【技术实现步骤摘要】
一种用于调节牛乳腺上皮细胞的氯化锂的应用方法
[0001]本专利技术涉及一种氯化锂的应用，尤其涉及一种用于调节牛乳腺上皮细胞的氯化锂的应用方法。
技术介绍
[0002]随着人们生活水平的不断提高以及健康观念的日渐重视，国民对乳品质要求越来越高，需求量也越来越大，富含营养成分的高品质牛奶以及奶制品衍生物受到了人们的青睐。在我国过去的十几年中，通过饲料营养调控改善牛奶成分和提高奶牛产奶性能的研究越来越受到重视，尤其是改善牛奶的蛋白质和脂肪酸组成成为研究的亮点。
[0003]共轭亚油酸（conjugated linoleic acid，以下简称CLA）是亚油酸的同分异构体，在反刍动物中发现的一个对人体有益的功能性不饱和脂肪酸。它具有抗癌、抗动脉硬化症、抗糖尿病、提高免疫力、改善骨组织代谢、抑制脂肪沉积等多种生物学功能。在自然界CLA主要以cis
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9，trans
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11 CLA的形式存在于反刍动物的乳制品和肉制品中。通过研究发现反刍动物中CLA的合成主要在瘤胃和乳腺组织中进行。处于泌乳期...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于调节牛乳腺上皮细胞的氯化锂的应用方法，其特征在于，主要包括以下步骤：步骤一：氯化锂对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白和乳脂合成影响的应用：将奶牛乳腺上皮细胞接种在含生长培养基的培养皿中，于37℃细胞培养箱中培养；将奶牛乳腺上皮细胞进行分化诱导四天，同时加入不同浓度氯化锂，四天后提取收集RNA及蛋白；通过qPCR、Western Blot方法检测氯化锂对奶牛乳腺上皮细胞β
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酪蛋白、信号通路PI3K/AKT1/mTOR、JAK2/STAT5以及乳脂合成相关酶的调控作用；通过qPCR、Western Blot方法初步探讨氯化锂对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的调控机理；步骤二：所述氯化锂对奶牛乳腺上皮细胞共轭亚油酸(CLA)合成影响的应用：将奶牛乳腺上皮细胞接种在含生长培养基的培养皿中，于37℃细胞培养箱中培养；将奶牛乳腺上皮细胞分化诱导四天后处理筛选出最佳浓度的氯化锂并添加50μM TVA处理4h后，提取收集RNA及蛋白；通过qPCR、Western Blot方法检测氯化锂对奶牛乳腺上皮细胞CLA合成关键标记基因的作用，利用气相色谱法检测细胞中CLA的含量，确定氯化锂对乳腺上皮细胞CLA合成的影响；通过qPCR、Western Blot方法初步探讨氯化锂对奶牛乳腺上皮细胞CLA合成调控的机理。2.根据权利要求1所述的用于调节牛乳腺上皮细胞的氯化锂的应用方法，其特征在于，所述生长培养基为添加了10%FBS、5μg/ml 胰岛素、1μg/ml 氢化可的松以及1% 青霉素
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链霉素的DMEM培养基。3.根据权利要求1所述的用于调节牛乳腺上皮细胞的氯化锂的应用方法，其特征在于，分化诱导使用的分化培养基为添加了10%FBS、5μg/ml 胰岛素、1μg/ml 氢化可的松、5μg/ml 催乳素以及1% 青霉素
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链霉素的DMEM培养基。4.根据权利要求3所述的用于调节牛乳腺上皮细胞的氯化锂的应用方法，其特征在于，所述分化培养基放置于六孔板中，且所述分化培养基的用量为2ml。5.根据权利要求1所述的用于调节牛乳腺上皮细胞的氯化锂的应用方法，其特征在于，步骤一中的氯化锂的浓度有5 mM 、10 mM和20mM三种规格。6.根据权利要求2所述的用于调节牛乳腺上皮细胞的氯化锂的应用方法，其特征在于，步骤一中检测氯化锂对奶牛乳腺上皮细胞β
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酪蛋白及乳脂合成相关基因和蛋白的调控作用包括以下步骤：i. 生长期乳腺上皮细胞接种至六孔板，每孔采用生长培养液静置培养直至细胞长至70%
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80%；ii. 取六孔板，进行如下分组处理，处理组：吸弃培养液，用PBS清洗后加入含氯化锂的分化培养液，氯化锂的浓度为5 mM 、10 mM和20mM三种规格，置于37℃细胞培养箱中培养4天，并每天更换培养液，对照组：吸弃培养液，用PBS清洗后加入分化培养液，置于37℃细胞培养箱中培养4天，并每天更换培养液；iii. 将各组培养4天后收集奶牛乳腺上皮细胞，提取RNA和蛋白，利用qPCR检测与乳蛋白乳脂合成相关基因的表达，Western blot检测β
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酪蛋白及乳蛋白乳脂合成相关蛋白的表达。7.根据权利要求2所述的用于调节牛乳腺上皮细胞的氯化锂的应用方法，其特征在于，
步骤一中奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路JAK2/STAT5、PI3K/AKT1/...
【专利技术属性】
技术研发人员：金永成，宗金鑫，沈景林，史旭东，刘馨璐，刘浃怡，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：
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