一种基于中国青鳉的化学品毒性高内涵快速筛查方法技术

本发明专利技术公开了一种基于中国青鳉的化学品毒性高内涵快速筛查方法，涉及环境化合物的检测技术领域，本方法利用中国青鳉胚胎、细胞、幼鱼或雄鱼精子，建立化学物质毒性评价模型，通过进行暴露实验，利用高内涵成像分析系统进行成像扫描，检测受试物的胚胎、器官、幼体和精子毒性。本发明专利技术方法取材方便、准确性好、灵敏度高、测试通量高，能够快速识别不同作用模式的环境内分泌干扰物，系统表征其毒性信息，在环境水体毒性识别与生态风险评价中有较好的应用前景。用前景。用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种基于中国青鳉的化学品毒性高内涵快速筛查方法


[0001]本专利技术涉及环境化合物的检测
，特别是涉及一种基于中国青鳉的化学品毒性高内涵快速筛查方法。

技术介绍

[0002]随着现代工业的进步，人类合成、使用和间接产生的化合物的种类和数量在不断增长，其中包括了化工原料、食品添加剂、阻燃剂、农药、药物、天然化合物及其衍生物等多个类别。然而由于对其毒性作用认识不足，绝大多数的化合物缺乏有效地监管，因此部分化合物能够以直接或间接的方式进入环境，成为环境污染物。这其中，许多环境污染物也是内分泌干扰物(Endocrine Disrupting Chemicals，EDCs)，它们的分子结构与人体内激素的分子结构非常相似，能与机体内的雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)、甲状腺激素受体(TR)、维生素A酸受体(RAR)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、雌激素相关受体(ERR)、维生素D受体(VDR)等结合，表现出拟天然激素或抗天然激素的作用，损害人和动物的内分泌功能。
[0003]水环境是大部分污染物的最终聚集场所，作为水生生态系本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于中国青鳉的化学品毒性高内涵快速筛查方法，其特征在于，包括采用中国青鳉胚胎、细胞、幼鱼或精子检测化学品毒性的方法，其中：采用中国青鳉胚胎检测化学品毒性的方法，包括以下步骤：1
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1)将规范化养殖的中国青鳉雌雄成鱼按照1:2的个数比例放入交配盒中，并将雌雄成鱼隔开；过夜后取消隔档，并光照刺激中国青鳉交配产卵，收集鱼卵并用水清洗后镜检，随机选取发育正常的胚胎放入纯净水中培养一预定的时间；1
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2)将化学品用DMSO溶解，再用纯净水稀释至各实验梯度；在孔板的每孔内放置1个胚胎，加入系列实验梯度的化学品和DMSO对照品，进行暴露实验，实验过程中每隔半天更换一半的处理液；每个化学品至少设置3个剂量组，每个剂量组设置至少10个复孔，同时设置阴性对照组和阳性对照组；1
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3)在暴露实验过程中，通过高内涵成像分析系统进行成像扫描，分析各个图像中的各项指标，通过胚胎的形态学打分、心率、行动和孵化率指标判断化学品对胚胎发育的影响，通过胚胎的畸形率和致死率指标判断化学品对胚胎的影响，通过观察胚胎的体节、卵黄囊、心脏、血管、神经、眼点组织器官的发育畸形情况判断化学品的致畸性，通过检测胚胎及孵化子代性腺发育判断化学品的雌激素或雄激素活性；采用中国青鳉细胞检测化学品毒性的方法，包括以下步骤：2
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1)提取至少3只中国青鳉幼鱼的组织，多次洗涤后，制成组织块，加入胰蛋白酶
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EDTA，至组织松散；吸出多余的胰蛋白酶
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EDTA，加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液，过筛，离心；弃掉上清液，加入完全培养基重悬细胞，调整细胞密度，培养过夜；2
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2)将化学品用DMSO溶解制备高浓度母液，再用完全培养基稀释至各实验梯度；除去原培养基，加入系列浓度的化学品和DMSO对照品并继续培养一天，每个化学品至少设置3个剂量组，每个剂量组设置2个复孔，同时设置阴性对照组和阳性对照组；2
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3)对细胞加入化学品进行荧光染色，避光孵育；用无菌PBS缓冲液洗涤，并再加入无菌PBS缓冲液，利用高内涵成像分析系统进行活细胞成像扫描，分析各个图像中的荧光强度，根据荧光强度定量检测指标，该检测指标包括细胞数目、DNA含量、谷胱甘肽降低水平、活性氧簇含量和线粒体膜电位；根据该检测指标绘制量效关系曲线，并确定毒性阈值，判断化学品的毒性；采用中国青鳉幼鱼检测化学品毒性的方法，包括以下步骤：3
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1)随机选取同一批次发育正常的胚胎，放入纯净水中培养使其孵化，待幼鱼孵出后继续进行驯养，驯养一段时间后随机选取形态大小接近、健康的中国青鳉幼鱼；3
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2)将化学品用DMSO溶解制备高浓度母液，再用纯净水稀释至各实验梯度；在孔板的每个孔内放置1条幼鱼，加入系列实验梯度的化学品和DMSO对照品，进行暴露实验；实验过程中每隔一天更换一半的处理液，每天定量喂食2次，试验过程中不曝气；每个化学品至少设置3个剂量组，每个剂量组设置至少8个复孔，同时设置阴性对照组和阳性对照组；3
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3)在暴露实验过程中，通过高内涵成像分析系统进行成像扫描，分析各个图像中幼鱼的评价指标，通过幼鱼的形态学打分和行动指标考察化学品对幼鱼发育的影响，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张照斌，贾晓静，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：