一种影响角质层细胞间粘附蛋白质增减的组分的筛选方法技术

本发明专利技术提供一种比先前方法准确的、影响以桥粒芯糖蛋白为主的存在于角质层细胞间的粘附蛋白质增减的组分的筛选方法。一种筛选方法，其为一种影响角质层细胞间粘附蛋白质增减的组分的筛选方法，该方法包括：采集工序，使用胶带剥离法，采集角质层细胞；转录工序，将角质层转录到表面带正电荷的载玻片上；清洗工序，清洗所述载玻片；制备工序，在所述载玻片上添加待探索组分，利用免疫组织染色法对粘附蛋白质进行染色，制备筛选样本；图像获取工序，拍摄所述筛选样本的任意部位，得到用于进行分析的图像；及评估工序，以所述用于进行分析的图像中的染色部分的面积为指标，评估所述待探索组分对粘附蛋白质增减的影响。分对粘附蛋白质增减的影响。分对粘附蛋白质增减的影响。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种影响角质层细胞间粘附蛋白质增减的组分的筛选方法


[0001]本专利技术涉及一种影响角质层细胞间粘附蛋白质增减的组分的筛选方法、以及一种适用于该筛选方法的角质层细胞样本的制备方法。

技术介绍

[0002]作为角质细胞(keratinocyte)的粘合连接装置，具有代表性的是桥粒。众所周知，桥粒是参与表皮细胞间及角质层细胞间粘合连接的结构物，表皮细胞间借助于桥粒的粘合连接通过与由角蛋白纤维构成的细胞骨架相配合来维持上皮组织牢固的结构。
[0003]已知桥粒蛋白增加是皮肤状态恶化的原因之一，如皮肤粗糙、晒伤和干燥引起的角质层脱屑等。
[0004]作为控制桥粒蛋白量的方法，现有技术中已经公开了相关方案，其利用蓄积于角质层中的桥粒蛋白的蛋白酶进行分解，从而改善粉刺、头皮屑、脱屑(专利文献1)。
[0005]已知该桥粒的组成蛋白为桥粒芯糖蛋白1、2、3、4、桥粒芯胶粘蛋白1、2、3及桥粒斑蛋白1、2等。
[0006]在组成该桥粒的蛋白中，特别是粘附蛋白质的桥粒芯糖蛋白1在桥粒组分的蛋白分解与细胞剥离之间具有密切的相关关系。因此，确认角质层的桥粒芯糖蛋白的存在状态也是在对桥粒功能进行评估，在评估皮肤状态方面极为重要。
[0007]现有技术文献
[0008]专利文献
[0009]专利文献1:日本专利特表平7
‑
505383号公报

