一种基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法及多指标定量评价方法技术

本发明专利技术公开了一种基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法及多指标定量评价方法,采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法建立的广藿香HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法及多指标定量评价方法


[0001]本专利技术涉及中药分析测试及质量评价领域，特别是涉及一种基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法及多指标定量评价方法。

技术介绍

[0002]广藿香为唇形科植物广藿香Pogostemon cablin(Blanco.)Benth.的干燥地上部分，主要分布于我国广东、海南、广西等地。广藿香味辛、微温，归脾、胃、肺经；具芳香化浊、和中止呕、发表解暑的功效，用于湿浊中阻，脘痞呕吐，暑湿表证，湿温初起，发热倦怠，胸闷不舒，寒湿闭暑、腹痛吐泻，鼻渊头痛等症。研究发现广藿香主要含有萜类、黄酮类、苯丙素类、甾体类、生物碱类和脂肪酸类等成分，具有抗病原微生物、抗炎镇痛、调节胃肠道功能和免疫等活性。
[0003]中药指纹图谱是采用现代分析技术反映中药或中成药的色谱或光谱信息的图谱，已成为国际公认的控制中药或中成药质量的有效手段。目前最为常用的是高效液相(HPLC)指纹图谱，紫外检测器是其主要的检测器，但仅具有共轭系统的化合物才有紫外吸收，故不能测定无紫外吸收的成分；同时，化学成分的紫外吸光度具有加和性，不能准确、真实地反映化学成分含量，因此紫外检测器具有明显的局限性。质谱检测器是一种高灵敏度、适用范围广泛的通用检测器，尤其适合多类型、多组分的复杂体系检测。高效液相色谱串联质谱法可全面定性和定量化学成分，目前已广泛应用于中药及中成药化学成分的定量和定性分析。因此，采用高效液相色谱串联质谱法建立中药及中成药的指纹图谱,并同时测定多种质控指标成分，能更真实地反映中药及中成药的化学成分组成。
[0004]目前广藿香的质量检测方法主要是依据《中国药典》(2020版)，将性状、显微鉴别、薄层色谱和百秋李醇的含量(不得少于0.10％)等作为主要检测指标。广藿香质量研究多采用GC
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MS法测定挥发油组成、挥发油含量，同时采用GC
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MS指纹图谱技术评价广藿香质量。而广藿香化学成分组成不仅含有挥发性成分，还含有大量难挥发性成分，因此仅对挥发性成分测定及表征不足以反映广藿香的内在质量。因此，需要开发一种可以对广藿香挥发性成分和难挥发性成分进行较全面定性和定量的质量检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法及多指标定量评价方法，可较全面地表征和评价广藿香的质量，为广藿香的质量标准研究提供可靠依据。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为：
[0007]一种基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
[0008](1)制备广藿香指纹图谱供试品溶液；
[0009](2)采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用(HPLC
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Q
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TOF/MS)法测定广
藿香指纹图谱供试品溶液；
[0010](3)建立广藿香HPLC
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Q
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TOF/MS指纹图谱；
[0011](4)确定色谱峰母离子的精确质量数和分子式，鉴定广藿香指纹图谱中共有成分的化学结构。
[0012]作为上述方案的进一步改进，所述步骤(1)具体包括：将广藿香药材粉碎，过3号筛，精密称定1g粉末置具塞锥形瓶中，精密加入15mL浓度为60％的甲醇，称定重量；之后浸泡30min，再超声30min，放冷，再次称定重量；然后用浓度为60％的甲醇补足减失重量，摇匀；最后取适量溶液于离心机中离心10min，离心的转速为14000rpm/min，离心温度为10℃；离心后取上清液转移至进样瓶中，即得广藿香指纹图谱供试品溶液。
[0013]作为上述方案的进一步改进，所述步骤(3)具体包括：将采集得到的HPLC
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Q
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TOF/MS数据导出并整理为txt格式，导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版相似度软件，获得由44个共有色谱峰构成的广藿香HPLC
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Q
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TOF/MS指纹图谱。
[0014]作为上述方案的进一步改进，所述步骤(4)具体包括：利用Agilent MassHunter软件处理数据，确定色谱峰母离子的精确质量数和分子式，检索Agilent PCDL、PubChem和MassBank数据库及现有文献进行质谱数据比对，人工解析其质谱裂解规律，再经对照品核对保留时间和质谱图确定化学结构，鉴定了广藿香29个共有成分。
[0015]作为上述方案的进一步改进，所述高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用(HPLC
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Q
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TOF/MS)的色谱、质谱条件为：
