一种高表达细胞色素P450的重组酵母及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种高表达细胞色素P450的重组酵母及其应用。一种高表达细胞色素P450的重组酵母，将来源于拟南芥的AtGRP7、AtMSBP1和AtCOL4中的至少一个基因在酵母中过表达获得所述重组酵母。本发明专利技术构建的利用拟南芥cDNA过表达文库以提高细胞色素P450表达的酿酒酵母平台菌株构建方法，利用产甜菜黄素的生物传感器和拟南芥cDNA过表达文库，通过菌株颜色及荧光的变化，成功筛选来源于拟南芥的能提高CYP76AD1表达的靶标基因。同时，将这些靶标基因应用于其他P450，证明其通用性，说明该方法能有效建立一个平台酵母菌株，用于多种P450的功能表达。功能表达。功能表达。

【技术实现步骤摘要】
一种高表达细胞色素P450的重组酵母及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，特别是涉及一种高表达细胞色素P450的重组酵母及其应用。

技术介绍

[0002]细胞色素P450酶(P450)是广泛存在于动物、植物和微生物中的血红素
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硫醇盐蛋白超家族。由于氧化、环氧化、羟基化和去甲基化等多种生物催化活性，P450在代谢网络中发挥着重要作用，且参与了许多天然产物的生物合成，例如阿片类药物、青蒿酸和甘草次酸等。作为研究透彻的模式生物，酿酒酵母具有遗传背景清晰、易于培养和翻译后加工能力等优点。因此，酿酒酵母通常是P450功能表达和天然产物生物合成的首选宿主。
[0003]尽管多种P450已在酿酒酵母中成功表达，比如，公开号为CN106987533A的专利技术公开了一种能够合成甘草次酸的酿酒酵母工程菌的构建方法。将来源于光果甘的β香树脂醇合酶基因GgbAS、细胞色素P450氧化酶基因CYP88D6和CYP72A154及来源于拟南芥的细胞色素P450氧化还原酶基因CPR1和CPR2分别构建形成基因表达盒，然后共转化基因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高表达细胞色素P450的重组酵母，其特征在于，将来源于拟南芥的AtGRP7、AtMSBP1和AtCOL4中的至少一个基因在酵母中过表达获得所述重组酵母。2.如权利要求1所述的重组酵母，其特征在于，将来源于拟南芥的AtGRP7、AtMSBP1和AtCOL4三个基因在酵母中过表达获得所述重组酵母。3.如权利要求1所述的重组酵母，其特征在于，所述AtGRP7、AtMSBP1和AtCOL4的GenBank号分别为NM_127738.5、NM_124603.4和LR782546.1。4.如权利要求1所述的重组酵母，其特征在于，还包括细胞色素P450基因。5.如权利要求4所述的重组酵母，其特征在于，包括以下一种：(1)细胞色素P450基因为CYP76AD1、CYP76AD5或CYP76AD6，所述重组酵母还过表达DOD基因，CYP76AD1和DOD基因的GenBank号分别为KU644144.1和KM502867.1；CYP76AD5和CYP76AD6基因的GenBank号分别为KM592961.1和KM592962.1所示；(2)细胞色素P450基因为CYP736A167，所述重组酵母还过表达檀香烯合酶SAS基因、AtCPR2基因，及MVA途径相关基因表达框：tHMG1
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ERG8
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ERG13
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ERG20
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ERG12和EGR10
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MVD1
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IDI1
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tHMG1，其中，CYP736A167基因的GenBank号为KU169302.1，檀香烯合酶SAS基因序列如SEQ ID No.2所示，AtCPR2基因的GenBank号为KC842188.1，tHMG1
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ERG8
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ERG13
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ERG20
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ERG12基因中tHMG1、ERG8、ERG13、ERG20和ERG12的GenBank号分别为NM_0011824...

【专利技术属性】
技术研发人员：连佳长，江丽红，董昌，刘腾飞，
申请(专利权)人：浙江大学杭州国际科创中心，
类型：发明
国别省市：