3D细胞培养胶体的套组及其用于3D细胞培养的方法技术

本发明专利技术是关于一种3D细胞培养胶体的套组及其用于3D细胞培养的方法，3D细胞培养胶体的套组包含A凝胶材料、C缓冲液与D缓冲液；进行3D细胞培养的方法包含，将细胞加入含有A凝胶材料的混合液中，于低温作用后获得含细胞的胶体，于胶体上加入C缓冲液以进行交联，移除C缓冲液并加入生长培养液，静置培养直到细胞于胶体内形成细胞球状体；又，本发明专利技术进一步以D缓冲液溶解胶体，以将培养后的细胞取出进行分析；因此，本发明专利技术的3D细胞培养胶体的套组，使用方便且适用于进行多种细胞株的3D细胞培养。便且适用于进行多种细胞株的3D细胞培养。便且适用于进行多种细胞株的3D细胞培养。

【技术实现步骤摘要】
3D细胞培养胶体的套组及其用于3D细胞培养的方法


[0001]本专利技术关于一种3D细胞培养胶体的套组及其用于3D细胞培养的方法，本专利技术的套组使用方便且适用于进行多种细胞株的3D细胞培养。

技术介绍

[0002]于体外培养细胞的技术已经相当成熟，因此目前生物研究中常使用细胞株作为研究的模式，且目前细胞株的培养方法大多为2D的细胞培养法，亦即将细胞株平面培养于培养盘的底部；然而，于生物体内，大多数的细胞生长环境为立体的环境，因此2D的细胞培养状态与细胞在生物体内生长的状态仍然具有相当大的差距；为了模拟细胞于生物体内生长的状况，目前已开发出将细胞培养于立体培养基中的3D细胞培养研究模式，例如中国专利第CN 105695413(B)号专利，为一种用于肿瘤个体化医疗的三维细胞培养材料及其制备方法，其使用基质胶、低黏度藻朊酸钠溶液、透明质酸钠溶液与中粘度藻朊酸钠溶液等材料作为细胞培养基的基质，进行三维细胞培养。但是，现有3D细胞培养所使用的立体培养基大多使用基质胶(Matrigel)作为材料，其配置方法繁复、成分复杂且不易控制其胶体形成的状况及浓度，且其成胶温度低，室温操作时容易凝固而操作失败，再者以基质胶配置的立体培养基的成本也相当高昂，因此目前进行3D细胞培养仍相当不容易。