[0016]色谱柱为Agilent Poroshell 120EC C18柱，150mm
×
3.0mm，2.7μm，流动相A:B为0.1％甲酸+5mM乙酸铵水溶液:乙腈，梯度洗脱程序为0～5.00min，95
→
90％A；5.00～25.00min，90
→
80％A；25.00～35.00min，80
→
70％A；35.00～50.00min，70
→
55％A；50.00～60.00min，55
→
50％A；60.00～70.00min，50
→
35％A；70.00～73.00min，35
→
10％A；73.00～75.00min，10
→
2％A；75.00～77.00min，2％A；77.00～77.10min，2
→
95％A；77.10～80.00min，95％A；流速为0.35mL/min；柱温为30℃；进样量为10μL；
[0017]电喷雾离子源，负离子模式；毛细管电压：3500V；喷嘴电压：1000V；毛细管出口电压：150V；锥孔电压：65V；干燥气温度：300℃；干燥气流速：8L/min；鞘气温度：350℃；鞘气流速：12L/min；质量扫描范围：m/z 100～1000，碰撞能量梯度为10，20，40eV；参比离子为：m/z 112.9856、966.0007。
[0018]本专利技术第二方面在于提供一种基于质谱技术的广藿香指纹图谱，所述广藿香指纹图谱由如上所述的基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法构建获得。
[0019]本专利技术第三方面在于提供一种基于质谱技术广藿香多指标定量评价方法，所述方法包括如下步骤：
[0020](1)制备广藿香多指标定量供试品溶液；
[0021](2)选定绿原酸、新西兰牡荆苷、麦角甾苷、异麦角甾苷、壬二酸、芹菜素、鼠李柠檬素、藿香黄酮醇和广藿香酮9个活性成分作为广藿香质量评价指标；
[0022](3)采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱(UPLC
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MS/MS)法建立同时测定9个活性成分的多指标定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备广藿香指纹图谱供试品溶液；(2)采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用法测定广藿香指纹图谱供试品溶液；(3)建立广藿香HPLC
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Q
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TOF/MS指纹图谱；(4)确定色谱峰母离子的精确质量数和分子式，鉴定广藿香指纹图谱中共有成分的化学结构。2.根据权利要求1所述的基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括：将广藿香药材粉碎，过3号筛，精密称定1g粉末置具塞锥形瓶中，精密加入15mL浓度为60％的甲醇，称定重量；浸泡30min，再超声30min，放冷，再次称定重量；之后用浓度为60％的甲醇补足减失重量，摇匀；最后取适量溶液于离心机中离心10min，离心的转速为14000rpm/min，离心温度为10℃；离心后取上清液转移至进样瓶中，即得广藿香指纹图谱供试品溶液。3.根据权利要求1所述的基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)具体包括：将采集得到的HPLC
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Q
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TOF/MS数据导出并整理为txt格式，导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版相似度软件，获得由44个共有色谱峰构成的广藿香HPLC
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Q
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TOF/MS指纹图谱。4.根据权利要求1所述的基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤(4)具体包括：利用Agilent MassHunter软件处理数据，确定色谱峰母离子的精确质量数和分子式，检索Agilent PCDL、PubChem和MassBank数据库及现有文献进行质谱数据比对，人工解析其质谱裂解规律，再经对照品核对保留时间和质谱图确定化学结构，鉴定了广藿香29个共有成分。5.根据权利要求1所述的基于质谱技术的广藿香指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用法的色谱、质谱条件为：色谱柱为Agilent Poroshell 120EC C18柱，150mm
×
3.0mm，2.7μm，流动相A:B为0.1％甲酸+5mM乙酸铵水溶液:乙腈，梯度洗脱程序为0～5.00min，95
→
90％A；5.00～25.00min，90
→
80％A；25.00～35.00min，80
→
70％A；35.00～50.00min，70
→
55％A；50.00～60.00min，55
→
50％A；60.00～70.00min，50
→
35％A；70.00～73.00min，35
→
10％A；73.00～75.00min，10
→
2％A；75.00～77.00min，2％A；77.00～77.10min，2
→
95％A；77.10～80.00min，95％A；流速为0.35mL/min；柱温为30℃；进样量为10μL；电喷雾离子源，负离子模式；毛细管电压：3500V；喷嘴电压：1000V；毛细管出口电压：150V；锥孔电压：65V；干燥气温度：300℃；干燥气流速：8L/min；鞘气温度：350℃；鞘气流速：12L/min；质量扫描范围：m/z 100～1000，碰撞能量梯度为10，20，40eV；参比离子为：m/z 112.9856、966.0007。6.一种基于质谱技术的广藿香指纹图谱，其特征在于，由权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢斌，吴惠勤，周熙，罗辉泰，黄晓兰，
申请(专利权)人：广东省科学院测试分析研究所中国广州分析测试中心，
类型：发明
国别省市：