一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用，属于生物医药技术领域；所述多肽包括第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽中的一种或几种；所述第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示。本发明专利技术的多肽能够显著促进ASFV致敏免疫细胞增殖，并且能够通过促进猪CD4

【技术实现步骤摘要】
一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用
[0001]本申请是申请日为2020年08月26日、申请号为CN202010873537.4、专利技术名称为《一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用》的分案申请。


[0002]本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用。

技术介绍

[0003]非洲猪瘟(African Swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swinefever virus，ASFV)感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)而引起的一种急性、出血性、烈性传染病。非洲猪瘟病毒主要感染巨噬细胞、单核细胞等免疫细胞，感染后ASFV通过不同机制逃逸宿主先天和固有的免疫防御系统，如Ⅰ型干扰素(IFN)应答、细胞凋亡、炎症反应及特异靶基因的活化。
[0004]疫苗是预防非洲猪瘟最有效的方法之一。传统的减毒活疫苗和灭活疫苗是目前最为常用的疫苗。但是ASFV的天然致弱毒株或基因缺失致弱毒株因存在生物安全隐患、免疫副反应、散毒危险及遗传背景不清等诸多缺陷限制了其在疫苗生产中的应用。ASFV编码多达167种蛋白，这对筛选能诱导机体免疫保护的候选抗原造成极大难度。然而，已报道数种蛋白可作为病毒中和的靶子，并对其进行了重组蛋白疫苗研究。P30和p54两种蛋白位于病毒外部，分别涉及病毒吸附和内化作用。用p30和p54蛋白免疫家猪可诱导产生中和抗体，但不能抵御致死性攻毒，病程亦未改变，而用p30和p54联合疫苗免疫既可产生中和抗体，也可改善病程。Inovoa等评估了模拟病毒蛋白的46种肽以确定其建立保护免疫应答的能力。接种某些联合肽可延迟家猪死亡。但是目前为止，尚未见报道完全有效的ASFV亚单位疫苗。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用，本专利技术的多肽能够用于制备ASFV亚单位疫苗，制备得到的亚单位疫苗能够有效增强机体ASFV特异性免疫应答，预防非洲猪瘟病毒感染。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽；所述多肽包括第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽中的一种或几种；
[0008]所述第一多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
[0009]所述第二多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0010]所述第三多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
[0011]所述第四多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；
[0012]所述第五多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；
[0013]所述多肽通过促进猪机体中的CD4
+
T和CD8
+
T淋巴细胞分泌IFN
‑
γ来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答；和/或，
[0014]所述多肽通过促进非洲猪瘟病毒抗原特异性淋巴细胞和中性粒细胞增殖来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答。
[0015]优选的，所述非洲猪瘟病毒抗原特异性淋巴细胞包括CD4
+
T淋巴细胞、 CD8
+
T淋巴细胞和B淋巴细胞。
[0016]本专利技术提供了一类由上述方案所述多肽聚合得到的多肽聚合物。
[0017]本专利技术提供了上述方案所述多肽或者所述多肽聚合物在制备促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的制剂中的应用。
[0018]本专利技术提供了一种非洲猪瘟病毒的亚单位疫苗，所述亚单位疫苗的活性成分包括上述方案所述多肽或者所述多肽聚合物。
[0019]优选的，所述亚单位疫苗的剂型包括注射剂。
[0020]优选的，所述亚单位疫苗中多肽或多肽聚合物的含量为100μg/组分/头份。
[0021]本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽；所述多肽包括第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽中的一种或几种；所述第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示。本专利技术的多肽能够显著促进ASFV致敏免疫细胞增殖，并且能够通过促进猪 CD4
+
T及CD8
+
T细胞分泌IFN
‑
γ促进猪机体产生ASFV抗原特异性免疫应答。免疫动物后，能够显著促进猪机体免疫应答。本专利技术所述多肽或者由所述多肽聚合得到的多肽聚合物能够用于制备非洲猪瘟病毒的亚单位疫苗。本专利技术的多肽没有毒副作用以及生物安全隐患，作为ASFV疫苗组分具有产业化优势。
附图说明
[0022]图1为AP1的鉴定色谱图；
[0023]图2为AP2的鉴定色谱图；
[0024]图3为AP3的鉴定色谱图；
[0025]图4为AP4的鉴定色谱图；
[0026]图5为AP5的鉴定色谱图；
[0027]图6为AP1～AP5促ASFV致敏淋巴细胞及单核巨噬细胞增殖的流式图；
[0028]图7为图6的数据统计图；
[0029]图8为AP1～AP5促健康猪淋巴细胞及单核巨噬细胞增殖的流式数据统计图；
[0030]图9为AP1促进不同亚型免疫细胞分泌IFN
‑
γ的水平；
[0031]图10为AP2促进不同亚型免疫细胞分泌IFN
‑
γ的水平；
[0032]图11为AP3促进不同亚型免疫细胞分泌IFN
‑
γ的水平；
[0033]图12为AP4促进不同亚型免疫细胞分泌IFN
‑
γ的水平；
[0034]图13为AP5促进不同亚型免疫细胞分泌IFN
‑
γ的水平；
[0035]图14为二免14d，B淋巴细胞亚群比例水平；
[0036]图15为CD4
+
T淋巴细胞亚群比例水平；
[0037]图16为CD8
+
T淋巴细胞亚群比例水平。
具体实施方式
[0038]本专利技术提供了一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽；所述多肽包括第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽中的一种或几种；所述多肽通过促进猪机体中的CD4
+
T和CD8
+
T淋巴细胞分泌IFN
‑
γ来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答；和/或，所述多肽通过促进非洲猪瘟病毒抗原特异性淋巴细胞和中性粒细胞增殖来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答。
[0039]在本专利技术中，所述非洲猪瘟病毒抗原特异性淋巴细胞包括CD4
+
T淋巴细胞、CD8
+<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽，所述多肽为第三多肽或第四多肽；所述第三多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述第四多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述多肽通过促进猪机体中的CD4
+
T和CD8
+
T淋巴细胞分泌IFN
‑
γ促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答，和/或，所述多肽通过促进非洲猪瘟病毒抗原特异性淋巴细胞和单核巨噬细胞增殖来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答。2.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑海学，毛箬青，孙德惠，周晓丽，朱昱茜，张克山，杨帆，刘华南，刘湘涛，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：