本发明专利技术要解决的技术问题是提供一种能够通过低成本且简单的方法来进行质谱分析的使用色谱质谱分析装置的质谱分析方法。本发明专利技术解决技术问题的技术手段为：一种使用色谱质谱分析装置的对象物的质谱分析方法，其中所述色谱质谱分析装置依次包含色谱仪、离子化部、第1质量分离部、碰撞室、第2质量分离部和离子检测部，在色谱仪的流动相中添加离子对试剂和H
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用色谱质谱分析装置的质谱分析方法
[0001]本专利技术涉及一种使用色谱质谱分析装置的质谱分析方法(mass spectrometry method using chromatography
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mass spectrometer devace)。尤其，本专利技术涉及一种能够适当地测定蛋白质、肽和核酸的质谱分析方法。
技术介绍
[0002]在国际公开2016
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125271号公报中记载了一种色谱质谱分析装置。该装置存在复杂而且不适合蛋白质、肽和核酸的质谱分析的问题。[现有技术文件][专利文献][0003]专利文献1：国际公开2016
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125271号公报
技术实现思路
[专利技术所要解决的技术问题][0004]本说明书中记载的一个专利技术的目的在于，提供一种使用色谱质谱分析装置的质谱分析方法，其能够通过低成本且简单的方法进行质谱分析。尤其，在一个专利技术中，其目的在于，提供一种使用色谱质谱分析装置的质谱分析方法，其能够实现蛋白质、肽和核酸的定量分析。[用于解决技术问题的技术方案][0005]本说明书中记载的一个专利技术依据的见解是，通过在色谱仪(chromatograph)的流动相中添加离子对试剂(ion pair agent)和H
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nig碱(H
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nig
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s base)进一步对碰撞室(collision cell)施加较高的碰撞能量，从而能够利用低成本且简单的方法来进行质谱分析。
[0006]本说明书中记载的一个专利技术涉及一种使用色谱质谱分析装置的对象物的质谱分析方法。在该方法中使用的色谱质谱分析装置1例如依次包含色谱仪3、离子化部5、第1质量分离部7、碰撞室9、第2质量分离部11和离子检测部13。优选第1质量分离部和第2质量分离部分别包含第1四极质谱分析仪和第2四极质谱分析仪。而且，该方法包括在色谱仪的流动相中添加离子对试剂和H
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nig碱的工序。并且，该方法包括将碰撞室的施加电压的绝对值设为20V以上且250V以下(优选为，60V以上且120V以下)的工序。碰撞室的施加电压可以调整为使通过碰撞室的质荷比(m/z)的值为94.9的离子强度达到最大值或者达到最大值的90％以上的电压。离子对试剂的例子为六氟
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丙醇(Hexafluoro
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propanol)(HFIPA)。色谱仪优选使用具有带排气阀(vent valve)的盖的色谱仪。对象物的例子为蛋白质、肽或核酸。[专利技术效果][0007]本说明书记载的一个专利技术通过在色谱仪的流动相中添加离子对试剂和H
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nig碱，进一步对碰撞室施加较高的碰撞能量，从而能够利用低成本且简单的方法来进行质谱分析。附图简易说明
[0008]图1是表示色谱质谱分析装置的结构例的框图。图2是表示实施例中使用的装置的概要的图。图3是表示实施例中使用的装置的概要的图。图4是代替附图表示产物离子的研究结果的图表。图5是代替附图表示H
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nig碱的效果的研究结果的图表。图6是代替附图表示SRM色谱图的图表。图7表示实施例中的预处理方法的方案。图8表示使用了PCI试剂的预处理方法的方案。图9表示使用了试剂盒(CLARUTY OTX)的预处理方法的方案。图10是根据安全瓶盖的有无对HPLC色谱柱的压力(背压)与S化寡聚核苷酸的灵敏度进行比较的代替附图的图表。
具体实施方式
[0009]下面，使用附图来说明用于实施本专利技术的方式。本专利技术并不限定于以下说明的方式，还包含在对于本领域技术人员而言显而易见的范围内，根据以下的方式进行适当修改后的方式。
