本发明专利技术公开了一种采用SERS湿法鉴定癌症病变的方法。首先利用不同分子量大小的超滤膜离心管分离血浆样品；然后利用SERS基底和分离后的血浆样品混合后直接滴加在多孔基材上，并且添加液体石蜡防止挥发，用高通量拉曼光谱仪进行快速的SERS检测。通过对比分离后血浆拉曼光谱的谱峰和信噪比得到最佳分子量大小的超滤膜。本发明专利技术提供的一种维持血浆生理状态的SERS湿测的新方法及其用于鉴定癌症病变的方法，不仅有效地减少了其他大分子对一些血浆重要光谱信号的掩盖，湿测还提高了检测的均匀性，而且该方法可以更容易寻找出癌症患者血浆中重要标志物的特征光谱信号。中重要标志物的特征光谱信号。中重要标志物的特征光谱信号。
【技术实现步骤摘要】
一种采用SERS湿法鉴定癌症病变的方法
[0001]本专利技术属于生物医学和光谱检测
，具体涉及一种采用SERS湿法鉴定癌症病变的方法。
技术介绍
[0002]表面增强拉曼光谱(SERS)技术作为一种非侵入性微量物质检测技术，已广泛应用于生物医学研究，SERS技术具有以下优势：SERS技术已经发展成为一种超快速的检测技术，具有高灵敏度；SERS提供了独特的特征图谱，其中单个分析物的拉曼谱峰非常窄，从而能够同时进行多重检测；与荧光相比，SERS具有优异的抗光漂白性，在癌症诊断方面表现出了良好的临床应用前景。非标记SERS检测方法具有以下优势，它不局限于指定的靶标分子，可以直接反映生物样品的指纹信息。
[0003]目前，SERS检测血浆光谱信号的报道很多，但是血浆是个复杂成分，光谱信号复杂，很难捕捉到有价值的信息，在前期的研究中，我们发现这种直接用纳米金银作为SERS基底检测血浆光谱信号的方法存在一些潜在的问题，当纳米粒子进入血浆以后，表面上容易吸附上一层或多层的蛋白结构即为蛋白冠，这种蛋白冠也会影响SERS的检测结果，即对于癌症贡献大的光谱信号容易被血浆中的大分子所掩盖。为了减少重要光谱信号的掩盖，我们需要将血浆中的大蛋白去除，来提高其他小分子与拉曼增强基底的吸附，从而提高光谱的信噪比。另一方面，之前检测血浆拉曼光谱的方法通常是用纳米银和血浆混合后，在室温下干燥后再检测，但是干燥后血浆就不能保持原有的生理状态，影响检测结果。另一方面，当血浆与增强基底混合后变干会有“咖啡环”效应，即由于液体的自由蒸发会使得分子富集在外面一圈会导致测的拉曼信号不均匀。同时，对于未来临床大量血浆样品检测时，提高检测速度，减少时间和经济成本是很有必要的。
技术实现思路
[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供一种基于超滤膜分离血浆的SERS鉴定癌症病变的方法的方法，通过在润湿的环境下，即保证了血浆原有的形态，也不会出现“咖啡环”效应，导致检测的拉曼信号不均匀，出现误差。同时，该方法具有快速、高灵敏度、保持样本的生理状态和提高光谱信噪比并且避免蛋白冠对检测的影响等优点，该方法可以应用于血浆样品的检测。
[0005]本专利技术的技术方案如下：
[0006]一种采用SERS湿法鉴定癌症病变的方法，包括以下步骤：
[0007](1)取血浆用超滤膜离心管分离，得到血浆样品；
[0008](2)将步骤(1)的血浆样品与SERS基底混合后，直接滴加在多孔基材上，并且包覆上一层油膜防止挥发，用高通量拉曼光谱仪进行血浆样品的SERS光谱检测，得到光谱数据；
[0009](3)输入步骤(2)光谱数据，利用机器学习算法中的决策树与线性回归模型预测癌症病变。
[0010]进一步的，步骤(1)中超滤膜的分子量为100K
‑
3K。
[0011]进一步的，步骤(1)中离心速度为12000rpm，离心时间为20min。
[0012]进一步的，所述步骤(2)中SERS基底包括纳米金和纳米银中的至少一种。
[0013]进一步的，所述步骤(2)中SERS基底与血浆样品体积比为1:1。
[0014]进一步的，所述步骤(2)中的油膜为液体石蜡或者聚甘油。
[0015]进一步的，步骤(2)中所述的SERS检测使用的激光功率为10
‑
50mW，积分时间为1
‑
10s，激光激发波长为785nm，光谱的测量范围为400
‑
1800cm
‑1。
