卵泡液中KS作为EM诊断及妊娠结局评估标志物的应用制造技术

本发明专利技术公开了卵泡液中KS作为EM诊断及ART妊娠结局评估标志物的应用。本发明专利技术通过对比分析EM患者和无EM患者的卵泡液中KS浓度，发现KS在EM中患者卵泡液中明显低于对照组无EM患者，且EM患者的ART实验室结局更加不好。进一步在EM患者中对是否怀孕进行FF中KS的检测分析，发现进行ART的EM患者这组中，妊娠成功组比妊娠失败组FF中KS表达明显更高。最后将FF中KS与ART妊娠结局进行ROC分析，发现卵泡液中的KS可以作为一种预测子宫内膜异位症女性进行辅助生殖助孕时的妊娠结局的新指标，最优预测点、敏感性、特异性和AUC值较理想。上述结果证实Kallistatin可作为EM的特异性检测标志物，用于预测子宫内膜异位症女性进行辅助生殖助孕时的妊娠结局，具有很好的灵敏度和特异性。具有很好的灵敏度和特异性。具有很好的灵敏度和特异性。

【技术实现步骤摘要】
卵泡液中KS作为EM诊断及妊娠结局评估标志物的应用


[0001]本专利技术属于辅助生殖
，具体涉及卵泡液中人组织激肽释放酶结合蛋白（Kallistatin，KS）作为子宫内膜异位症（Endometriosis，EM）诊断及妊娠结局评估标志物的应用。

