一种用于膨胀生物组织共价键荧光染色的染色液及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于膨胀生物组织共价键荧光染色的染色液及其应用，特点是该染色液为将罗丹明B和EDC溶于pH为7.4的磷酸盐缓冲液，罗丹明B的浓度为7mM，EDC浓度为1M，其染色方法具体步骤如下：将固定后的膨胀生物组织置于水凝胶单体溶液中4℃浸泡1天，然后将水凝胶和组织置于50℃聚合成胶4小时，将成胶后的组织置于蛋白质变性溶液中70℃浸泡24小时，随即置于90℃浸泡24小时后清洗的步骤；室温下将样品浸泡于染色液中振荡48小时，随后将样品置于蛋白质变性溶液中70℃清洗24小时，之后将样品清洗的步骤；最后进行细胞核染色和三维成像，优点是能极大地降低染色成本。优点是能极大地降低染色成本。优点是能极大地降低染色成本。

【技术实现步骤摘要】
一种用于膨胀生物组织共价键荧光染色的染色液及其应用


[0001]本专利技术涉及一种染色液，尤其是涉及一种用于膨胀生物组织共价键荧光染色的染色液及其应用。

技术介绍

[0002]对生物组织开展三维成像，由于其相较传统二维成像具有更高信息量，正逐渐成为研究组织病理学的新型手段。膨胀显微技术是从2015年起发展的超分辨显微技术，此方法通过将生物样品中的蛋白质锚定在可膨胀的水凝胶中，将样品物理胀大(每个维度膨胀4倍左右)后从而实现成像分辨率的提高。膨胀显微技术具有不受限于复杂光学仪器的独特优势。同时，在膨胀过程中通过蛋白质变性和磷脂去除达到组织透明化的目的。
[0003]2020年，Edward Boyden实验组[Yu CJ,et al.(2020)Expansion microscopy of C.elegans.eLife 9]、Joshua Vaughan实验组[Mao C,et al.(2020)Feature
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rich covalent stains for super
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resolution 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于膨胀生物组织共价键荧光染色的染色液，其特征在于：所述的染色液为将罗丹明B和1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中。2.根据权利要求1所述的一种用于膨胀生物组织共价键荧光染色的染色液，其特征在于：所述的罗丹明B的浓度为7mM，所述的1
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乙基
‑3‑
(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的浓度为1M。3.一种利用权利要求1
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2中任一项所述的用于膨胀生物组织共价键荧光染色的染色液进行染色的方法，其特征在于具体步骤如下：(1)组织取材：将大小为3
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5mm3的膨胀生物组织块置于质量浓度为4％的多聚甲醛和20％丙烯酰胺中固定1天；(2)组织样品的膨胀透明化处理：将固定后的组织置于水凝胶单体溶液中4℃浸泡1天，然后将水凝胶和组织置于50℃聚合成胶4小时，将成胶后的组织置于蛋白质变性溶液中70℃浸泡24小时，随即置于90℃浸泡24小时后，将样品放入PBS缓冲液和0.1％Triton X
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100中清洗4小时；(3)共价键荧光染色：室温下将样品浸泡于染色液中振荡48小时，随后...

【专利技术属性】
技术研发人员：严智洋，李航远，李泉，鲁晶晶，徐惠中，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：