甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒，由外显子区域和TERT启动子区域检测组合组成；外显子区域为BRAF、DICER1、HRAS、IDH2、KRAS、NRAS、PIK3CA、RET、TP53外显子区域；该检测试剂盒能够检测10个基因。本发明专利技术还公开了甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：(S1)核酸提取：孵育样品并收集样品DNA；(S2)文库构建：依次进行样品取样和打断，末端修复及加A反应，接头连接反应，连接后双筛，预PCR反应，预PCR反应产物钝化以及质检；(S3)杂交捕获、(S4)上机测序和(S5)生信分析。本发明专利技术检测区域放大到整个基因的外显子区域，大大提升了阳性样本的检出率从而为患者的用药指导和辅助诊断提供更好的帮助。助诊断提供更好的帮助。助诊断提供更好的帮助。

【技术实现步骤摘要】
甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及医用检测试剂盒，特别涉及一种辅助诊断和用药指导的检测试剂盒，尤其是一种甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]肿瘤诊断试剂是一种对人体无任何伤害，有较高的灵敏度、特异性、使用方法简便、费用低廉的“恶性肿瘤”试剂。广泛应用于恶性肿瘤普查、自查和恶性肿瘤手术后病变的追踪监测。目前，国内外癌症诊断尿检试剂均以某一种代谢物为检测目标进行设计。由于不同癌变的代谢各异，根据某种代谢物的增加表达某些脏器组织的癌变有一定的效果，但做为所有癌瘤滋生的诊断依据其可靠度是有限的。
[0003]一般情况下肿瘤测试试剂连同试剂盒一起使用，市场现有的产品为KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF的QPCR或ddPCR试剂。但申请人在实现现有技术中的技术方案的过程中，发现现有技术的技术方案中存在如下技术问题：
[0004]KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF的QPCR或ddPCR试剂，只能针对个别热点检测，检测范围窄，容易漏检，或者是基于NG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒，其特征在于：由外显子区域和TERT启动子区域检测组合组成；所述外显子区域为BRAF、DICER1、HRAS、IDH2、KRAS、NRAS、PIK3CA、RET、TP53外显子区域；该检测试剂盒能够检测10个基因；检测区域放大到整个基因的外显子区域。2.根据权利要求1所述的甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒，其特征在于：包含设计合成的捕获探针。3.根据权利要求2所述的甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒，其特征在于：还包括与所述捕获探针配套的杂交捕获试剂。4.一种如权利要求1
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3中任一项所述的甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(S1)核酸提取：孵育样品并收集样品DNA；(S2)文库构建：依次进行样品取样和打断，末端修复及加A反应，接头连接反应，连接后双筛，预PCR反应，预PCR反应产物纯化以及质检；(S3)杂交捕获：为质检合格的样品进行杂交捕获；(S4)上机测序：对杂交捕获后的样品进行上机测序；(S5)生信分析：对上机测序后的样品进行生物信息分析。5.根据权利要求4所述的甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒的检测方法，其特征在于：(S1)中包括以下步骤：S1
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1)根据FFPE切片组织面积的大小，刮取3～8片FFPE样品或蜡卷至1.5ml离心管，并在管盖上做好对应的标记；S1
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2)加入160μL去蜡溶液，振荡混匀10s，瞬时离心5s；S1
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3)56℃孵育3min，室温冷却；S1
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4)加入55μL RNase
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free water、25μL Buffer FTB和20μL Proteinase K。S1
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5)振荡混匀10s，瞬时离心5s；S1
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6)放入温度已升至56℃的恒温加热器中，孵育1h；S1
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7)放入温度已升至90℃的恒温加热器中，孵育1h；S1
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8)孵育完成后瞬时离心10s；S1
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9)将下层透明液相转移到新的1.5ml离心管，加入115μL RNase
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free water，振荡混匀10s；S1
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10)加入35μL UNG酶，振荡混匀10s，放入温度已升至50℃的恒温加热器中，孵育1h；S1
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11)孵育完成后瞬时离心10s；S1
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12)加入2μL RNase A，振荡混匀10s，室温孵育2min；S1
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13)加入250μL Buffer AL，振荡混匀10s，然后加入250μL的无水乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗喜鹏，吴炳义，冯俊清，高锋，刘晶星，姚芳，刘星沅，
申请(专利权)人：广州香雪南方精准医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：