一种免疫逃逸CD47过表达外泌体的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种免疫逃逸CD47过表达外泌体的制备方法，包括(1)构建CD47过表达质粒，并包装到慢病毒中形成CD47过表达慢病毒；(2)将此慢病毒转染大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSC)构建稳定的CD47过表达细胞株(CD47

【技术实现步骤摘要】
一种免疫逃逸CD47过表达外泌体的构建方法


[0001]本专利技术涉及药物载体制备领域，尤其涉及一种具有免疫逃逸能力的CD47过表达外泌体的构建方法。

技术介绍

[0002]外泌体(exosome，ES)是天然的纳米级药物载体，近年来是医学及生命科学领域的研究热点之一。外泌体具有相对稳定、体积小和储存时间长等优点，其内携带的RNA和蛋白质等活性物质在参与细胞间信号传导和细胞自我保护等过程中发挥重要作用。如Alvarez
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Erviti 等人通过电穿孔等方式将药物与外泌体结合形成工程化外泌体来治疗疾病，其他文献也表明外泌体可作为药物载体应用在组织损伤修复及慢性疾病治疗中。但现有的工程化外泌体容易被吞噬细胞吞噬，不具备免疫逃逸能力，在作为药物载体应用时其效果将受到限制。
[0003]免疫逃逸是指细菌、病毒等外来物或肿瘤细胞逃脱免疫系统的识别与攻击，目前所发现的相关机制一般包括抗原性的变化、持续性感染及免疫抑制。而CD47是一种广泛存在于多种细胞的跨膜糖蛋白，具有免疫球蛋白可变的N端结构域、5个跨膜结构域和1个短的C端胞内尾本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫逃逸CD47过表达外泌体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)构建CD47过表达质粒，并包装到慢病毒中形成CD47过表达慢病毒；(2)将步骤(1)的CD47过表达慢病毒转染大鼠ADMSC构建稳定的CD47过表达细胞株；(3)分离并纯化第五代CD47
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ADMSC细胞株来源的CD47
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ES外泌体。2.根据权利要求1所述的一种免疫逃逸CD47过表达外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，大鼠ADMSC浓度为1
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105个细胞/孔，培养20h，然后加入筛选培养基和CD47过表达慢病毒，培养1天后更换为ADMSC完全培养基继续培养。3.根据权利要求1所述的一种免疫逃逸CD47过表达外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，筛选培养基为加入2mL浓度为6μg/mL嘌呤霉素的ADMSC完全培养基，ADMSC完全培养基为450mL DMEM+50mL FBS+5mL P/S。4.根据权利要求1所述的一种免疫逃逸CD47过表达外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，感染时CD47过表达慢病毒与ADMSC的数量比值为50：1。5.根据权利要求1所述的一种免疫逃逸CD47过表达外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，取第5代CD47
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ADMSC，培...

【专利技术属性】
技术研发人员：易西南，任瑞，贲新宇，冯仁军，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：