一种检测T细胞对灭活疫苗敏感性的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测T细胞对灭活疫苗敏感性的方法，所述方法是检测待测样本细胞中T细胞的Tn值和Tcm值，然后计算Tn和Tcm的比值Tn/Tcm，若Tn/Tcm＞2.4且比值越大，该样本T细胞对灭活疫苗敏感性越大。胞对灭活疫苗敏感性越大。

【技术实现步骤摘要】
一种检测T细胞对灭活疫苗敏感性的方法


[0001]本专利技术属于医学检验
，具体涉及一种检测T细胞对灭活疫苗敏感性的方法。

技术介绍

[0002]在疫苗研发过程中，常使用小动物替代法预估个体对疫苗的敏感性。即给动物注射疫苗后，检测动物血清抗体水平。同时，利用免疫动物的血清，进行体外病毒中和法，检测抗体的中和病毒的作用。此外，还需要做动物攻毒实验，检测疫苗对动物的保护作用，及是否出现ADE效应(抗体依赖增强症)。在疫苗进入临床试验后，利用化学发光法，ELISA法(竞争法)检测接种者血清抗体，包括血清总抗，IgM，IgG及血清中和抗体。通过检测抗体效价，抗体产生时间，持续时间，可以反映机体对新冠灭活疫苗敏感性。
[0003]上述方法的不足之处在于：
①
受伦理约束，用于动物的检测方法尤其是攻毒法不适用于人体。
②
大样本临床试验虽然可以在统计学规模上反映机体对疫苗的敏感性，但是存在时间滞后性(即接种后才能知道敏感性，不能在接种前预判)，样本例数受限，实验人群受限等限制。
③
疫苗正式使用后，通过大量接种数据的分析可得出接种人群对疫苗的敏感性。但也存在时间滞后性，需在完成整个接种程序后，通过多次采集不同时间段血清，才能得出回顾性的结果，无法在接种前预判个体差异。
④
目前绝大多数医院或第三方检测机构只检测新冠病毒特异性血清总抗，IgM和IgG，但这些抗体水平并不能完全等同于新冠病毒中和抗体水平，有的接种者IgG水平很高，但是中和抗体确是阴性；亦有接种者其血清中新冠病毒IgG阴性，但是其新冠病毒中和抗体却为阳性。另外，现有技术中检测机体对其他病毒灭活疫苗敏感性的主要方法也是检测血清抗体，其方法和不足之处同前。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在克服现有技术的不足，提供一种检测T细胞对灭活疫苗敏感性的方法。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术提供的技术方案为：
[0006]所述检测T细胞对灭活疫苗敏感性的方法是检测待测样本细胞中T细胞的Tn值和Tcm值，然后计算Tn和Tcm的比值Tn/Tcm，若Tn/Tcm＞2.4且比值越大，该样本T细胞对灭活疫苗敏感性越大，即，越敏感。其中，Tn：初始T细胞；Tcm：中央记忆性T细胞；Tn值：初始T细胞数量；Tcm值：中央记忆性T细胞数量。
[0007]优选地，所述方法是所述方法是用PE
‑
CD45RA/APC
‑
CD197抗体检测T细胞表面特征性标记分子CD45RA
+
/CD197
+
，得出Tn值；同时用PE
‑
CD45RA/APC
‑
CD197抗体检测T细胞表面特征性标记分子CD45RA
‑
/CD197
+
，得出Tcm值；再计算Tn和Tcm的比值Tn/Tcm，若Tn/Tcm＞2.4且比值越大，该样本T细胞对灭活疫苗敏感性越大，越能产生高水平的中和抗体。
[0008]更优选地，所述方法中在检测T细胞表面特征性标记分子前，先用FITC
‑
CD4抗体筛选样本细胞中的CD4
+
T细胞。
[0009]更优选地，所述方法中是用PE
‑
CD45RA/APC
‑
CD197抗体检测CD4
+
T细胞表面特征性
标记分子CD45RA
+
/CD197
+
，得出Tn值。所述方法中是用PE
‑
CD45RA/APC
‑
CD197抗体检测CD4
+
T细胞表面特征性标记分子CD45RA
‑
/CD197
+
，得出Tcm值。
[0010]优选地，所述灭活疫苗是新冠灭活疫苗。
[0011]更优选地，所述新冠灭活疫苗是BBIBP
