一种胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用，本发明专利技术以B.subtilis 168为出发菌株，使用CRISPR/Cpf1技术在基因组上整合了木糖诱导型启动子P

【技术实现步骤摘要】
一种胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及一种胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用，属于遗传工程学


技术介绍

[0002]重组蛋白是指采用重组DNA技术，对编码目的蛋白的基因进行优化修饰，利用一定载体将目的基因导入适当的宿主细胞，表达目的蛋白，经过提取和纯化等技术制备获得的具有生物学活性的蛋白制品。重组蛋白被广泛应用于食品和医药领域，产生了巨大的经济价值与社会效益。为了实现重组蛋白的高效表达，对表达系统进行改造优化是当前研究的热点与重点。而使用异源蛋白生产的微生物表达系统来生产重组蛋白消耗资源少、效率高、环保可持续、营养全面并且能对蛋白进行良好的修饰改造。
[0003]选择合适底盘工程菌株对蛋白产品的下游加工至关重要。枯草芽孢杆菌具有清晰的遗传背景和成熟的基因操作技术，便于对底盘菌株进行改造；而且由于其具有生长速率快、分泌能力强、无明显密码子偏好性及不易受噬菌体感染等优良特性，也是工业发酵中常用的生产菌株；此外，由于不会产生内毒素等有害产物，B.subtilis还被美国食品药品安全本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌以B.subtilis 168为出发菌，在基因组上整合表达转录因子comK
‑
comS基因，回复突变trpC基因和gudB基因，并敲除胞外蛋白酶丝氨酸蛋白酶基因aprE、中性蛋白酶基因nprE、杆菌肽酶基因bpr、金属蛋白酶基因mpr与中性蛋白酶基因nprB。2.根据权利要求1所述的胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌是将待编辑的基因的表达框或敲除框，及基因组同源片段连接至pcrF19NM2载体上，通过基于CRISPR/Cpf1的基因组无痕编辑系统进行基因编辑。3.根据权利要求1所述的胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的转录因子comK
‑
comS基因通过木糖诱导型启动子P
xylA
控制表达。4.根据权利要求1所述的胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的转录因子comK
‑
comS基因由核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的comK基因和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的comS基因组成。5.根据权利要求1所述的胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的转录因子comK
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comS基因的整合位点为胞外蛋白酶基因epr。6.根据权利要求1所述的胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌，其特征在于，回复突变trpC基因是将B.subtilis 168中色氨酸缺陷型的基因trpC2突变为核苷酸序列如SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘龙，陈坚，吕雪芹，堵国成，李江华，刘延峰，李洋，武耀康，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：