基于SPE技术的淫羊藿黄酮成分指纹图谱的建立与应用制造技术

本发明专利技术涉及多品种淫羊藿药材的指纹图谱的建立方法，具体是采用SPE小柱对淫羊藿黄酮成分进行分离和富集，再采用HPLC方法建立不同品种淫羊藿黄酮成分的指纹图谱，以及该方法在淫羊藿属植物中的应用。本方法具有简单、可操作性较强的特点，建立的方法可以用于淫羊藿药材质量控制。材质量控制。

【技术实现步骤摘要】
基于SPE技术的淫羊藿黄酮成分指纹图谱的建立与应用


[0001]本专利技术涉及多品种淫羊藿药材的指纹图谱的建立方法，具体是采用SPE小柱对淫羊藿黄酮成分进行分离和富集，再采用HPLC方法建立不同品种淫羊藿黄酮成分的指纹图谱，以及该方法在淫羊藿属植物中的应用。

技术介绍

[0002]中药淫羊藿为小檗科淫羊藿属EpimediumL.植物，又名仙灵脾、放杖草，是我国传统补益类中药，应用历史悠久。淫羊藿化学成分复杂且多样，主要以异戊烯基黄酮为主，还包括多糖，木脂素类、苯酚苷类、生物碱类等化学成分。现已被开发成多种复方制剂，如仙灵骨葆系列、益肾灵颗粒等，用来治疗骨质疏松、股骨头坏死、性功能障碍等疾病，临床应用广且具有极大的开发潜力。然而，淫羊藿药材也是历届药典中来源较多的药材之一，2010年版《中国药典》收录了5种基原，分别为淫羊藿E.brevicornuMaxim.、箭叶淫羊藿E.sagittatum(Sieb.etZucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿E.pubescensMaxim.，朝鲜淫羊藿E.koreanumNakai，和巫山淫羊藿E.wushanenseT.S.Ying。2015年版药典在2010年版药典基础上将巫山淫羊藿单独作为一个品种。据统计，目前作为中药淫羊藿使用的主要资源种类多达10余种，市场品种混杂，质量也参差不齐，严重影响了用药的安全有效。现有的淫羊藿药材鉴别和质量控制方法存在着特异性、专属性不强的缺点。
[0003]基于固相萃取(SolidPhaseExtraction，简称SPE)技术对样品具有富集、分离的优点，本专利技术将SPE技术用于淫羊藿黄酮成分的分离和富集，在此基础上建立不同品种淫羊藿的黄酮成分指纹图谱，以用于淫羊藿不同品种的鉴定。

