IL-17抗体中半胱氨酸残基的选择性还原制造技术

本发明专利技术涉及选择性还原由哺乳动物细胞重组产生的IL

【技术实现步骤摘要】
IL
‑
17抗体中半胱氨酸残基的选择性还原
[0001]相关申请
[0002]本申请是2015年12月21日提交的申请号为201580066406.2、专利技术名称为“IL
‑
17抗体中半胱氨酸残基的选择性还原”的中国专利技术专利申请的分案申请。
[0003]本申请要求2014年12月22日提交的美国临时专利申请第62/095361号的优先权，其通过引用全文纳入。


[0004]本专利技术涉及在通过哺乳动物细胞以重组体方式生产的IL
‑
17抗体及其抗原结合片段的制品(例如苏金单抗制品)中选择性还原CysL97的方法。
技术背景
[0005]经典抗体由分子量各约为25kD的两个轻链(L)和分子量各约50kD的两个重链(H)组成。轻链和重链通过二硫键(L
‑
S
‑
S
‑
H)连接，两个LH单元还在重链之间通过两个二硫键连接。经典抗体的通式为L
‑
SS
‑
H(
‑
SS...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种苏金单抗抗体纯化制品在制备用于治疗免疫介导的炎症的药物中的用途，其中，所述苏金单抗抗体纯化制品通过选择性还原由哺乳动物细胞重组产生的苏金单抗抗体制品中的CysL97的方法得到，所述方法包括：a)使该制品与至少一种还原剂在体系中接触以形成还原混合物，其中，所述至少一种还原剂是含硫醇的还原剂，通过硫醇
‑
二硫化物交换测得，其在pH 7.0时的标准氧化还原电势E0为
‑
0.20V至
‑
0.23V，并且该还原混合物中的还原剂:抗体摩尔比为46:1至118:1之间；和b)孵育该还原混合物同时保持该体系中的体积氧传质系数(k
L
a
*
)≤0.37h
‑1，所述k
L
a
*
通过将饱和曲线匹配至溶解氧曲线而算得；其中，在步骤a)之前，使用在25℃校准的氧探针测得，该制品中的初始氧饱和百分比为至少60％，在孵育步骤之前进行加热，且加热时间≤90分钟；在孵育步骤之后冷却混合物，且冷却时间≤90分钟；按照步骤b)将该还原混合物在20℃至42℃之间的温度下孵育210至420分钟，并且在与还原剂接触之前的抗体制品pH为7.4至8.5。2.一种苏金单抗抗体纯化制品在制备用于治疗免疫介导的炎症的药物中的用途，其中，所述苏金单抗抗体纯化制品通过选择性还原由哺乳动物细胞重组产生的苏金单抗抗体制品中的CysL97的方法得到，所述方法包括：a)使该制品与半胱氨酸在体系中接触以形成还原混合物，所述还原混合物中半胱氨酸:抗体摩尔比为46:1至118:1之间；和b)孵育该还原混合物同时保持该体系中的体积氧传质系数(k
L
a
*
)≤0.37h
‑1，所述k
L
a
*
通过将饱和曲线匹配至溶解氧曲线而算得，其中，在步骤a)之前，使用在25℃校准的氧探针测得，该制品中的初始氧饱和百分比为至少60％，在孵育步骤之前进行加热，且加热时间≤90分钟；在孵育步骤之后冷却混合物，且冷却时间≤90分钟；按照步骤b)将该还原混合物在20℃至42℃之间的温度下孵育210至420分钟，并且在与还原剂接触之前的抗体制品pH为7.4至8.5。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，在步骤b)期间该体系中的k
L
a
*
为：a.≤0.37h
‑1，并且其中该还原混合物中的半胱氨酸:抗体摩尔比为56:1至118:1之间，并且其中按照步骤b)将该还原混合物孵育多至240分钟；b.≤0.37h
‑1，并且其中该还原混合物中的半胱氨酸:抗体摩尔比为77:1至118:1之间，并且其中按照步骤b)将该还原混合物孵育多至300分钟；c.＜0.37h
‑1，并且其中该还原混合物中的半胱氨酸:抗体摩尔比为46:1至118:1之间；d.＜0.37h
‑1，并且其中该还原混合物中的半胱氨酸:抗体摩尔比为54:1至82:1之间；或e.≤0.27h
‑1。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述还原混合物中的半胱氨酸:抗体摩尔比为66:1。5.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述还原混合物中的半胱氨酸浓度为4.0mM
至8.0mM。6.如权利要求1～5中任一项所述的用途，其特征在于，在步骤a)和步骤b)之间，将该还原混合物加热至32℃至42℃之间的温度用时45至90分钟，其中在加热期间该体系中的k
L
a
*
≤0.69h
‑1，所述k
L
a
*
通过将饱和曲线匹配至溶解氧曲线而算得。7.如权利要求1～5中任一项所述的用途，其特征在于，不将该还原试剂的氧化形式加入还原混合物中。8.如权利要求1～5中任一项所述的用途，其特征在于，不将变性剂加入还原混合物中。9.一种苏金单抗抗体纯化制品在制备用于治疗免疫介导的炎症的药物中的用途，其中，所述苏金单抗抗体纯化制品通过选择性还原由哺乳动物细胞重组产生的苏金单抗抗体制品中的CysL97的方法得到，所述方法包括：a)使该制品在体系中与浓度为4.0mM至8.0mM的半胱氨酸接触以形成还原混合物；b)将该还原混合物加热至32℃至42℃之间的温度用时45至90分钟，其中在加热期间该体系中的体积氧传质系数k
L
a
*
＜0.69h
‑1；c)在32℃至42℃之间的温度下孵育该还原混合物同时将该体系中的k
L
a
*
维持为：i.≤0.37h
‑1，并且其中该还原混合物中的半胱氨酸:抗体摩尔比为56:1至118:1之间，并且该还原混合物孵育多至240分钟；ii.≤0.37h
‑1，并且其中该还原混合物中的半胱氨酸:抗体摩尔比为77:1至118:1之间，并且该还原混合物孵育多至300分钟；iii.＜0.37h
‑1，并且其中该还原混合物中的半胱氨酸:抗体摩尔比为46:1至118:1之间；iv.＜0.37h
‑1，并且其中该还原混合物中的半胱氨酸:抗体摩尔比为54:1至82:1之间；或v.≤0.27h
‑1；在孵育步骤之后冷却混合物，且冷却时间≤90分钟；所述k
L
a
*
通过将饱和曲线匹配至溶解氧曲线而算得；并且，在步骤a)之前，使用在25℃校准的氧探针测得，该制品中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：