[0016]进一步的，步骤(3)中所述的预测模型是先通过病理结果已知是否癌症的血浆样本做为测试组，然后选择未知待测的样本作为验证组，验证我们的方法对于癌症判别的准确率和灵敏度。步骤(3)中的决策树模型具体的是接收一组癌症和正常人的拉曼光谱数据做为特征组，由处理器使用决策树模型处理这组特征数据，以生成癌症的预测模型。
[0017]本专利技术具有如下有益效果：
[0018](1)血浆中的蛋白质等大分子会吸附在纳米金银表面，导致其他一些小分子的光谱信号被掩盖，通过超滤膜的过滤分离去除大分子，提高小分子与增强基底的接触，使得检测结果更具准确性；
[0019](2)血浆与纳米银混合后会随着时间逐渐变干从而影响血浆中一些分子的生理状态的变化，在混合液滴表面加一层油膜可以防止挥发；
[0020](3)拉曼检测的时候湿测比干测具有更好的均匀性，避免咖啡环效应对检测结果的影响；
[0021](4)对于临床大样本的检测需要满足快速、方便和经济等要求，因此需要设计高通量的SERS检测基材搭配上高通量拉曼光谱仪提高检测速度。
[0022](5)通过SERS基材搭配高通量仪器并且利用油膜防止挥发来解决这个问题。重点在于本申请采用的这层油膜的添加可以在比较长的时间内血浆都可以保持生理状态，从而实现简单快速的方法来检测血浆，同时能够更好地提高癌症患者与正常人光谱的区分度。
附图说明
[0023]图1是实施例2中一种基于超滤膜分离血浆的SERS高通量检测的示意图；
[0024]图2是实施例1中纳米银的透射电镜图；
[0025]图3是实施例1中纳米银的电位图；
[0026]图4是实施例2中最佳积分时间的探究；
[0027]图5是实施例2中银胶和血浆混合溶液中添加和未添加液体石蜡随时间变化液滴的干燥过程的图像；
[0028]图6是实施例2中银胶和血浆混合溶液中添加和未添加液体石蜡的拉曼光谱图；
[0029]图7是实施例2中100K
‑
50k、50K
‑
10k和10K
‑
3k的血浆样品的拉曼光谱图；
[0030]图8是实施例3中银胶和血浆混合溶液中添加液体石蜡和聚甘油的拉曼光谱图；
[0031]图9是实施例4中肺癌患者与正常人血浆样品分离后的SERS光谱图；
[0032]图10是实施例4中肺癌患者与正常人血浆样品未分离的SERS光谱图
[0033]图11是对比例1中血浆样品与银胶混合变干后测试的均匀性的柱状图；
[0034]图12是对比例1中血浆样品与银胶混合后添加油膜湿测的均匀性的柱状图；
[0035]图13是实施例5癌症和正常人光谱数据统计的决策树形图。
具体实施方式
[0036]以下实施例用于说明本专利技术以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
[0037]实施例1
[0038]纳米银胶的合成与表征
[0039]纳米银胶的具体合成过程：将5mL盐酸羟胺溶液(60mM)和4.5mL氢氧化钠溶液(0.1M)倒入试管中搅拌混合，盐酸羟胺作为还原剂，然后将混合液迅速加本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种采用SERS湿法鉴定癌症病变的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取血浆用超滤膜离心管分离，得到分离后血浆样品；(2)将步骤(1)的血浆样品与SERS基底混合后，直接滴加在多孔基材上，并且包覆上一层油膜防止挥发，用高通量拉曼光谱仪进行血浆样品的SERS光谱检测，得到光谱数据；(3)输入步骤(2)光谱数据，利用机器学习算法中的决策树与线性回归模型预测癌症病变。2.根据权利要求1所述一种采用SERS湿法鉴定癌症病变的方法，其特征在于：步骤(1)中超滤膜的分子量为100K
‑
3K。3.根据权利要求1所述一种采用SERS湿法鉴定癌症病变的方法，其特征在于：步骤(1)中血浆分离的离心速度为12000rpm，离心时间为20min。4.根据权利要求1所述一种采...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢玉栋，陆德婵，周健，黄祖芳，陈静波，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：
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