[0010]本说明书记载的一个专利技术涉及一种使用色谱质谱分析装置的对象物的质谱分析方法。色谱质谱分析装置为具有色谱仪和与色谱仪连接的质谱分析部的质谱分析装置，质谱分析部具有隔着碰撞室而位于前后侧的质量分离部。质谱分析部具有离子化部、前级质量分离部、碰撞室和后级质量分离部，其中，所述离子化部使从色谱仪洗脱的液体离子化而获得前体离子；所述前级质量分离部用于分选前体离子；所述碰撞室使前体离子裂解成产物离子；所述后级质量分离部用于分选产物离子(对象物)。在对象物的质谱分析方法中，进行对象试样的质谱分析，确认是否存在具有已知质量(或者质荷比)的对象物或是求得对象物的相对存在比，或者进行对象物的定量分析。
[0011]图1是表示色谱质谱分析装置的结构例的框图。如图1所示，色谱质谱分析装置1依次包含色谱仪3、离子化部5、第1质量分离部7、碰撞室9、第2质量分离部11和离子检测部13。
[0012]色谱仪色谱仪3为具有通常流动相的液相色谱仪。色谱仪3也可以使用高效液相色谱仪(HPLC)装置。色谱仪为公知的装置，只要适当采用公知的装置即可。液相色谱仪例如具有流动相容器、泵、注射器和色谱柱，其中，所述流动相容器储存有流动相；所述泵抽吸流动相且以规定的流量进行泵送；所述注射器向流动相中注入规定量的对象试样；所述色谱柱沿时间方向分离试样液中含有的各种化合物。
[0013]作为流动相，在不会对色谱柱、装置造成不良影响的范围内可以使用各种溶剂。溶剂的例子为水或盐类的水溶液、醇类、乙腈、二氯甲烷和三氟乙酸。
[0014]在本说明书中的一个专利技术中，向色谱仪的流动相添加离子对试剂和H
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nig碱。离子
对试剂添加于流动相的添加量例如为0.001mol/L以上且1mol/L以下，可以为0.005mol/L以上且0.5mol/L以下，也可以为0.01mol/L以上且0.1mol/L以下，也可以为0.001mol/L以上且0.1mol/L以下，还可以为0.1mol/L以上且1mol/L。被添加于流动相时的离子对试剂的浓度可以为0.01重量％以上且25重量％以下。H
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nig碱添加于流动相的添加量例如为0.01mol/L以上且0.25mol/L以下，可以为0.005mol/L以上且0.1.5mol/L以下，也可以为0.01mol/L以上且0.1mol/L以下，也可以为0.001mol/L以上且0.1mol/L以下，还可以为0.1mol/L以上且0.25mol/L以下。被添加于流动相时的H
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nig碱的浓度可以为0.1重量％以上且25重量％以下。
[0015]离子对试剂只要具有溶解性即可。离子对试剂的例子为六氟
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丙醇(HFIPA)、三氟乙酸、五氟丙酸、七氟正丁酸、七氟异丁酸、九氟戊酸、九氟异戊酸、十一氟己酸、十三氟庚酸和全氟低级脂肪酸(十五氟辛酸)。离子化剂的浓度的例子为1mmol/L以上且100mmol/L以下，可以为5mmol/L以上且20mmol/L以下。
[0016]H
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nig碱是指N,N
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二异丙基乙胺(DIPEA)。
[0017]在向流动相中添加离子对试剂(例如，六氟
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丙醇：HFIPA)的情况下本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种使用色谱质谱分析装置的对象物的质谱分析方法，其中所述色谱质谱分析装置依次包含色谱仪、离子化部、第1质量分离部、碰撞室、第2质量分离部和离子检测部，其特征在于，在所述色谱仪的流动相中添加离子对试剂和H
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nig碱，将所述碰撞室的施加电压的绝对值设为20V以上且250V以下。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离子对试剂为六氟
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丙醇。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱仪具有带排气阀...
【专利技术属性】
技术研发人员：千田直人，坟崎靖子，
申请(专利权)人：株式会社新日本科学，
类型：发明
国别省市：
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