技术实现思路

[0010][专利技术所要解决的问题][0011]综上所述，需要探索一种减少桥粒或构成桥粒的粘附蛋白质的量的组分。
[0012]作为筛选这种组分的方法之一，可以通过使用胶带剥离法采集角质层细胞以及向载玻片转录，从而制备角质层细胞样本，利用免疫组织染色法对粘附蛋白质进行染色，并在任意显微镜下观察。
[0013]然而，使用胶带剥离法进行角质层细胞的转录，粘胶带的组分会残留在载玻片上，其被染色后可能无法与粘附蛋白质区分开来，因此需要清洗载玻片。
[0014]但是，清洗载玻片后，转录的角质层细胞也会剥离，以角质层细胞中存在的粘附蛋白质的存在量为指标的评估难以进行，因此不能说是一种充分的筛选方法。
[0015]本专利技术的课题在于提供一种组份的筛选方法，其中，所述组分以桥粒芯糖蛋白为主，影响存在于角质层细胞间的粘附蛋白质增减；所述方法和现有方法相比更加准确。
[0016]另外，本专利技术的另一课题在于提供一种角质层细胞样本的制备方法，其中，所述角质层细胞样本用于在上述筛选方法中更准确地评估粘附蛋白质的存在量。
[0017][解决课题的技术手段][0018]为解决所述课题，本专利技术提供一种影响角质层细胞间粘附蛋白质增减的组分的筛选方法，包括：
[0019]采集工序，使用胶带剥离法，采集角质层细胞；
[0020]转录工序，将角质层转录到表面带正电荷的载玻片上；
[0021]清洗工序，清洗所述载玻片；
[0022]制备工序，在所述载玻片上添加待探索组分，利用免疫组织染色法对粘附蛋白质进行染色，制备筛选样本；
[0023]图像获取工序，拍摄所述筛选样本的任意部位，得到用于进行分析的图像；及
[0024]评估工序，以所述用于进行分析的图像中的染色部分的面积为指标，评估所述待探索组分对于致密角质层形成的阻碍作用。
[0025]已知细胞表面由于磷脂质的羧基(COO
‑
)而具有负电荷。
[0026]根据本专利技术的筛选方法，通过将角质层细胞转录到表面带正电荷的载玻片上，可以防止角质层细胞因清洗而剥离，可以更准确地评估角质层细胞中的粘附蛋白质的存在量。
[0027]在本专利技术的较佳方式中，
[0028]在所述制备工序中，制备不添加所述待探索组分的筛选对照样本，
[0029]所述评估工序如下：比较所述筛选样本的染色部分的面积与所述筛选对照样本的染色部分的面积，当所述筛选样本的染色部分的面积较小时，评估所述待探索组分具有减少粘附蛋白质的量的作用。
[0030]通过采用这种方式，可以更准确地筛选影响粘附蛋白质增减的组分。
[0031]在本专利技术的较佳方式中，
[0032]在所述制备工序中，制备所述待探索组分的种类相同且浓度不同的多个筛选样本，
[0033]所述评估工序如下：比较多个所述筛选样本的染色部分的面积，评估在减少粘附蛋白质的量的作用中的最佳浓度。
[0034]通过采用这种方式，不仅可以筛选具有减少粘附蛋白质的量的作用的组分，而且可以评估其最佳浓度。
[0035]在本专利技术的较佳方式中，所述粘附蛋白质为桥粒芯糖蛋白1(desmoglein1)。
[0036]在本专利技术的较佳方式中，所述载玻片为表面排列有NH
3+
的载玻片。
[0037]NH
3+
与细胞表面的COO
‑
形成离子键，因此可以提高角质层细胞与载玻片的粘附性。
[0038]在本专利技术的较佳方式中，所述清洗工序是一种将所述载玻片浸泡在二甲苯中的工序。
[0039]通过将载玻片浸泡在二甲苯中以进行清洗，可以更好地抑制角质层细胞的剥离。
[0040]另外，为解决所述课题，本专利技术提供一种使用胶带剥离法制备角质层细胞样本的方法，包括：
[0041]转录工序，将角质层转录到表面带正电荷的载玻片上；及
[0042]清洗工序，清洗所述载玻片。
[0043]通过将角质层转录到表面带正电荷的载玻片上，可以抑制角质层细胞在之后的清洗工序中从载玻片上剥离。
[0044]在本专利技术的较佳方式中，所述载玻片为表面排列有NH
3+
的载玻片。
[0045][专利技术效果][0046]根据本专利技术的筛选方法，与现有方法相比，可以更准确地筛选影响粘附蛋白质增减的组分。
[0047]另外，根据本专利技术的制备角质层细胞的方法，可以抑制载玻片上角质层细胞的剥离。
附图说明
[0048]图1是表示本实施方式的筛选方法的流程图；
[0049]图2是表示本实施方式中的角质层细胞样本的制备工序的流程图；
[0050]图3是表示本实施方式中的评估工序的流程图；
[0051]图4是在角质层细胞样本中添加野生百里香提取物、刺梨提取物作为待探索组分而得到的筛选样本及筛选对照样本的显微镜图像；
[0052]图5是表示将筛选对照样本的染色部分的面积设为100％时筛选样本的染色部分的面积比的图表；
[0053]图6是表示实施例2中的桥粒芯糖蛋白1量的测量结果的图(代表)；
[0054]图7是表示实施例2中的桥粒芯糖蛋白1量的测量结果的图表；
[0055]图8是表示实施例3中的L*值的测量结果的图表；
[0056]图9是表示实施例3中的a*值的测量结果的图表；
[0057]图10是表示实施例3中的b*值的测量结果的图表；
[0058]图11是表示实施例3中的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种影响角质层细胞间粘附蛋白质增减的组分的筛选方法，包括：采集工序，使用胶带剥离法，采集角质层细胞；转录工序，将角质层转录到表面带正电荷的载玻片上；清洗工序，清洗所述载玻片；制备工序，在所述载玻片上添加待探索组分，利用免疫组织染色法对粘附蛋白质进行染色，制备筛选样本；图像获取工序，拍摄所述筛选样本的任意部位，得到用于进行分析的图像；及评估工序，以所述用于进行分析的图像中的染色部分的面积为指标，评估所述待探索组分对粘附蛋白质增减的影响。2.根据权利要求1所述的筛选方法，其中在所述制备工序中，制备不添加所述待探索组分的筛选对照样本，所述评估工序如下：比较所述筛选样本的染色部分的面积与所述筛选对照样本的染色部分的面积，当所述筛选样本的染色部分的面积较小时，评估所述待探索组分具有减少粘附蛋白质的量的作用。3.根据权利要求1所述的筛选方法，其中在所述制备工序中...

【专利技术属性】
技术研发人员：多田明弘，武重史佳，
申请(专利权)人：宝丽化学工业有限公司，
类型：发明
国别省市：