一种杂合抗菌肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种杂合抗菌肽及其制备方法和应用，所述杂合抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术中的杂合抗菌肽Melectin

【技术实现步骤摘要】
一种杂合抗菌肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种杂合抗菌肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]饲粮中添加抗生素可缓解仔猪断奶应急，促进仔猪生长，但抗生素残留及病原菌耐药性问题对畜禽及人类健康产生了负面的影响。2020年，我们国家畜禽养殖用饲料全面禁抗，饲用抗生素的禁用会造成仔猪保育前期的发病死淘率增加，生长速度降低。在饲料禁抗的背景下，寻求有效的抗生素替代物，提升猪肠道免疫调节作用，研发新型高效安全的产品来改善生猪肠道健康就显得尤其重要。
[0003]抗菌肽是一类具有广谱抑菌活性的多肽类物质，部分抗菌肽还能激活免疫系统，在细胞信号传导过程、细胞增殖调节过程以及抗肿瘤、抗病毒、抗寄生虫等方面具有重要功能。抗菌肽因其独特的杀菌机制和优良的理化性质成为抗生素替代品研发的热点，抗菌肽在医用抗感染治疗药物以及畜牧业生产中具有广阔应用前景。在抗菌肽研发过程中，改造已有抗菌肽和设计新抗菌肽分子是提高其活性的有效途径。对抗菌肽进行分子设计、结构改造和修饰、降低其溶血活性、提高其抑菌活性和酸碱稳定性等成为抗菌肽研发的重要内容之一。
[0004]Melectin是分离自隐寄生蜂毒液的一种抗菌肽，可抑制革兰氏阳性和阴性菌，具有较低的溶血活性。Protonectin是分离自新大陆热带区社会黄蜂Agelaia pallipes毒液的阳离子型抗菌肽。其对大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、金色葡萄球菌都有一定的抑制作用。
[0005]目前，改造已有抗菌肽和设计新抗菌肽分子是提高其活性的有效途径。采用基因工程技术生产抗菌肽具有活性高、产量大、成本低廉、生产速度快、易于规模化生产等优点。目前抗菌肽的抗菌活性较抗生素还存在一定的差距，且很多抗菌肽还存在着毒性强、稳定性差、成本高等诸多问题。因此，对抗菌肽进行分子设计、结构改造和修饰、降低其溶血活性、提高、提高其抑菌效果及广泛性、提高其热稳定性、酸碱稳定性等成为抗菌肽研发的重要内容之一。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一个目的在于提供一种杂合抗菌肽。
[0007]本专利技术的第二个目的在于提供一种核酸分子。
[0008]本专利技术的第三个目的在于提供一种表达载体。
[0009]本专利技术的第四个目的在于提供一种重组细胞。所述细胞非植物或动物细胞。
[0010]本专利技术的第五个目的在于提供上述抗菌肽或核酸分子或表达载体或重组细胞在制备微生物抑制剂中的应用。
[0011]本专利技术的第六个目的在于提供上述抗菌肽或核酸分子或表达载体或重组细胞在制备饲料或添加剂中的应用。
[0012]本专利技术的第七个目的在于提供一种添加剂。
[0013]本专利技术所采取的技术方案是：
[0014]本专利技术的第一个方面，提供一种杂合抗菌肽Melectin
‑
P，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0015]本专利技术的第二个方面，提供一种核酸分子，编码本专利技术第一方面所述抗菌肽。
[0016]在本专利技术的一些优选实施方式中，所述核酸分子的序列如SEQ ID NO:2所示。
[0017]本专利技术的第三个方面，提供一种表达载体，包含本专利技术第二方面所述核酸分子。
[0018]本专利技术的第四个方面，提供一种重组细胞，包含本专利技术第三方面所述表达载体。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述细胞非植物细胞或动物细胞。
[0020]本专利技术的第五个方面，提供本专利技术第一方面所述杂合抗菌肽或本专利技术第二方面所述核酸分子或本专利技术第三方面所述表达载体或本专利技术第四方面所述重组细胞在制备微生物抑制剂中的应用。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述微生物为大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌或金黄色葡萄球菌。
[0022]本专利技术的第六个方面，提供本专利技术第一方面所述杂合抗菌肽或本专利技术第二方面所述核酸分子或本专利技术第三方面所述表达载体或本专利技术第四方面所述重组细胞在制备饲料或添加剂中的应用。
[0023]在本专利技术的一些优选实施方式中，所述添加剂为防腐剂或药。
[0024]在本专利技术的一些优选实施方式中，所述药为兽药。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述添加剂为食品添加剂、饲料添加剂、化妆品添加剂或卫生产品添加剂。
[0026]本专利技术的第七个方面，提供一种添加剂，包含本专利技术第一方面所述杂合抗菌肽。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述添加剂为防腐剂或药。
[0028]在本专利技术的一些优选实施方式中，所述药为兽药。
[0029]在本专利技术的一些实施方式中，所述添加剂为食品添加剂、饲料添加剂、化妆品添加剂或卫生产品添加剂。
[0030]在本专利技术的一些实施方式中，所述饲料添加剂的使用量为0.1～1％。
[0031]在本专利技术的一些优选实施方式中，所述饲料添加剂的使用量为0.2％。
[0032]本专利技术的有益效果是：
[0033]本专利技术提供一种杂合抗菌肽Melectin
‑
P、编码抗菌肽的核酸分子以及包含上述核酸分子的表达载体或重组细胞。本专利技术中的杂合抗菌肽Melectin
‑
P具有广谱抗菌活性，对多数革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌均有不同程度的抑菌活性，特别是对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌具有较好的抑菌活性。同原始抗菌肽相比，杂合后抗菌肽对常见致病菌的抑菌活性显著增强。抑菌特别是同时又具有热稳定性和酸稳定性的特点，使其在食品防腐、疾病防治和动物饲料添加剂等方面显示很好的应用前景。而且本专利技术中的杂合肽Melectin
‑
P是小分子肽，可以在100℃的高温保持45min，具有较好的热稳定性，可以满足饲料制粒的高温要求。
附图说明
[0034]图1为重组杂合肽Melectin
‑
P的Tricine
‑
SDS
‑
PAGE电泳检测。其中条带2
‑
7分别为重组菌发酵0h、24h、48h、72h、96h和120h的电泳图；条带1和8为Marker。
[0035]图2为重组杂合肽Melectin
‑
P的热稳定性图。
[0036]图3为重组杂合肽Melectin
‑
P的酸碱稳定性图。
具体实施方式
[0037]以下将结合实施例对本专利技术的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本专利技术的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本专利技术的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本专利技术的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本专利技术保护的范围。
[0038]毕赤酵母X
‑
33(His
‑
Mut
+
)、表达载体pPICZα
‑
A购于Invitrogen公司；Escherichia coli ATCC2592本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.杂合抗菌肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种核酸分子，编码权利要求1所述杂合抗菌肽，所述核酸分子的序列优选如SEQ ID NO:2所示。3.一种表达载体，包含权利要求2所述核酸分子。4.一种重组细胞，包含权利要求3所述表达载体。5.权利要求1所述杂合抗菌肽或权利要求2所述核酸分子或权利要求3所述表达载体或权利要求4所述重组细胞在制备微生物抑制剂中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述微生...

【专利技术属性】
技术研发人员：房强，牛孝龙，张宏刚，郑海东，武翔，李雷，蔡力旺，李莉，
申请(专利权)人：广州格拉姆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：