‑
CorV。
[0012]下面对本专利技术作进一步说明：
[0013]灭活病毒疫苗属于外源性抗原，以激活CD4+T细胞，诱导体液免疫产生抗体为主要免疫反应；而对CD8+T细胞的作用非常少，无法激活产生有效、足量的CTL细胞。本专利技术中，初始T细胞(Tn)是指离开胸腺但还没有接受抗原刺激的成熟T细胞，其表面特征性标记分子为CD45RA
+
/CD197
+
，Tn包含CD4
+
Tn和CD8
+
Tn。Tn在接受抗原刺激后，一部分Tn分化为中央记忆性T细胞(Tcm)，其特征性表面标记分子为CD45RA
‑
/CD197
+
。Tcm也包含CD4
+
Tcm和CD8
+
Tcm，在外周血中，Tcm主要是CD4
+
Tcm。
[0014]本专利技术方法具体运用如下：
[0015]目前，灭活新冠病毒疫苗(BBIBP
‑
CorV)的常规免疫方式是两次接种，期间间隔时间不超过50天，但是人群抗体产生水平差异较大。按现有方式免疫，部分人产生抗体水平较低或不产生抗体，难以达到预期免疫效果，不利于新冠疫情防控。本专利技术方法通过测量接种个体细胞中T细胞的Tn/Tcm比值，可以提前预估机体产生中和抗体的能力，利于提醒相关人员应定期检测抗体水平，开展个性化接种。对于Tn/Tcm比值很低的接种人群，接种后抗体产生少或者没有中和抗体产生，应在接种后及时检测抗体水平，必要时加强免疫。本专利技术方法能快速灵敏地预估受试者接种注射灭活新冠病毒疫苗(BBIBP
‑
CorV)后保护性中和抗体的产生水平，为制定个性化接种方案提供依据。
[0016]相较于血清抗体检测，本方法运用后仅需要一次性抽血检测，通过计算Tn/Tcm比值，即可在疫苗接种前预估个体对灭活新冠灭活疫苗反应程度。可提前筛选对该疫苗反应不佳的潜在人群，制定个性化的免疫方案(包括但不限于增加免疫次数)，确保有效免疫，远离病毒伤害。
附图说明
[0017]图1为注射BBIBP
‑
CorV两剂后，56例受试者Tn/Tcm值和其血清新冠病毒中和抗体水平的关系。P<0.05表示有显著意义；
[0018]图2为56例受试者Tn/Tcm比值与其新冠病毒中和抗体水平相关性分析。
具体实施方式
[0019]实施例1
[0020]本专利技术所述检测T细胞对灭活疫苗敏感性的方法包括如下几个方面：
[0021](一)人体外周血单个核细胞准备
[0022]1.抽取接种者外周血5ml，分离外周血单个核细胞(具体步骤是本领域常规技术)
[0023]2.加入5ml含1％BSA的PBS洗涤步骤1获得的细胞，1000rpm离心，弃上清。该洗涤步骤重复2次。
[0024]3.细胞计数(具体方法是本领域常规技术)...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测T细胞对灭活疫苗敏感性的方法，其特征在于，所述方法是检测待测样本细胞中T细胞的Tn值和Tcm值，然后计算Tn和Tcm的比值Tn/Tcm，若Tn/Tcm＞2.4且比值越大，该样本T细胞对灭活疫苗敏感性越大。2.如权利要求1所述的检测T细胞对灭活疫苗敏感性的方法，其特征在于，所述方法是用PE
‑
CD45RA/ APC
‑
CD197抗体检测T细胞表面特征性标记分子CD45RA
+
/ CD197
+ ，得出Tn值；同时用PE
‑
CD45RA/ APC
‑
CD197抗体检测T细胞表面特征性标记分子CD45RA
‑
/ CD197
+ ，得出Tcm值；再计算Tn和Tcm的比值Tn/Tcm，若Tn/Tcm＞2.4且比值越大，该样本T细胞对灭活疫苗敏感性越大。3.如权利要求2所述的检测T细胞对灭活疫苗敏感性的方法，其特征在于，所述方法中在检测T细胞表面特征性标记分子前，先用FITC
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：李冬青，喻晶，贵海燕，任婵君，
申请(专利权)人：武汉金域医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：