组蛋白乙酰化修饰酶的HAT和/或HCT活性的检测方法和抑制剂筛选方法技术

本发明专利技术公开了组蛋白乙酰化修饰酶的HAT和/或HCT活性的检测方法和抑制剂筛选方法，包括如下步骤：将组蛋白乙酰化修饰酶、AcCoA或/和CrCoA、缓冲液以及肽底物的混合物在设定温度下反应，得反应产物溶液；将反应产物溶液、磁珠溶液和PBS溶液在混匀仪中孵育设定时间后，向其中加入牛血清白蛋白溶液孵育设定时间，然后采用PBS洗涤后重悬，得反应混合液；在反应混合液中加入DyLight 488标记的抗组蛋白H3抗体和/或DyLight 650标记的抗组蛋白H3抗体，孵育；磁分离后，将得到的固体混合物采用SDS溶液重悬，将重悬混合物反应后，固液分离，上清液通过单分子检测，得到HAT和/或HCT活性。得到HAT和/或HCT活性。得到HAT和/或HCT活性。

【技术实现步骤摘要】
组蛋白乙酰化修饰酶的HAT和/或HCT活性的检测方法和抑制剂筛选方法


[0001]本专利技术属于酶活性检测
，涉及组蛋白乙酰化修饰酶的HAT和/或HCT活性的检测方法和抑制剂筛选方法，具体涉及采用单分子同时检测组蛋白乙酰化修饰酶p300的乙酰转移酶和巴豆酰转移酶活性的方法。

技术介绍

[0002]这里的陈述仅提供与本专利技术相关的
技术介绍
，而不必然地构成现有技术。
[0003]组蛋白是真核细胞和原核细胞中构成染色质的基本蛋白，他们与DNA结合构成核小体结构。目前已经发现了多种组蛋白修饰产物，如甲基化、乙酰化和磷酸化修饰产物，这些物质在许多重要的细胞功能中发挥着关键作用。近年来，一系列新的组蛋白赖氨酸酰化修饰被发现，包括巴豆酰化、丙二酰化、丁酰化、丙酰化和琥珀酰化等，这些修饰在细胞代谢和表观遗传调控中也发挥重要作用。组蛋白修饰通常是动态的，由组蛋白“作者”和“橡皮擦”共同调解。例如，组蛋白乙酰化是由组蛋白乙酰化“作者
”‑
组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferases，HAT)催化的，该酶催本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.组蛋白乙酰化修饰酶的HAT和/或HCT活性的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：将组蛋白乙酰化修饰酶、AcCoA或/和CrCoA、缓冲液以及肽底物的混合物在设定温度下反应，得反应产物溶液；将反应产物溶液、磁珠溶液和PBS溶液在混匀仪中孵育设定时间后，向其中加入牛血清白蛋白溶液孵育设定时间，然后采用PBS洗涤后重悬，得反应混合液；在反应混合液中加入DyLight 488标记的抗组蛋白H3抗体和/或DyLight 650标记的抗组蛋白H3抗体，孵育；磁分离后，将得到的固体混合物采用SDS溶液重悬，将重悬混合物反应后，固液分离，上清液通过单分子检测，得到HAT和/或HCT活性。2.根据权利要求1所述的组蛋白乙酰化修饰酶的HAT和/或HCT活性的检测方法，其特征在于：组蛋白乙酰化修饰酶为p300、CBP或MOF。3.根据权利要求1所述的组蛋白乙酰化修饰酶的HAT和/或HCT活性的检测方法，其特征在于：所述肽底物的多肽序列对应于组蛋白H3的1
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26残基；进一步的，所述肽底物的多肽序列为biotin
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ART KQT ARK STG GKA PRK QLA TKA AR。4.根据权利要求1所述的组蛋白乙酰化修饰酶的HAT和/或HCT活性的检测方法，其特征在于：所述缓冲液中包括50毫摩尔每升Tris
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HCl、1毫摩尔每升DTT、0.1毫摩尔每升EDTA和10％甘油，其pH值为8.5。5.根据权利要求1所述的组蛋白乙酰化修饰酶的HAT和/或HCT活性的检测方法，其特征在于：所述缓冲液中包括50毫摩尔每升T...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春阳，姜苏，任婧怡，李玥颖，邹笑然，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：