一种磺肽指示剂的纯化制备方法技术

一种磺肽指示剂的纯化制备方法，涉及试剂的纯化制备。采用快速液相制备色谱系统检测并分离磺肽指示剂和其中的杂质，采用旋转蒸发仪、氮吹仪回收制备纯化的磺肽指示剂。称取磺肽指示剂溶于N,N

【技术实现步骤摘要】
一种磺肽指示剂的纯化制备方法


[0001]本专利技术涉及试剂的纯化制备，特别是涉及一种磺肽指示剂的纯化制备方法。

技术介绍

[0002]自工业革命以来，全球平均表层海洋酸度增加了26％(Byrne,R.H.Measuring Ocean Acidification:New Technology for a New Era of Ocean Chemistry.Environ.Sci.Technol.2014,48,5352
‑
5360)，表层海水pH平均每年下降0.0019(Intergovernmental Panel on Climate Change.Climate Change 2013:The Physical Science Basis.Working Group I Contribution to the Fifth Assessment Report of the IPCC.Final Draft.；IPCC:Geneva,Switzerland,2013.)。海水对二氧化碳的吸收改变了海洋的化学性质，海水酸度的持续增加被称为海洋酸化现象(Caldeira,K.；Wickett,M.E.Oceanography:Anthropogenic carbon and ocean pH.Nature 2003,425(6956),365
‑
365)。海洋酸化改变了海洋碳酸盐系统，对海洋生态系统和生物地球化学循环有重大影响(Six,K.；Kloster,S.；Ilyina,T.；Archer,S.D.；Zhang,K.；Maier
‑
Reimer,E.Global warming amplified by reduced sulphur fluxes as a result of ocean acidification.Nat.Clim.Change 2013,3,975
–
978)。海洋酸化及其生态效应和海洋碳循环是全球变化研究的热点之一。
[0003]海水碳酸盐体系参数的准确测定对海洋酸化极其生态效应具有重要意义。利用分光光度法测定海水的pH和总碱度，能够达到较好的精密度和准确度，因此常被应用于实际海洋观测中pH和总碱度的测定。光度法测定海水pH和总碱度是利用磺肽指示剂在不同pH条件下颜色变化的原理，通过吸光值的测定计算海水的pH和总碱度。目前市售的磺肽指示剂中含有一定量的杂质，对测定结果有着不同的影响(Yao,W.；Liu,X；Byrne,R.H.Impurities in indicators used for spectrophotometric seawater pH measurements:Assessment and remedies.Mar.Chem.2007,107,167
‑
172)，而现有的指示剂纯化方法操作繁琐、产量小，导致纯化后pH指示剂价格极高且不易获得(Liu,X.；Patsavas,M.C.；Byrne,R.H.Purification and characterization of meta
‑
Cresol purple for spectrophotometric seawater pH measurements.Environ.Sci.Technol.2011,45,4862
‑
4868.)，从而限制了光度法的广泛应用，海水pH值与总碱度的准确测定受到极大影响。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于针对现有技术存在的上述问题，提供能够简单、快速的纯化不同种类磺肽指示剂的一种磺肽指示剂的纯化制备方法，利用制备液相色谱建立高流量、大进样、高通量的指示剂纯化制备方法，提高指示剂的纯化效率，降低纯化成本，为pH和总碱度的准确测定提供重要支撑。
[0005]一种磺肽指示剂的纯化制备方法，采用快速液相制备色谱系统检测并分离磺肽指示剂和其中的杂质，采用旋转蒸发仪、氮吹仪回收制备纯化的磺肽指示剂，具体步骤如下：
[0006]1)称取40～100mg磺肽指示剂置于样品瓶中，加入1～10mL N,N
‑
二甲基甲酰胺，充分混匀，静置放置，超声；
[0007]2)取步骤1)的样品过滤后置于注射器中；
