CD73基因人源化的非人动物的构建方法及应用技术

本发明专利技术涉及人源化基因改造非人动物，特别是基因改造啮齿动物，尤其是基因改造小鼠，具体涉及表达人源化CD73蛋白的动物模型的构建方法及其在生物医药领域的应用。方法及其在生物医药领域的应用。方法及其在生物医药领域的应用。

【技术实现步骤摘要】
CD73基因人源化的非人动物的构建方法及应用


[0001]本专利技术属于动物基因工程和基因遗传修饰领域，具体地说，涉及一种CD73基因人源化的非人动物及其构建方法和在生物医药领域的应用。

技术介绍

[0002]免疫疗法通过激活免疫系统攻击并杀死癌细胞，是近年来肿瘤研究的一个重要领域。目前和肿瘤免疫治疗相关的一些药物已经用于治疗癌症，已有药品上市并应用在多个适应症，如靶向T细胞共刺激分子CTLA
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4、PD
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1及其配体的单克隆抗体已经取得确切疗效，但病人的平均应答率较低。考虑到肿瘤的发生是多环节多因素的共同作用结果，单一的免疫治疗策略治疗效果有限，并且大量患者会对治疗产生耐药性，在临床中结合两种或多种免疫治疗手段进行是肿瘤治疗的一个趋势。开发更多可以用于提高免疫系统对肿瘤识别及杀伤能力的药物一直是免疫学研究的热点之一。
[0003]CD73是由NT5E基因(又名CD73基因)编码的胞外
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5'
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核苷酸酶，蛋白分子量70KD，广泛表达于人体内皮细胞、淋巴细胞，如Tr本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CD73基因人源化的非人动物的构建方法，其特征在于，所述的非人动物基因组包含人或人源化CD73基因，所述的非人动物体内表达人或人源化CD73蛋白。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化CD73蛋白的氨基酸序列包含下列组中的一种：a)SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的全部或部分；b)与SEQ ID NO：4所示氨基酸序列同一性至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；c)与SEQ ID NO：4所示氨基酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个氨基酸；或，d)与SEQ ID NO：4所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化CD73基因包含人CD73基因的1号至9号外显子的全部或部分，优选的，包含1号外显子的全部或部分、2号至8号外显子的全部和9号外显子的全部或部分，其中，1号外显子的部分至少包含100bp的核苷酸序列，9号外显子的部分至少包含50bp的核苷酸序列，进一步优选的，所述的人源化CD73基因包含人CD73基因的CDS序列的全部或部分或人CD73的全长核苷酸序列的全部或部分。4.根据权利要求1
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3任一所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化CD73基因包含下列组中的一种：A)SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：17所示核苷酸序列的全部或部分；B)与SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：17所示核苷酸序列同一性至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；C)与SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：17所示核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸；或，D)与SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：17所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸残基的核苷酸序列。5.根据权利要求1
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4任一所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化CD73基因包含下列组中的一种：(i)包含SEQ ID NO：12、13或18所示核苷酸序列的全部或部分；(ii)包含与SEQ ID NO：12、13或18所示核苷酸序列的同一性至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；(iii)包含与SEQ ID NO：12、13或18所示的核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸；(iv)包含与SEQ ID NO：12、13或18所示的核苷酸序列所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列；(v)转录的mRNA包含SEQ ID NO：19所示核苷酸序列的全部或部分；(vi)转录的mRNA包含与SEQ ID NO：19所示核苷酸序列的同一性至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；(vii)转录的mRNA包含与SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸；或，
(viii)转录的mRNA包含与SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列。6.根据权利要求1
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5任一所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括用包含人或人源化CD73基因的核苷酸序列导入非人动物CD73基因座，优选用包含人CD73基因的1号至9号外显子的全部或部分导入非人动物CD73基因座，进一步优选用包含1号外显子的全部或部分、2号至8号外显子的全部和9号外显子的全部或部分导入非人动物CD73基因座，其中，1号外显子的部分至少包含100bp的核苷酸序列，9号外显子的部分至少包含50bp的核苷酸序列，更进一步优选用包含人CD73基因的CDS序列的全部或部分或人CD73的全长核苷酸序列的全部或部分导入非人动物CD73基因座，进一步优选的，所述的构建方法包括用包含编码SEQ ID NO：4的核苷酸序列，再进一步优选包括用包含SEQ ID NO：9、12、13、17或18导入非人动物CD73基因座。7.根据权利要求1
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6任一所述的构建方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈月雷，黄蕤，白阳，郭朝设，张美玲，尚诚彰，
申请(专利权)人：百奥赛图北京医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：