一种基于高通量测序技术检测目的微生物基因组RNA的方法技术

本发明专利技术属于高通量测序和微生物检测技术领域，具体涉及一种基于高通量测序技术检测目的微生物基因组RNA的方法。本发明专利技术方法包括对包含目的微生物的待测样本进行核酸提取、DNA消化、RNA纯化、RNA片段化、反转录合成cDNA分子、cDNA文库构建、高通量测序和测序数据分析，检测出样本中目的微生物基因组RNA的状况。在DNA消化步骤中，采用DNA酶在37℃至42℃下孵育10至30分钟的温和条件下进行消化，并且进一步地，在RNA片段化步骤中采用热打断手段。本发明专利技术方法由于采用了温和的消化手段和热打断手段，可以高效、快速、低成本地富集微生物基因组RNA，提高微生物基因组RNA的含量，提高RNA高通量测序文库构建的成功率，从而提高微生物基因组RNA的检测灵敏度。组RNA的检测灵敏度。组RNA的检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种基于高通量测序技术检测目的微生物基因组RNA的方法


[0001]本专利技术属于高通量测序和微生物检测
，具体涉及一种基于高通量测序技术检测目的微生物基因组RNA的方法。

技术介绍

[0002]高通量测序技术在微生物检测领域的广泛应用使得微生物检测变得越来越方便、快捷。该技术对于传统检测方法无法准确鉴定的微生物(包括新发现的微生物物种)也能精准鉴别，但目前对于微生物基因组RNA的检测仍然存在较大困难。一方面，环境中存在着大量高活性的RNase，会随时随地降解RNA，而且一些微生物基因组RNA是单链核糖核酸，本身易降解，稳定性较差，从而导致微生物基因组RNA含量普遍偏低，不利于精准检测。另一方面，不同类型的检测样本中都会含有不同程度的背景/宿主DNA水平，使得检测结果中大部分数据占比为背景序列，从而导致微生物基因组RNA的检测灵敏度偏低。因此，在检测微生物基因组RNA时通常需要对微生物基因组RNA进行富集，以提高其RNA含量，通常采用的富集方法包括宿主rRNA去除、目的RNA靶向富集等。
[0003]宿主rRNA去除方法通过探针(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于高通量测序技术检测目的微生物基因组RNA的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：提供包含目的微生物的待测样本；对所述待测样本进行核酸提取，得到核酸样本；用DNA酶对所述核酸样本进行DNA消化，得到包含RNA分子的核酸消化液；对所述核酸消化液进行纯化，得到分离的RNA分子；对所述分离的RNA分子进行片段化，得到片段化的RNA分子；将所述片段化的RNA分子进行反转录，得到cDNA分子；用所述cDNA分子进行文库构建，得到cDNA文库；对所述cDNA文库进行高通量测序，得到高通量测序数据；对所述高通量测序数据进行数据分析，检测出所述目的微生物基因组RNA；其中用DNA酶对所述核酸样本进行DNA消化是通过将所述核酸样本与所述DNA酶在37℃至42℃下孵育10至30分钟来进行。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对所述核酸样本进行DNA消化是通过在37℃下孵育10分钟来进行。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，对所述核酸消化液进行纯化是通过磁珠来...

【专利技术属性】
技术研发人员：马珍子，林永权，吴红龙，
申请(专利权)人：南京华大医学检验所有限公司深圳华大基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：