一种粪便样本DNA基因突变试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种粪便样本DNA基因突变试剂盒，涉及试剂盒技术领域。该一种粪便样本DNA基因突变试剂盒，包括KRAS突变检测与β

【技术实现步骤摘要】
一种粪便样本DNA基因突变试剂盒


[0001]本专利技术涉及试剂盒
，具体为一种粪便样本DNA基因突变试剂盒。

技术介绍

[0002]试剂盒是用于盛放检测化学成分、药物残留、病毒种类等化学试剂的盒子。在结直肠癌进行甲基化和基因突变检测时，常用到粪便样本DNA基因突变试剂盒，粪便基因检测具有采样方便、可以最大程度降低病人在检查过程中出现不适的概率。
[0003]目前粪便样本DNA基因突变试剂盒在于实际使用时，由于缺乏良好的引物探针设计，实际检测方式单一，整体实际检测效果不佳，此外缺乏良好的实验步骤、实验方式与实验条件，无法良好的掌控反应过程，进而得到准确可靠的实验结果，实际特异性及准确性低。
[0004]为此，我们研发出了新的一种粪便样本DNA基因突变试剂盒。

技术实现思路

[0005](一)解决的技术问题
[0006]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种粪便样本DNA基因突变试剂盒，解决了上述问题。
[0007](二)技术方案
[0008]为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：包括以下具体步骤：
[0009]S1.KRAS突变检测与β
‑
actin内参，首先需要进行核酸提取工作，采用核酸提取试剂盒，对保存液中粪便进行核酸提取，Nanodrop检测A26/A280，并采用以Fe3O4磁性微球为载体的核酸提取方法，其展现了其独特的方便快捷性，磁性微球在核酸纯化过程中不需要离心，避免了交叉污染，并且提取结果的重复性好、操作简单；
[0010]S2.通过肽核酸钳(PNA)法检测，KRAS基因的98％突变发生在第2外显子的12及13号密码子上，有G12C、G12S、G12R、G12V、G12D、G12A和G13D；
[0011]S3.采用PNA技术进行检测，并需要用到KRAS引物，且针对不同突变类型需选取不同探针，具有不同的荧光信号，且Blocker PNA序列为 AGCTGGTGGCGTAG，内参基因β
‑
actin如下：
[0012]Forward primer为TCACCCACACTGTGCCCATCTACGA
[0013]Reverse primer为CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG
[0014]Probe为ATGCCCTCCCCCATGCCATCCTGCGT(5端FAM,3端TRAMA)；
[0015]S4.不同的引物和探针之间具有不同的荧光PCR反应条件，
[0016]试剂名称用量2 x ChamQ Geno
‑
SNP Probe Master Mix10ulPrimer F(10uM)0.2
‑
0.6ulPrimer R(10uM)0.2
‑
0.7ul
TaqMan Probe(10uM)0.1
‑
0.3ulTemplate DNA/cDNA2ng
‑
10ngBLOCKER PNA0.4uldd H2OUp to 20ul；
[0017]S5.
[0018]。
[0019][0020]优选的，所述采用PNA技术进行检测，KRAS引物如下：
[0021]。
[0022]优选的，所述不同突变类型探针如下：
[0023]。
[0024]优选的，所述荧光信号：
[0025][0026]。
[0027](三)有益效果
[0028]本专利技术提供了一种粪便样本DNA基因突变试剂盒。具备以下有益效果：
[0029]1、该一种粪便样本DNA基因突变试剂盒，通过采用良好的引物探针设计，采用PNA技术进行检测，并设置有不同突变类型探针，实际检测方式多样，整体实际检测效果良好。
[0030]2、该一种粪便样本DNA基因突变试剂盒，通过科学的实验步骤、实验方式与实验条件，可以良好的掌控反应过程，进而得到准确可靠的实验结果，实际特异性及准确性高。
附图说明
[0031]图1为本专利技术一种粪便样本DNA基因突变试剂盒实验检测图；
[0032]图2为本专利技术一种粪便样本DNA基因突变试剂盒实验结果图；
具体实施方式
[0033]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0034]实施例：
[0035]本专利技术实施例提供一种粪便样本DNA基因突变试剂盒，包括以下具体步骤：
[0036]S1.KRAS突变检测与β
‑
actin内参，首先需要进行核酸提取工作，采用核酸提取试剂盒，对保存液中粪便进行核酸提取，Nanodrop检测A26/A280，并采用以Fe3O4磁性微球为载体的核酸提取方法，其展现了其独特的方便快捷性，磁性微球在核酸纯化过程中不需要离心，避免了交叉污染，并且提取结果的重复性好、操作简单；
[0037]S2.通过肽核酸钳(PNA)法检测，KRAS基因的98％突变发生在第2外显子的12及13号密码子上，有G12C、G12S、G12R、G12V、G12D、G12A和G13D；
[0038]S3.采用PNA技术进行检测，并需要用到KRAS引物，且针对不同突变类型需选取不同探针，具有不同的荧光信号，且Blocker PNA序列为 AGCTGGTGGCGTAG，内参基因β
‑
actin如下：
[0039]Forward primer为TCACCCACACTGTGCCCATCTACGA
[0040]Reverse primer为CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG
[0041]Probe为ATGCCCTCCCCCATGCCATCCTGCGT(5端FAM,3端TRAMA)；
[0042]S4.不同的引物和探针之间具有不同的荧光PCR反应条件，
[0043]试剂名称用量2x ChamQ Geno
‑
SNP Probe Master Mix10ulPrimer F(10uM)0.2
‑
0.6ulPrimer R(10uM)0.2
‑
0.7ulTaqMan Probe(10uM)0.1
‑
0.3ulTemplate DNA/cDNA2ng
‑
10ngBLOCKER PNA0.4uldd H2OUp to 20ul；
[0044]S5.
[0045][0046]。
[0047]实施例二：
[0048]本实施例与实施例一的不同之处在于：采用PNA技术进行检测，KRAS引物如下：
[0049]。
[0050]优选的，不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粪便样本DNA基因突变试剂盒，其特征在于：包括以下具体步骤：S1.KRAS突变检测与β
‑
actin内参，首先需要进行核酸提取工作，采用核酸提取试剂盒，对保存液中粪便进行核酸提取，Nanodrop检测A26/A280，并采用以Fe3O4磁性微球为载体的核酸提取方法，其展现了其独特的方便快捷性，磁性微球在核酸纯化过程中不需要离心，避免了交叉污染，并且提取结果的重复性好、操作简单；S2.通过肽核酸钳(PNA)法检测，KRAS基因的98％突变发生在第2外显子的12及13号密码子上，有G12C、G12S、G12R、G12V、G12D、G12A和G13D；S3.采用PNA技术进行检测，并需要用到KRAS引物，且针对不同突变类型需选取不同探针，具有不同的荧光信号，且BlockerPNA序列为AGCTGGTGGCGTAG，内参基因β
‑
actin如下：Forwardprimer为TCACCCACACTGTGCCCATCTACGAReverseprimer为CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGGProbe为ATGCCCTCCCCCATGCCATCCTGCGT(5端F...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琬祺，谭生伟，何木兰，
申请(专利权)人：苏州丽纳芯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：