[0008]3)将步骤2)注射器中的样品注入快速液相制备色谱仪中进行检测、分离；
[0009]4)收集分离后的纯化样品，用乙腈转移至烧瓶中，用旋转蒸发仪将样品旋蒸至体积约为2～5mL；
[0010]5)将步骤4)得到的样品转移至玻璃离心管中；
[0011]6)用1.5～2.5mL乙腈清洗烧瓶3～4次，将清洗溶液合并至步骤5)的玻璃离心管中，将离心管放置于氮吹仪进行氮吹；
[0012]7)氮吹至样品体积约2～5mL，将样品转移至玻璃表面皿中；
[0013]8)用少量乙腈清洗离心管壁，将清洗溶液合并至步骤7)的玻璃表面皿中；将表面皿封口，并预留通风小孔，置于通风橱晾干或烘箱烘干；
[0014]9)将获得的固体样品转移至样品瓶中，置于阴凉避光处保存。
[0015]在步骤1)中，所述磺肽指示剂包括百里酚蓝、间甲酚紫、苯酚红、溴甲酚绿或溴甲酚紫；各种磺肽指示剂的配制浓度为50～100mmol/L；通过调整样品与溶剂N,N
‑
二甲基甲酰胺的比例，尽可能地增加不同种类磺肽指示剂的溶解度：所述静置放置的时间可为5～15min，超声的时间可为1～30min。
[0016]在步骤2)中，所述过滤可采用0.22μm滤膜过滤。
[0017]在步骤3)中，所述快速液相制备色谱仪中进行检测时流动相中有机相为乙腈，无机相为超纯水，采用梯度洗脱程序，有机相比例为5％～90％；分离时采用的色谱柱为C18快速分离柱，粒径为40～60μm，孔径为进行快速液相制备色谱检测、分离时，不同磺肽指示剂的检测波长不同：优选地，百里酚蓝的检测波长为435nm、间甲酚紫的检测波长为434nm、苯酚红的检测波长为557nm、溴甲酚绿的检测波长为421.5nm、溴甲酚紫的检测波长为444nm。
[0018]在步骤8)中，所述封口可用铝箔纸将表面皿封口；所述烘箱烘干的温度可为40～70℃。
[0019]与现有技术相比，本专利技术提供的技术方案可用于多种磺肽指示剂的纯化制备。同时，通过调整指示剂与溶剂的比例，尽可能地增加不同类型磺肽指示剂的溶解度，从而更好地进行纯化制备。本专利技术利用快速液相制备色谱系统分离磺肽指示剂和其中的杂质，利用旋转蒸发仪、氮吹仪回收制备纯化的磺肽指示剂。根据不同种类磺肽指示剂选择不同的洗脱程序和检测波长。本专利技术具有通用性强、操作简便、快速、回收率高、产量大、成本低等优点，可以直接有效分离磺肽指示剂与杂质，获得高纯度的磺肽指示剂。
附图说明
[0020]图1为本专利技术实施例1中间甲酚紫指示剂的色谱图。
[0021]图2为本专利技术实施例2中苯酚红指示剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磺肽指示剂的纯化制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)称取40～100mg磺肽指示剂置于样品瓶中，加入1～10mL N,N
‑
二甲基甲酰胺，充分混匀，静置放置，超声；2)取步骤1)的样品过滤后置于注射器中；3)将步骤2)注射器中的样品注入快速液相制备色谱仪中进行检测、分离；4)收集分离后的纯化样品，用乙腈转移至烧瓶中，用旋转蒸发仪将样品旋蒸至体积约为2～5mL；5)将步骤4)得到的样品转移至玻璃离心管中；6)用1.5～2.5mL乙腈清洗烧瓶3～4次，将清洗溶液合并至步骤5)的玻璃离心管中，将离心管放置于氮吹仪进行氮吹；7)氮吹至样品体积约2～5mL，将样品转移至玻璃表面皿中；8)用少量乙腈清洗离心管壁，将清洗溶液合并至步骤7)的玻璃表面皿中；将表面皿封口，并预留通风小孔，置于通风橱晾干或烘箱烘干；9)将获得的固体样品转移至样品瓶中，置于阴凉避光处保存。2.如权利要求1所述一种磺肽指示剂的纯化制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述磺肽指示剂包括百里酚蓝、间甲酚紫、苯酚红、溴甲酚绿或溴甲酚紫。3.如权利要求1所述一种磺肽指示剂的纯化制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述磺肽指示剂的配制浓度为50～100mmol/L。4.如权利要求1所述一种磺肽指示剂的纯化制备方法，其特征在于在步骤1)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：马剑，李杭茜，陈钊英，刘宝敏，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：