大鼠睾丸间质Leydig细胞的分离方法技术

本发明专利技术公开了一种大鼠睾丸间质Leydig细胞分离的方法，包括如下步骤：获取大鼠睾丸并制备大鼠睾丸细胞悬浊液；标记大鼠睾丸细胞；磁珠分选(MACS)方法筛选其中的阳性细胞；通过磁珠分选方法重复提纯阳性细胞。本发明专利技术的分离方法操作简单简单、细胞产量高、纯度高、活性高，并且不需要昂贵的设备。并且不需要昂贵的设备。并且不需要昂贵的设备。

【技术实现步骤摘要】
大鼠睾丸间质Leydig细胞的分离方法


[0001]本专利技术涉及生物医药，具体为大鼠睾丸间质Leydig细胞的分离方法。

技术介绍

[0002]睾丸间质细胞(Leydig cells，LCs)的主要功能是产生睾酮(T)，这是一种男性激素，对生殖功能和男性特征的发育和维持至关重要。LCs的数量或功能缺陷都可能导致复杂的症状，包括身体成分的变化、疲劳加剧、性功能障碍、情绪抑郁、认知功能下降和免疫反应降低。由于LCs在雄性的繁殖和总体福祉中发挥着关键作用，多年来，人们在体内和体外环境中对其进行了深入研究，包括毒理学领域的研究。LCs的体外研究需要在尽可能好的条件下分离和培养细胞，将其他睾丸细胞的干扰降到最小，以便在最优的生理条件下检测细胞功能。多年来，从啮齿动物睾丸中分离LCs的各种方法得到了发展。然而，由于组织细胞的复杂性，获得大量高纯度、高活力的LCs仍然具有挑战性。
[0003]最早在50年前，科研人员就开始尝试分离LCs，当时大多数研究使用单步法，即通过Percoll离心法从其他睾丸细胞中分离出LCs。为了改进这种方法分离细胞纯度低本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大鼠睾丸间质Leydig细胞分离的方法，其特征在于，包括如下步骤：获取大鼠睾丸并制备大鼠睾丸细胞悬浊液；标记大鼠睾丸间质细胞；磁珠分选(MACS)方法筛选其中的阳性细胞；通过磁珠分选方法重复提纯阳性细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，针对大鼠睾丸间质细胞的标记采用催乳素受体(PRLR)抗体标记。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，大鼠睾丸细胞悬浊液的制备过程如下：将睾丸实质置于培养基中消化；将消化后的组织悬液室温静置，过滤上清液。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，通过过滤后的大鼠睾丸细胞用DMEM/F12培养基洗涤；并将大鼠睾丸细胞重悬浮于冰冷的BDIMag
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(BI)缓冲液中；和/或，通过磁珠分选方法重复提纯阳性细胞时，每次均将阳性细胞部分用900μL BI缓冲液重悬浮后进行磁珠分选。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，当每次重复提纯阳性细胞均将阳性细胞部分用900μL BI缓冲液重悬浮后进行磁珠分选，每次重悬时孵育至少4分钟。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈浩林，赵星仪，季敏鹏，温馨，陈丹，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院温州医科大学附属育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：