技术实现思路

[0003]今，专利技术人有鉴于现有目前进行3D细胞培养的材料与方法于实际使用仍有不足之处，于是乃一本孜孜不倦的精神，并通过其丰富专业知识及多年的实务经验所辅佐，而加以改善，并据此研创出本专利技术。
[0004]本专利技术关于一种3D细胞培养胶体的套组及其用于3D细胞培养的方法，其中3D细胞培养胶体的套组包含A凝胶材料、C缓冲液与D缓冲液；A凝胶材料包含0.5～3wt％的海藻酸钠(Sodium Alginate)，2.5～15wt％的明胶(Gelatin)、0.5～2wt％的HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)缓冲液以及剩余百分比的纯水；C缓冲液包含0.2～10wt％的二价阳离子盐类，0.01～1wt％的该HEPES缓冲液以及剩余百分比的纯水；以及D缓冲液包含1～10wt％的乙二胺四乙酸二钠(Disodium ethylenediaminetetraacetate
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2H2O)，0.1～1wt％的氢氧化钠(NaOH)，0.05～1wt％的该HEPES缓冲液以及剩余百分比的纯水。
[0005]本专利技术以3D细胞培养胶体的套组进行3D细胞培养的方法，包含：(a)将细胞悬浮于生长培养液中，以获得细胞悬浮液，再将该细胞悬浮液与A凝胶材料以体积比1：1的比例混合，以获得混合溶液；(b)将培养盘放置于低温元件上，并于该培养盘的培养孔洞中加入该混合溶液，静置1～7分钟以形成胶体；(c)于该胶体上加入C缓冲液，并静置10-20分钟以进行交联；(d)将C缓冲液置换为细胞的生长培养液；以及(e)将培养盘放置于所需温度培养，直至该细胞于胶体内形成细胞球状体(spheroid)，其中培养盘每日更换一次生长培养液。
[0006]于本专利技术的一实施例中，C缓冲液的二价阳离子盐类为氯化锶、磷酸钙、氯化钙、与
硫酸钙其中至少之一。
[0007]于本专利技术的一实施例中，HEPES缓冲液为0.5～3M的HEPES缓冲液。
[0008]于本专利技术的一实施例中，本专利技术的3D细胞培养胶体的套组进一步包括导温片(thermal conductive sheet)。
[0009]于本专利技术的一实施例中，于步骤(e)之后再进行一步骤(f)，步骤(f)使用磷酸盐缓冲液(1
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PBS buffer)清洗该细胞球状体，移除磷酸盐缓冲液后，再加入D缓冲液与该细胞球状体混合均匀，并于室温作用5分钟以使胶体溶解，其中D缓冲液包含1～10wt％的乙二胺四乙酸二钠(Disodium ethylenediaminetetraacetate
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2H2O)，0.1～1wt％的氢氧化钠，0.05～1wt％的该HEPES缓冲液以及剩余百分比的纯水。
[0010]于本专利技术的一实施例中，进一步于步骤(f)之后进行步骤(g)，步骤(g)使用该磷酸盐缓冲液清洗该溶解后的胶体溶液，离心后移除上清液并收集细胞沉淀物并分析该细胞沉淀物中的细胞。
[0011]于本专利技术的一实施例中，步骤(b)所述的低温元件，为导温片，且将该导温片放置于低温装置上进行降温所获得。
[0012]于本专利技术的一实施例中，该培养细胞的所需温度介于30～37℃。
[0013]于本专利技术的一实施例中，混合溶液的细胞密度介于104～107cells/mL。
[0014]因此，本专利技术的3D细胞培养胶体的套组，使用上相当方便，且适用于进行多种的细胞株3D细胞培养；此外本专利技术亦包含可将细胞胶体溶解的D缓冲液，因此于培养后欲进行后续的细胞分析也十分便利。
附图说明
[0015]图1：本专利技术进行3D细胞培养的方法流程示意图。
[0016]图2：本专利技术将培养细胞的胶体溶解以分析细胞的方法流程示意图。
[0017]图3：以本专利技术培养细胞后的存活率测试图。
[0018]图4A：以基质胶进行3D细胞培养后的显微镜照片。
[0019]图4B：以本专利技术的套组进行3D细胞培养后的显微镜照片。
[0020]图5：以本专利技术培养细胞所形成的细胞球状体显微镜照片。
[0021]符号说明：1：A凝胶材料；2：混合溶液；3：导温片；4：低温裝置；5：培养盘；6：胶体；7：C缓冲液；8：生长培养液；9：磷酸盐缓冲液；10：D缓冲液；11：离心管；12：细胞沉淀物。
具体实施方式
[0022]为令本专利技术的技术手段其所能达成的效果，能够有更完整且清楚的揭露，现通过下述具体实施例，详细说明本专利技术可实际应用的范围，但不意欲以任何形式限制本专利技术的范围，请一并参阅揭露的图式。
[0023]本专利技术关于一种3D细胞培养胶体的套组及其用于3D细胞培养的方法，使用方便且可以适用于多种细胞株的3D细胞培养；此外，本专利技术亦包含将胶体溶解的缓冲液，故于进行后续细胞分析时也相当方便。
[0024]本专利技术的3D细胞培养胶体的套组主要包含A凝胶材料、C缓冲液与D缓冲液；进一步的，本专利技术的套组可进一步包含低温元件，例如导温片(thermal conductive sheet)，以于
进行3D细胞培养的过程中，协助胶体形成。
[0025]本专利技术3D细胞培养胶体的套组的A凝胶材料包含海藻酸钠(Sodium Alginate)，明胶、HEPES缓冲液以及剩余百分比的纯水；
[0026]另，C缓冲液包含0.2～10wt％的二价阳离子盐类，例如氯化锶(Strontium Chloride
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6H2O)、磷酸钙、氯化钙、或硫酸钙，0.01～1wt％的该HEPES缓冲液以及剩余百分比的纯水；于本专利技术的较佳实施例中，C缓冲液包含0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种3D细胞培养胶体的套组，包含：A凝胶材料，包含0.5～3wt％的海藻酸钠，2.5～15wt％的明胶、0.5～2wt％的HEPES缓冲液以及剩余百分比的纯水；C缓冲液，包含0.2～10wt％的二价阳离子盐类，0.01～1wt％的该HEPES缓冲液以及剩余百分比的纯水；以及D缓冲液，包含1～10wt％的乙二胺四乙酸二钠，0.1～1wt％的氢氧化钠，0.05～1wt％的该HEPES缓冲液以及剩余百分比的纯水。2.如权利要求1所述的3D细胞培养胶体的套组，其中该C缓冲液的二价阳离子盐类为氯化锶、磷酸钙、氯化钙、与硫酸钙其中至少之一。3.如权利要求1所述的3D细胞培养胶体的套组，其中该HEPES缓冲液为0.5～3M的HEPES缓冲液。4.如权利要求1所述的3D细胞培养胶体的套组，进一步包括导温片。5.一种使用如权利要求1所述的套组进行3D细胞培养的方法，包括以下步骤：(a)将细胞悬浮于生长培养液中，以获得细胞悬浮液，再将该细胞悬浮液与A凝胶材料以体积比1：1的比例混合，以获得混合溶液；(b)将培养盘放置于低温元件上，并于该培养盘的各孔洞中加入该混合溶液，静置1～7分钟以形成胶体；(c)于该胶体上加入C缓冲液，并静置10-20分钟以进行交联；(d)将该C缓冲液置换为该生长培养液；以及(e)将该培养盘放置于所需温度培养，直至该细胞于该胶体内形成...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴侑峻，刘静雯，林威宇，
申请(专利权)人：基可生医股份有限公司，
类型：发明
国别省市：