技术实现思路

[0004]本专利技术解决的技术问题是：针对淫羊藿药材的品种鉴定和质量控制一直是其研究与应用的热点和难点。
[0005]本专利技术针对现有的问题提供一种采用SPE技术对淫羊藿黄酮类成分分离和富集，构建淫羊藿不同品种黄酮成分HPLC指纹图谱的方法，可实现不同品种淫羊藿药材的鉴定。
[0006]具体而言，本专利技术提供了如下技术方案。
[0007]本专利技术提供了一种基于SPE分离富集技术建立不同品种淫羊藿黄酮成分指纹图谱的方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0008]步骤1：采用SPE对不同品种淫羊藿黄酮成分进行分离和富集；
[0009]步骤2：采用HPLC方法建立淫羊藿黄酮成分对照指纹图谱。
[0010]优选的，其中，所述不同品种的淫羊藿包括淫羊藿，朝鲜淫羊藿，柔毛淫羊藿，箭叶淫羊藿和巫山淫羊藿，但并不局限于上述品种。
[0011]优选的，其中，所述步骤1还包括对不同品种淫羊藿供试品溶液的制备。
[0012]优选的，其中，所述步骤1中对不同品种淫羊藿供试品溶液的制备包括：称取不同品种淫羊藿样品粉末和第一提取溶剂，超声提取，再称定重量，用第一提取溶剂补足减失的
重量，过滤，将所述滤液蒸干再用第二提取溶剂溶解，离心后得到的上清液，即为供试品溶液。
[0013]优选的，其中，所述第一提取溶剂和第二提取溶剂甲醇和/或乙醇水溶液；所述淫羊藿样品与第一提取溶剂的质量体积比为1g：10-200ml，所述淫羊藿样品与第二提取溶剂的质量体积比为1g：50ml-100ml；优选地，所述超声提取的时间为10-60min。
[0014]优选的，其中，所述第一提取溶剂为70％(体积百分比)的甲醇水溶液，所述第二提取溶剂为50％(体积百分比)的甲醇溶液，所述淫羊藿样品与第一提取溶剂的质量体积比为1g：200ml；优选地，所述超声提取的时间为30min；进一步优选超声功率为250W；更进一步优选超声频率为40kHz。
[0015]优选的，其中，所述步骤1中采用SPE对不同品种淫羊藿黄酮成分进行分离和富集包括：采用甲醇或乙腈活化固相萃取柱，再用甲醇或乙醇平衡SPE小柱，将供试品溶液上柱，用洗脱液洗脱，所述洗脱液为甲醇溶液或乙醇溶液，最后收集洗脱液即得到富含淫羊藿黄酮成分的溶液；其中，所述洗脱次数优选为1-3次，洗脱方式优选加压或不加压。
[0016]优选的，其中，所述活化固相萃取柱采用甲醇，平衡SPE小柱采用55％的甲醇溶液，供试品溶液的量为选取1ml-3ml，优选为2ml；所述第一次洗脱采用40％-60％(体积比)甲醇2-6ml作为洗脱溶剂不加压洗脱，根据需要选择第二次洗脱情况下，所述第二次洗脱采用70-90％(体积比)甲醇溶液4-6ml作为洗脱溶剂加压洗脱；
[0017]优选的，所述第一次洗脱采用55％(体积比)甲醇4ml作为洗脱溶剂不加压洗脱，所述第二次洗脱采用80％(体积比)甲醇溶液5ml作为洗脱溶剂，加压洗脱，最后收集洗脱液即得到富含淫羊藿黄酮成分的溶液。
[0018]优选的，其中，所述步骤2中HPLC方法的色谱条件为：色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱，所述流动相A为0～0.5％甲酸水溶液(体积百分比)，优选为0.02％-0.2％的甲酸水溶液(体积百分比)，流动相B为乙腈。
[0019]优选的，其中，所述洗脱梯度如下所述：
[0020]0-4分钟，73％
→
73％流动相A，27％
→
27％流动相B；
[0021]4-18分钟，73％
→
62％流动相A，27％
→
38％流动相B；
[0022]18-22分钟，62％
→
62％流动相A，38％
→
38％流动相B；
[0023]22-28分钟，62％
→
50％流动相A，38％
→
50％流动相B；
[0024]22-31.9分钟，50％
→
25％流动相A，50％
→
75％流动相B；
[0025]31.9-32分钟，25％
→
73％流动相A，75％
→
27％流动相B；
[0026]32-37分钟，73％
→
73％流动相A，27％
→
27％流动相B。
[0027]优选的，其中，所述检测器为PDA检测器，检测波长为210nm-280nm；优选柱温为25℃-40℃，或者优选流速为0.10-0.50ml/min。
[0028]优选的，其中，所述的色谱柱的规格为2.1*100mm，1.8μm，柱温为30℃，所述流动相A为0.1％甲酸水(体积百分比)溶液流速为0.20ml/min，检测波长为270nm。
[0029]优选的，其中，步骤2中，用HPLC方法检测步骤1中得到的富含淫羊藿黄酮成分的溶液，再采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，得到淫羊藿黄酮成分对照指纹图谱，最后利用UPLC-Q-TOF-MS采集质谱数据，并通过对照品比对参考文献对共有峰进行鉴定。
[0030]本专利技术还提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于SPE分离富集技术建立不同品种淫羊藿黄酮成分指纹图谱的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：采用SPE对不同品种淫羊藿黄酮成分进行分离和富集；步骤2：采用HPLC方法建立淫羊藿黄酮成分对照指纹图谱。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述不同品种的淫羊藿包括淫羊藿，朝鲜淫羊藿，柔毛淫羊藿，箭叶淫羊藿和巫山淫羊藿中的一种或两种以上。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤1还包括对不同品种淫羊藿供试品溶液的制备。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述步骤1中对不同品种淫羊藿供试品溶液的制备包括：称取不同品种淫羊藿样品粉末和第一提取溶剂，超声提取，再称定重量，用第一提取溶剂补足减失的重量，过滤，将所述滤液蒸干再用第二提取溶剂溶解，离心后得到的上清液，即为供试品溶液。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述第一提取溶剂和第二提取溶剂甲醇和/或乙醇水溶液；所述淫羊藿样品与第一提取溶剂的质量体积比为1g：10-200ml，所述淫羊藿样品与第二提取溶剂的质量体积比为1g：50ml-100ml；优选地，所述超声提取的时间为10-60min。6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第一提取溶剂为70％(体积百分比)的甲醇水溶液，所述第二提取溶剂为50％(体积百分比)的甲醇溶液，所述淫羊藿样品与第一提取溶剂的质量体积比为1g：200ml；优选地，所述超声提取的时间为30min；进一步优选超声功率为250W；更进一步优选超声频率为40kHz。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述步骤1中采用SPE对不同品种淫羊藿黄酮成分进行分离和富集包括：采用甲醇或乙腈活化固相萃取柱，再用甲醇或乙醇平衡SPE小柱，将供试品溶液上柱，用洗脱液洗脱，所述洗脱液为甲醇溶液或乙醇溶液，最后收集洗脱液即得到富含淫羊藿黄酮成分的溶液；其中，所述洗脱次数优选为1-3次，洗脱方式优选加压或不加压。8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述活化固相萃取柱采用甲醇，平衡SPE小柱采用55％的甲醇溶液，供试品溶液的量为选取1ml-3ml，优选为2ml；所述第一次洗脱采用40％-60％(体积比)甲醇2-6ml作为洗脱溶剂不加压洗脱，根据需要选择第二次洗脱情况下，所述第二次洗脱采用70-90％(体积比)甲醇溶液4-6ml作为洗脱溶剂加压洗脱；优选的，所述第一次洗脱采用55％(体积比)甲醇4ml作为洗脱溶剂不加压洗脱，所述第二次洗脱采用80％(...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙宜春，李慧馨，胡晓，黄春跃，屈莉莉，
申请(专利权)人：国药集团同济堂贵州制药有限公司，
类型：发明
国别省市：