谱为黄芩整体质量控制的常用方法，研究较多，技术成熟，其主要优点在于能呈现出较多的成分(特别是黄酮类成分)信息，质量概貌较全，可对样品的整体质量进行定性判别，但不能准确定量。
[0005]由上述两种测定方法可知，两种方法在整体质量控制方面各具优势，也存在各自不足，但又具有相关性与互补性，若能通过探索将两者进行适当结合，建立一种基于黄芩指纹图谱的总黄酮含量的测定方法，将可实现“通过一张指纹图谱既可整体定性又可整体定量”的双重质量控制效果。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术的目的之一是提供一种基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法，该方法基于黄芩指纹图谱及建立的峰面积
‑
总黄酮含量数学模型，即可定性又可定量分析黄芩中的黄芩总黄酮含量。
[0007]实现上述专利技术目的的具体技术方案如下：
[0008]一种基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法，包括以下步骤：
[0009](1)、采用高效液相色谱法或超高效液相色谱法测定待测黄芩样品溶液，得到黄芩样品指纹图谱，收集所述指纹图谱的2号、3号、4号、5号、6号、7号、8号和10号色谱峰的峰面积数据；
[0010](2)、将步骤(1)中所述8个色谱峰的峰面积求和，根据峰面积
‑
总黄酮含量的数学模型，即得所述待测黄芩样品的总黄酮含量；
[0011]所述峰面积
‑
总黄酮含量的数学模型为：Y＝aX+b，其中，X为峰面积，Y为总黄酮含量，1.10*e
‑
10≤a≤1.20*e
‑
10，0.090≤b≤0.100。
[0012]在其中一些实施例中，所述峰面积
‑
总黄酮含量的数学模型中，1.10*e
‑
10≤a≤1.15*e
‑
10，0.095≤b≤0.098。
[0013]在其中一些实施例中，所述峰面积
‑
总黄酮含量的数学模型为Y＝0.096+1.128*e
‑
10X。
[0014]在其中一些实施例中，所述超高效液相色谱法的色谱条件为：
[0015]色谱柱：BEH C18；流动相：0.1％甲酸水溶液(A)
‑
乙腈(B)；梯度洗脱：0～0.5min，15％B；0.5～2min，15％～20％B；2～6min，20％～23％B；6～10min，23％～30％B；10～12min，30％～60％B；12～14min，60％B，运行5
±
1min；检测波长：280
±
2nm；流速：0.4
±
0.1mL/min；柱温：40
±
1℃；进样量：2μL。
[0016]在其中一些实施例中，所述待测黄芩样品溶液是通过以下方法制备而得：精密移取50ml 65％～75％甲醇，加至0.25g～0.35g过60目～70目筛的待测黄芩样品粉末中，称重，超声10min～60min，冷却至室温后补足重量，摇匀过滤，取1ml滤液，加65％～75％甲醇定容至10ml，摇匀，微孔滤膜过滤，取滤液，即得。
[0017]在其中一些实施例中，步骤(2)中所述峰面积
‑
总黄酮含量的数学模型的建立方法，包括以下步骤：
[0018](1)、采用高效液相色谱法或超高效液相色谱法分别对黄芩样品集的黄芩样品进行测定，得到黄芩样品指纹图谱的共有峰峰面积数据集；
[0019](2)、采用紫外分光光度法对步骤(1)所述黄芩样品集中的黄芩样品进行测定，得到总黄酮含量数据集；
[0020](3)、对步骤(1)所述共有峰峰面积数据集的每一个色谱峰峰面积，分别和步骤(2)所述总黄酮含量数据集对应的总黄酮含量进行相关性分析，得到8个显著相关的优选峰峰面积数据集，即为2号、3号、4号、5号、6号、7号、8号和10号色谱峰；
[0021](4)、将每个黄芩样品的所述8个优选峰的峰面积求和组成峰面积数据集，再与每个黄芩样品的所述总黄酮含量数据集，组成对应的峰面积
‑
总黄酮含量数据集；运用统计学方法对所述峰面积
‑
总黄酮含量数据集进行分析，即得峰面积
‑
黄芩总黄酮含量的数学模型。
[0022]在其中一些实施例中，步骤(3)中，所述优选峰是依据相关系数大小和显著性程度筛选获得的。所述相关系数大于0.3，所述显本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、采用高效液相色谱法或超高效液相色谱法测定待测黄芩样品溶液，得到黄芩样品指纹图谱，收集所述指纹图谱的2号、3号、4号、5号、6号、7号、8号和10号色谱峰的峰面积；(2)、将步骤(1)中所述8个色谱峰的峰面积求和，根据峰面积
‑
总黄酮含量的数学模型，即得所述待测黄芩样品的总黄酮含量；所述峰面积
‑
总黄酮含量的数学模型为：Y＝aX+b，其中，X为峰面积，Y为总黄酮含量，1.10*e
‑
10≤a≤1.20*e
‑
10，0.090≤b≤0.100。2.根据权利要求1所述的基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述峰面积
‑
总黄酮含量的数学模型中，1.10*e
‑
10≤a≤1.15*e
‑
10，0.095≤b≤0.098。3.根据权利要求2所述的基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法，其特征在于，所述峰面积
‑
总黄酮含量的数学模型为Y＝0.096+1.128*e
‑
10X。4.根据权利要求1～3任一项所述的基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述超高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：BEH C18；流动相：0.1％甲酸水溶液(A)
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乙腈(B)；梯度洗脱：0～0.5min，15％B；0.5～2min，15％～20％B；2～6min，20％～23％B；6～10min，23％～30％B；10～12min，30％～60％B；12～14min，60％B，运行5
±
1min；检测波长：280
±
2nm；流速：0.4
±
0.1mL/min；柱温：40
±
1℃。5.根据权利要求1～3任一项所述的基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述待...

【专利技术属性】
技术研发人员：江志强，戴艳萍，郑如文，刘宏，蒋研风羊，徐煜耀，
申请(专利权)人：广州白云山光华制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：