一种化学品胚胎毒性预测模型及其建立方法技术

一种化学品胚胎毒性预测模型包括细胞种类；该细胞种类包括核型为XX的SP3 ES细胞诱导分化出的心肌细胞。其建立方法包括步骤一、小鼠胚胎成纤维细胞的分离和培养；二、小鼠ES的体外扩增培养；三、小鼠ES的核型分析及性别鉴定；四、小鼠ES多能性的维持和鉴定；五、小鼠ES体外诱导分化为心肌细胞；六、小鼠ES诱导分化的心肌细胞的心肌特异性标志蛋白的免疫化学检测；七、小鼠ES诱导分化的心肌细胞的表达谱的Real

【技术实现步骤摘要】
一种化学品胚胎毒性预测模型及其建立方法
[0001]本申请是以下申请的分案申请：申请日：2015年8月7日；申请号：201510478375.3；专利技术名称“一种化学品胚胎毒性预测模型及其建立方法”。


[0002]本专利技术涉及一种化学品胚胎毒性预测模型及其建立方法，尤其涉及一种小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为具有搏动能力的心肌细胞，并在所获得的心肌细胞上建立化学品胚胎毒性的识别和预测模型，并应用于新化学品胚胎毒性的预测中。

技术介绍

[0003]目前，化学品的毒性数据多在实验动物中获得，如急性毒性试验，亚急性毒性试验，慢性毒性试验等。但是，开展动物实验存在几个不容忽视的问题：1.需要大量的财力，2.实验周期长，3.需要大量的实验动物，4.因体内影响因素较多，难以进行代谢和机制研究。出于动物保护原则，Russell和Burch提倡“3R”原则，即减少(Reduction)，优化(Refinement)和替代(Replacement)，无论是从科学角度还是从经济角度，毒理学替代法对外源性化学物的危害评价及管理都有非常重要的意义。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化学品胚胎毒性预测模型在区分化学品的胚胎毒性的性别差异中的应用，其特征在于，所述化学品胚胎毒性预测模型包括细胞种类和分子观测终点，所述细胞种类包括核型为XX的SP3 ES细胞诱导分化出的心肌细胞和核型为XY的R1 ES细胞诱导分化出的心肌细胞；所述分子观测终点包括Myl4，cTnT和Myh6。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化学品胚胎毒性预测模型的建立方法包括以下步骤：步骤一：小鼠胚胎成纤维细胞的分离和培养；步骤二：小鼠ES的体外扩增培养，所述ES包括SP3 ES细胞和R1 ES细胞；步骤三：小鼠ES的核型分析及性别鉴定；步骤四：小鼠ES多能性的维持和鉴定；步骤五：小鼠ES体外诱导分化为心肌细胞；步骤六：小鼠ES诱导分化的心肌细胞的心肌特异性标志蛋白的免疫化学检测，所述心肌特异性标志蛋白包括cTnT；步骤七：小鼠ES诱导分化的心肌细胞的表达谱的Real
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time PCR检测，所述表达谱包括Myh6、Myl4和cTnT基因；步骤八：模式化合物的选择：选择4种及以上模式化合物使得该模式化合物集合包含强致畸性化合物、弱智畸性化合物、无致畸性化合物以及在雌雄性别中致畸性有所不同的化合物；步骤九：模式化合物细胞毒性的检测：获得各模式化合物对细胞的半数致死剂量IC
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；步骤十：模式化合物对ES分化能力的抑制效应的检测：获得各模式化合物对ES细胞分化的半数抑制剂量ID
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的值；步骤十一：模式化合物胚胎毒性的评价：通过步骤九得到的IC
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和步骤十得到的ID
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分析各模式化合物对胚胎毒性的影响程度，建立得到所述化学品胚胎毒性预测模型，从而推广到对其他化学品胚胎毒性的预测。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述化学品胚胎毒性预测模型的建立方法还包括步骤十二：分子观测终点和传统观测终点用于反映模式化合物对ES分化能力的抑制作用下的相关性分析，即采用SPSS19.0软件的配对散点图功能对分子观测终点和传统观测终点用于测量半数分化抑制能力间的相关性进行分析，同时计算决定系数；当分子观测终点和传统观测终点间决定系数大于0.9时，分子观测终点和传统观测终点高度相关性；以此判断所述化学品胚胎毒性预测模型的准确性和有效性。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述步骤八中的所述模式化合物包括5
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氟尿嘧啶、阿司匹林、吲哚美辛、抗坏血酸、青霉素...

【专利技术属性】
技术研发人员：王艳，程薇，胡庆亮，张星，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院，
类型：发明
国别省市：