【技术实现步骤摘要】
一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法
[0001]本专利技术涉及转录因子
,具体为一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法。
技术介绍
[0002]转录因子是一群能与基因5`端上游特定序列专一性结合,从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子,真核生物转录起始过程十分复杂,往往需要多种蛋白因子的协助,转录因子与RNA聚合酶Ⅱ形成转录起始复合体,共同参与转录起始的过程,根据转录因子的作用特点可分为两类;第一类为普遍转录因子,它们与RNA聚合酶Ⅱ共同组成转录起始复合体时,转录才能在正确的位置开始,除TFⅡD以外,还发现TFⅡA,TFⅡB,TFⅡF,TFⅡE,TFⅡH等,它们在转录起始复合体组装的不同阶段起作用,第二类转录因子为组织细胞特异性转录因子,这些TF是在特异的组织细胞或是受到一些类固醇激素\生长因子或其它刺激后,开始表达某些特异蛋白质分子时,才需要的一类转录因子,转录因子的构建已用于转录因子的生物学功能研究中起到重要作用,为此现提出一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法。 />
技术实现思路
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法,其特征在于:包括以下材料:诱饵克隆:pGADT7
‑
A诱饵载体:pGADT7文库酵母质粒:motifClontech酵母单杂交系统培养基贮备液。2.根据权利要求1所述的一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法,其特征在于:所述培养基包含:0.5%Yeast extract,1%Polypeptone,1%NaCl大肠杆菌培养基、1%Yeast extract,2%Tryptone,2%Glucose,0.02%Adenine酵母完全培养基、酵母缺陷型筛选培养基,所述贮备液为10
×
TE:0.1M Tris
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HCl(pH7.5),10mM EDTA,高压灭菌与10
×
LiAc:1M LiAc(pH7.5),高压灭菌。3.根据权利要求1所述的一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法,其特征在于:包含有将诱饵质粒转化受体菌Y187中及其自激活检测、文库筛选、酵母阳性克隆鉴定及测序比对、酵母阳性克隆回转验证四部分。4.根据权利要求3所述的一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法,其特征在于:所述将诱饵质粒转化受体菌Y187中及其自激活检测包含有酵母转化、酵母转化方法、自己活检测三个方面,所述自激活检测后选用80mM3AT进行后续筛库浓度。5...
【专利技术属性】
技术研发人员:朱也,
申请(专利权)人:南京瑞源生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:
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