一种氧化自由基吸收能力检测方法技术

本发明专利技术公开了一种氧化自由基吸收能力检测方法，基于FLIPR

【技术实现步骤摘要】
一种氧化自由基吸收能力检测方法


[0001]本专利技术属于抗氧化方法
，具体涉及一种氧化自由基吸收能力检测方法。

技术介绍

[0002]氧化自由基吸收能力(ORAC)又称为抗氧化能力。ORAC分析方法是根据自由基破坏荧光探针，使荧光强度产生变化原理，以维生素E水溶性类似物Trolox为定量标准，使用荧光微孔板分析仪进行分析。荧光强度的变化大小反映自由基破坏的程度。在抗氧化剂存在时，它可以抑制由自由基引起的荧光变化，抑制程度反映了它对自由基的抗氧化能力。
[0003]目前ORAC检测主要是通过酶标仪检测荧光衰变来检测，但此方法存在一定的局限性，如需要手动加样，导致操作时的反应时间误差，读数为单孔检测，导致初始孔与结尾孔的检测时间不统一，冗杂的数据处理等问题。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术期望提供一种氧化自由基吸收能力检测方法，与现有通过酶标仪检测荧光方法相比，可以实现整板加样，整板检测，避免操作过程的误差，整数据提取简易，大大减少数据处理的时间，并且检测结果可靠、操作分析简便。<br/>[0005]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氧化自由基吸收能力检测方法，其特征在于，利用FLIPR-TETRA实时荧光检测技术，具体包括以下步骤：a)将抗氧化剂溶解于PH 7.4的磷酸盐缓冲液中稀释成0.1μM~50μM浓度，加入96孔黑色透光底板中，并置于所述FLIPR-TETRA检测系统中Read plate处，然后在第一个96孔V型底药板中加入溶解于磷酸盐缓冲液的10nM ~100nM浓度的荧光素钠，在第二个96孔V型底药板中加入溶解于磷酸盐缓冲液的100mM 浓度的AAPH，最后将所述第一个96孔V型底药板中液体转移至所述96孔黑色透光底板中，5min后再将所述第二个96孔V型底药板中液体转移至所述96孔黑色透光底板中，每1s~60s检测一次荧光信号，检测60~500次，作为对照组样品；b)将待测剂溶解于PH 7.4的磷酸盐缓冲液中稀释成0.5μM~10μM浓度，加入96孔黑色透光底板中，并置于所述FLIPR-TETRA检测系统中Read plate处，然后在第一个96孔V型底药板中加入溶解于磷酸盐缓冲液的10nM ~100nM浓度的荧光素钠，在第二个96孔V型底药板中加入溶解于磷酸盐缓冲液的100mM 浓度的AAPH，最后将所述第一个96孔V型底药板中液体转移至所述96孔黑色透光底板中，5min后再将所述第二个96孔V型底药板中液体转移至所述96孔黑色透光底板中，检测一次荧光信号的时间间隔和检测次数与所述步骤a)中的检测一次荧光信号的时间间隔和检测次数一致，作为检测组样品；c)将PH 7.4的磷酸盐缓冲液加入96孔黑色透光底板中，并置于所述FLIPR-TETRA检测系统中Read plate处，然后在第一个96孔V型底药板中加入溶解于磷酸盐缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，于广璞，徐伟，王超然，郭志谋，郭秀洁，伍言娟，
申请(专利权)人：泰州医药城国科化物生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：