技术介绍

[0002]目前，全球不孕症发病率越来越高，越来越多的不孕患者借助辅助生殖技术ART（试管婴儿）获得自己的子代。特别是有子宫内膜异位症（Endometriosis，EM）的女性，不孕发生率更高。虽然ART技术已非常成熟，然而，目前没有一个无创的指标可以在胚胎植入之前预测EM患者的妊娠结局。
[0003]卵泡液（FF）提供了一个卵母细胞的生长和成熟的环境，并在排卵，随后受精，早期胚胎发育中起关键作用。人组织激肽释放酶结合蛋白（Kallistatin，KS）是一种调节差异信号传导的内源性蛋白，有抑制炎症，血管生成，氧化应激，细胞凋亡，肿瘤生长，和动物模型和培养细胞的转移等多种生物学功能。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的不足之处，本专利技术提供一种诊断EM和/或评估EM患者妊娠结局的相关产品，以及提供Kallistatin蛋白作为EM诊断及妊娠结局评估标志物的应用。
[0005]在本专利技术的第一个方面，提供了Kallistatin蛋白作为检测标志物在制备用于诊断EM和/或用于评估EM患者妊娠结局产品中的应用。
[0006]进一步的，所述产品能够通过检测卵泡液中Kallistatin蛋白表达水平来诊断患者是否患有EM和/或评估EM症患者妊娠结局。
[0007]在本专利技术的第二个方面，提供了检测Kallistatin蛋白表达水平的试剂在制备用于诊断EM和/或评估EM患者妊娠结局产品中的应用。
[0008]进一步的，所述产品能够通过检测卵泡液中Kallistatin蛋白表达水平来诊断患者是否患有EM和/或评估EM症患者妊娠结局。
[0009]在本专利技术的第三个方面，提供了一种用于诊断EM和/或评估EM患者妊娠结局的产品，该产品的特点是：所述产品能够通过检测卵泡液中Kallistatin蛋白表达水平来诊断EM和/或评估EM患者妊娠结局。
[0010]有益效果：本专利技术通过分析子宫内膜异位症不孕妇女的卵泡液中KS的浓度，发现KS在EM中患者卵泡液中明显低于对照组无EM患者，提示Kallistatin可能作为EM的检测标志物；且EM患者的ART实验室结局更加不好，提示卵泡液中的KS可能在预测子宫内膜异位症女性进行辅助生殖助孕时的妊娠结局中有一定应用价值。进一步在EM患者中对是否怀孕进行FF中KS的检测分析，发现进行ART的EM患者这组中，妊娠成功组比妊娠失败组的FF中KS表达明显更高。最后将FF中KS与ART妊娠结局进行ROC分析，发现卵泡液中的KS可以作为一种预测子宫内膜异位症女性进行辅助生殖助孕时的妊娠结局的新指标，最优预测点、敏感性、
特异性和AUC值较理想，与进行辅助生殖的对照组相比，EM高危组的卵泡液中Kallistatin蛋白的表达明显下调，提示Kallistatin可能作为EM的检测标志物；此外与正常妊娠妇女相比，最终发生了EM患者的卵泡液中Kallistatin蛋白显著降低。上述结果证实Kallistatin可作为EM的特异性检测标志物，用于预测子宫内膜异位症女性进行辅助生殖助孕时的妊娠结局筛选和制备EM检测试剂，具有很好的灵敏度和特异性。
附图说明
[0011]图1为Kallistatin蛋白在妊娠成功组与妊娠失败组卵泡液中表达验证，其中，Pregnancy代表妊娠成功组；Non
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pregnancy代表妊娠失败组；(A)对照组患者中妊娠成功组与妊娠失败组卵泡液中KS浓度，(B)EM患者中妊娠成功组与妊娠失败组卵泡液中KS浓度，(C)所有患者中妊娠成功组与妊娠失败组卵泡液中KS浓度(p < 0.05)。
[0012]图2为Kallistatin蛋白诊断EM的受试者工作特征曲线图(ROC曲线)。
具体实施方式
[0013]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0014]实施例1 Kallistatin蛋白在进行辅助生殖的EM患者与无EM患者卵泡液中的表达在患者知情同意下，选取2017年7月至2018年8月在广州医科大学附属第三医院生殖中心进行体外授精/卵胞浆内单精子注射
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胚胎移植(IVF/ICSI
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ET)助孕的不孕症女性患者，收集患者取卵当天的卵泡液进行实验。所有患者入选标准：（1）年龄小于33岁；（2）术前至少6个月均未接受的激素治疗；（3）排除患有多囊卵巢综合征、糖尿病、高血压、血脂异常、艾滋病毒感染或任何活动性感染和自身免疫性疾病的女性。其中，选择EM患者40例作为实验组，进行辅助生殖的无EM患者40例作为对照组。分别收集两组患者取卵后的卵泡液，利用ELISA法检测卵泡液中Kallistatin的表达水平，进行组间比较，并制作ROC曲线。
[0015]1. 卵泡液的收集与提取取卵母细胞时保存FF，避免血液污染。收集每个患者的所卵泡的FF样本并进行KS浓度测量。汇集FF以1500g离心10分钟消除红细胞和细胞碎片。取上清液并于
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20℃下保存，待检测。
[0016]2. ELISA法检测卵泡液中Kallistatin的表达采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定EM患者及无EM患者卵泡液中KS水平，试剂盒购自R&D公司（货号：DY1669）。使用96孔板，严格按照说明书要求的步骤进行操作。以酶联免疫检测仪（芬兰雷勃）在波长450nm处读取标准品和标本各孔OD值，对照标准曲线得到各标本KS的浓度。
[0017]3. 预测模型
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ROC曲线制作绘制受试者工作特征曲线ROC，受试者工作特征曲线就是以假阳性概率为横轴，真阳性为纵轴所组成的坐标图，和受试者在特定刺激条件下由于采用不同的判断标准得出的不同结果画出的曲线。用SPSS软件制作ROC曲线。
[0018]4. 检测结果
4.1 Kallistatin蛋白在EM患者卵泡液中的表达表1 EM患者与对照组的性激素和KS浓度的对比由表1可知，EM患者的LH、FSH、P、T、E2、AMH的浓度与对照组无明显差异。然而，实验组EM患者卵泡液中KS浓度为281.67
±
104.60 pg/ml，明显低于对照组(490.70
±
216.33 pg/ml) (p < 0.05) 。即相对于未EM患者，EM患者卵泡液中Kallistatin蛋白表达水平明显下调。
[0019]4.2 EM患者与对照组的ART结局特征表2 EM患者与对照组的ART结局特征的对比由表1可知，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Kallistatin蛋白作为检测标志物在制备用于诊断EM和/或用于评估EM患者妊娠结局产品中的应用。2.检测Kallistatin蛋白表达水平的试剂在制备用于诊断EM和/或评估EM患者妊娠结局产品中的应用。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征是：所述产品能够通过检...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛玉玲，李磊，乔景达，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第三医院广州重症孕产妇救治中心，广州柔济医院，
类型：发明
国别省市：